简介:目的:建立从红花组织中快速分离总RNA的方法,为进行反转录PCR(RT—PCR)、快速扩增cDNA末端(RACE)、蛋白质印迹法及其他分子生物学实验奠定基础。方法:采用改良Trizol法提取红花苞叶总RNA时,加入DNaseⅠ消化残留DNA,并加入RNase抑制剂,利用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法进行纯度和浓度检测。RT—PCR后,进行cDNA-序列相关扩增多态性(SRAP)分析。结果:抽提的RNA经电泳检测,可见28S、18S、5SRNA三条带,带的亮度强,且28S的宽度是18S的2倍左右。紫外吸光度D260/D280为1.8~2.0,D260/D230为2.0~2.3。总RNA产物进行cDNA-SRAP扩增,出现清晰的条带。结论:改良Trizol法所提取的RNA纯度高,质量好,完整性好,可成功进行cDNA-SRAP扩增。
简介:【摘要】 目的 采用 A, B, C三种提取方法提取黄芪中黄芪甲苷,通过比较方法 A,B,C的提取纯化时间、溶剂用量及含量检出,筛选出一种简单、有效的黄芪药材含量测定的提取方法 ,并通过 HPLC-ELSD对黄芪甲苷含量测定分析方法进行线性范围、回收率、稳定性等验证,确保此方法准确可靠。方法 采用 3种不同的前处理方法 A,B,C制备药材供试品溶液,利用 HPLC-ELSD测定黄芪药材供试品溶液中黄芪甲苷的含量,色谱柱为 Capcell Core C18 (4.6mm×150mm,2.7μm);流动相为乙腈—水 (32:68);柱温: 29.99℃;流速: 1.0mL/min;蒸发光检测器 (ELSD),雾化温度: 110℃,蒸发温度: 40℃;气体流速: 1.40SLM。结果 通过 3种方法的提取时间、溶剂用量和含量综合比较,方法 B均优于方法 A和方法 C,且黄芪甲苷的进样量在 0.32675-1.30700μg范围内线性关系良好 (R2=0.999),平均回收率为 95.92%, RSD=1.23%,在 48h内稳定性较好, RSD=0.0876%。结论 方法 B对样品提取简单,加样回收率高,稳定性好,结果准确可靠,可作为黄芪药材中黄芪甲苷含量测定方法。