简介:PrimerHunter是一款多重PCR引物设计软件,该软件能够高效地设计出具有特异性的多重引物,但是只能在Linux系统的命令行中运行,而且没有考虑引物二聚体的问题。针对这些问题,文章建立了基于PrimerHunter的多重PCR引物设计系统,实现了PrimerHunter的界面化,完成了C/S模式向B/S模式的转换,同时增加了原软件不具备的引物二聚体检测模块,能够有效检测引物对之间的二聚体情况,为相关生物学领域研究提供了一种高效的多重PCR引物设计工具。
简介:对伞房属CCR基因进行扩增,对影响PCR的条件进行优化,结果筛选出引物对A-3198适宜的PCR循环条件为:94℃预变性5min;94℃变性30s,60℃退火lmin,72℃延伸2min,运行30个循环;最后72℃后延伸7min。对伞房属树种进行PCR扩增时,发现用同一引物对,一个样本可以扩增出不同长度的条带。将目的片段进行克隆测序,得到6个序列。所分析的基因片段从Exon3-Exon5,其中Exon3变异位点具有3个,Intron3无变异位点;Exon4变异位点具有7个,Intron4变异位点最多,达到276个,Exon5变异位点也只有6个。从变异位点所占百分数分析,所有外显子包括Exon3、Exon4和Exon5,变异数百分率很低,从1.67%-1.98%,说明外显子是相对保守和稳定的。Intron3最稳定,无任何差异位点。Intron4差异最大,差异百分数高达,19.99%。在Intron4有4处插入发生。第1处插入发生在第2041-2067,插入27个碱基。第2处插入发生在第2127-2289,插入163个碱基。第3处插入为PolyA,6个样本都存在PolyA。第4处为SSR序列。在外显子上未发现2个或2个以上碱基的插入/缺失。从氨基酸的变异来分析,所发生的核苷酸变异很多是无义突变,只有Exon3的2个氨基酸、Exon4的3个氨基酸,以及Exon5的2个氨基酸发生有义突变。本试验于国内外首次发现伞房属树种CCR基因具有多拷贝现象,而在桉树另外2个属桉属和杯果木属的CCR研究中未曾发现。
简介:摘要:高中生物学基因工程的教学中PCR引物是在必修二DNA复制学习时没有学习到的内容,学生感觉难以理解,比如引物是什么,为什么需要引物,合适的引物怎么设计,怎么和基因工程有机的结合起来。教师可以结合学生已经掌握的知识在课堂中创设问题,解决这些难点问题。
简介:摘要目的分析探讨荧光定量PCR技术在α地中海贫血基因筛查与诊断中的实际应用。方法选择2014年1月-2014年12月之间来我院进行α地中海贫血基因筛查诊断的800例孕妇作为观察对象,使用荧光定量PCR技术进行筛查。对其中得到的阳性标本使用传统基因诊断方式测定;同时通过血红蛋白电泳法筛查800例孕妇是否存在α地中海贫血。结果800例孕妇中有13例为α地中海贫血基因携带者,检出率为1.63%;这13例的基因分型分别为13例为缺失型、0例为突变型;应用传统经检测方法对孕妇进行筛查,得到与荧光定量PCR技术相同的结果;应用血红蛋白毛细管电泳技术得到的α地中海贫血孕妇有4例,检出率为0.5%。结论应用荧光定量PCR技术对育龄期的孕妇进行α地中海贫血筛查的结果可靠,对于预防缺陷新生儿的出生具有非常重要的意义。