简介:摘要本文通过查阅近年来国内外有关免疫分析技术的文献,并进行详细研究,对该技术的基本原理、分类及各类方法的临床应用等方面进行了综述。
简介:目的对结核分枝杆菌的蛋白抗原进行初步分析,制备抗结核分枝杆菌的特异单克隆抗体,探讨特异性免疫荧光法在痰标本结核分枝杆菌检查上应用的可行性。方法采用丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白免疫印迹技术对结核分枝杆菌的蛋白抗原进行初步分析,确定特异、免疫原性强的蛋白抗原,制备抗特异蛋白抗原的高效价单克隆抗体,采用饱和硫酸铵粗提,SephadexG-50层析纯化;同时制备高效价的抗结核分枝杆菌免疫血清。用异硫氰酸荧光素(FITC)标记,初步应用于临床痰涂片的检测。结果获得4株针对结核分枝杆菌38×10^3蛋白抗原的单克隆抗体,ELISA检测小鼠腹水单克隆抗体效价达到1:6400~1:12800。建立了直接荧光抗体染色方法,60份临床疑似肺结核病人痰标本,用抗酸染色法、结核分枝杆菌免疫血清和单克隆抗体免疫荧光法三种方法检测,阳性率分别为:36.7%(22/60)、58.3%(35/60)和56.7%(34/60),其中,抗酸染色阳性22份标本,两种免疫荧光法检查均为阳性,符合率100%。结论成功制备出抗结核分枝杆菌38×10^3蛋白的单克隆抗体。免疫荧光法检查痰标本结核分枝杆菌阳性率大大高于抗酸染色,具有良好的应用前景。
简介:目的表达肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的融合蛋白GST-AatA,获得单克隆抗体。方法人工合成肠出血型大肠埃希菌O104∶H4的转运蛋白基因aatA,连接至pMDl8-T载体,转化E.coliDH5α,双酶切回收,构建原核表达质粒PGEX-6P-1-GST-AatA,测序鉴定后,转化E.ColiBL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和WesternBlot分析目的蛋白的表达并纯化该重组蛋白。将纯化后的融合蛋白GST-AatA免疫Balb/c小鼠,制备相应单克隆抗体;并对该单克隆抗体的纯度、亚型、效价、特异性进行鉴定和分析。结果构建的原核表达载体PGEX-6P-1-GST-AatA能表达融合蛋白GST-AatA;亲和层析纯化后融合蛋白GST-AatA纯度达到95%,免疫小鼠后得到相应特异性单克隆抗体。结论成功制备出一株抗转运蛋白AatA的单克隆抗体,该抗体为IgG1亚型,特异性好,效价高,纯度可达97%。
简介:目的获得兔抗人成熟型转化生长因子-β1(TGF-β1)多克隆抗体,并将其初步应用于临床检测。方法将人成熟型TGF-β1融合蛋白经亲和层析法纯化,并将其作为抗原免疫家兔,获得兔抗血清,经饱和硫酸铵纯化,获得初步纯化的兔抗人TGF-β1多克隆抗体。采用双抗夹心间接酶联免疫吸附试验(ELISA)测定健康对照者、慢性肝病及肝硬化患者血清TGF-β1的OD值。结果获得初步纯化的兔抗人TGF-β1特异性多克隆抗体,该抗体能与人TGF-β1起反应。各组血清TGF-β1的检测OD450值为:轻、中度慢性肝炎组11.333±6.136,慢性重症肝炎组16.400±6.959,肝硬化组14.975±6.090,健康对照组7.275±3.222;前三组分别与健康对照组比较,差异均有显著性(P〈0.01);慢性重症肝炎组、肝硬化组分别与轻、中度慢性肝炎组比较,差异亦有显著性(P〈0.01)。结论制备的TGF-β1多克隆抗体可初步用于临床检测,判断肝纤维化程度。
简介:摘要 目的 制备肺炎支原体(MP)P116蛋白,通过免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体。方法 克隆MP P116基因N端的609bp基因片段,构建PQE-80L-609表达载体。诱导蛋白表达,用确诊感染患者血清作一抗,通过Western blot检测获得蛋白的免疫反应性。用纯化的蛋白与制备好的多克隆抗体作Western blot,检测其免疫原性。结果 成功构建了PQE-80L-609表达载体并表达纯化出约27ku的P116-609蛋白。用表达的蛋白免疫新西兰兔获得了多克隆抗体,效价大于1:6400。纯化后的蛋白抗原与确诊感染病人血清和获得的多克隆抗体均具有免疫印迹。结论 进一步证明了MP P116蛋白具有较好的免疫原性,产生的多克隆抗体可以应用于后续的相关实验。
简介:目的KIAA1199是一种功能未知的胞浆蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础.方法采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pMAL-C2X和pGEX-5X-1原核表达载体中.经IPTG诱导后,重组质粒pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199,分别表达含麦芽糖结合蛋白(MBP)的MBP-KIAA1199融合蛋白和含重组谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白GST-KIAA1199.其中,MBP-KIAA1199融合蛋白经纯化后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;GST-KIAA1199融合蛋白用于检测抗体特异性.此后应用ELISA及Westernblot方法鉴定该抗体.结果pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199两个重组质粒构建成功,并获得了高效价的特异性多克隆抗体.结论成功制备了KIAA1199抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础.
简介:摘要目的阐明人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽的基因克隆过程,获得人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽克隆载体,为后续构建Hespintor原核表达载体奠定基础。方法提取pMD19-TSimpleVector-Hespintor克隆质粒后,应用RT-PCR法扩增Hespintor成熟肽基因片段,对Hespintor成熟肽克隆载体进行构建,及双酶切反应鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳,在约230bp处可见1条特异性条带;蓝斑和白斑斑点数量比对大约为11,说明转化效率大约为50%左右;经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,约230bp处的条带为所克隆的人丝氨酸蛋白酶抑制因子Hespintor成熟肽基因片段。结论重组克隆质粒pMD19-TSimpleVector-Hespintor成熟肽基因构建成功。
简介:摘要目的了解核心抗体和e抗体双抗体阳性与HBV-DNA含量相关性,并分析其临床意义。方法应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检验300例双抗体阳性HBV-DNA含量。结果核心抗体与e抗体双抗体阳性的健康体检人群中HBV-DNA阳性率为3.61%。结论乙肝核心抗体与e抗体阳性的健康体检人群中极少数仍存在病毒复制,具传染性。在乙肝核心抗体与e抗体阳性的健康体检人群中进行HBV-DNA检测是很有必要的。
简介:目的比较人的血液和尿液样本中HIV-1抗体的一致性.方法在广东省两所劳动教养所收集346名HIV高危者的血液和尿液样本,分别用血液和尿液ELISA初筛试剂检测HIV-1抗体.结果346份血液和尿液样本各18份阳性,其中有17人的血液和尿液平行样本均为HIV-1抗体阳性,血液和尿液样本HIV-1抗体检测的一致性为99.4%.结论在采集血液样本不便的情况下,可利用尿液初筛诊断试剂进行HIV感染的筛查和监测.