简介：目的探讨pVEGF165-IRES-Ang-1重组双顺反子质粒在大鼠骨髓间充质干细胞（bonemarrow-derivedmesenchymalstemcell,MSC）中表达的情况,为下一步的动物实验奠定基础.方法构建插入人血管生成素-1（angiopoietin,Ang-1）和人血管内皮细胞生长因子165（vascularendothelialgrowthfactor165,VEGF165）双顺反子的pIRES重组质粒,经脂质体转染大鼠MSC,以实时荧光定量PCR技术分析各基因人源、鼠源以及总mRNA的动态变化.结果所构建的pVEGF165-IRES-Ang-1双顺反子重组质粒在大鼠MSC中成功表达了相应蛋白.人VEGF165得以高丰度表达,且在转染1d后mRNA检出的拷贝数最高;人Ang-1在4个检测时间点中的mRNA拷贝数比较稳定,但转录本的拷贝数较VEGF165显著降低;转入人Ang-1和人VEGF165后,各对应同源蛋白的总mRNA有显著增加,但大鼠MSC自身Ang-1与VEGF164的编码mRNA明显有下调趋势.结论pVEGF165-IRES-Ang-1重组双顺反子质粒双基因表达量明显不一致,表现为受插入的位置关系影响,且可能受转染细胞内同源蛋白的总量调控.

简介：由遗传基因决定的人类最高自然寿限是100～120岁。抗衰延寿应是指健康地活到或接近最高自然寿限。90岁以上长寿老人已基本达到这一目标，他们的养生长寿经验一直是古往今来研究的热门话题．不同学者提出了大量而多种多样的观点，令人无所适从。本文就作者长期调查研究所见，综合出较有代表性的核心长寿经验，并认为如能坚持不懈身体力行，应是抗衰延寿最实际措施。

简介：目的MTT法是评价细胞增殖的常规方法，但有时有一定的假阳性率。本文从细胞衰老角度进行研究，探讨假阳性率产生的原因和改进方法。方法使用能引起细胞衰老的抗肿瘤药物博来霉素和博宁霉素，处理人子宫颈癌HeLa细胞和人乳腺癌MCF-7细胞，采用MTT、SRB、台盼蓝染色计数法和克隆形成率等方法检测细胞增殖的抑制作用；衰老相关的β-半乳糖苷酶染色确定衰老细胞。结果低浓度的博宁霉素处理MCF-7细胞，明显引起细胞衰老。MTT法测得的IC50值最大，SRB和台盼蓝染色计数法测得的IC50值次之，克隆形成率法最为敏感，测得的IC50值最小，达到了nM级。结论细胞衰老明显影响一些抗肿瘤药物的MTT评价结果，使用克隆形成率法是最为可靠的克服细胞衰老影响的方法。

简介：目的建立体外培养成骨细胞的方法。方法应用机械和酶解方法．从新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞。用偶氮染色法和钙钴法检测细胞碱性磷酸酶活性；VonKossa染色显示细胞结节内有钙盐沉淀；形态观察可见矿化结节及其形成过程。结果体外培养细胞显示成骨细胞的生物学特性。结论这一体外培养的细胞模型的建立．为开展成骨细胞生物学的研究．探索骨质疏松的相关因子与骨质增生症的病因提供了基础。