简介:摘要目的构建hIL-10基因的酵母表达载体,为hIL-10在毕赤酵母高效表达和生物学功能研究奠定基础。方法采用PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增hIL-10基因,以内切酶EcoRI/XbaI对hIL-10基因和质粒pPICZαA进行酶切,将酶切产物进行连接,纯化连接产物并电转化E.coliDH5α,用含Zeocin的LB培养基筛选重组大肠杆菌并抽提质粒进行酶切和DNA测序鉴定;以重组质粒电转化感受态毕赤酵母,以不同浓度Zeocin的YPDS平板筛选重组酵母菌株并对重组酵母作菌落PCR鉴定。结果经PCR从质粒pORF5-hIL-10中扩增获得大小约540bp的片段;重组质粒经EcoRI/XbaI酶切后获得约540bp和3500bp的两种片段;DNA测序结果与Genbank中hIL-10基因序列一致;重组酵母经菌落PCR也获得540bp的片段。结论成功构建了hIL-10基因的酵母表达载体pPICZαA-hIL-10。
简介:摘要导游业务课是一门实用性很强的专业技能课,通过教学,希望学生全面了解导游服务的发展历程和发展趋势,掌握导游服务程序与规范、导游带团、讲解、心理服务能力和特殊问题的处理及应变能力。