简介：目的：参照美国国家实验室标准委员会（NCCLS）的EP9-A2文件，对测定血清中甲胎蛋白（AFP）含量的电化学发光免疫法和光激化学发光法进行方法学比对试验，比较二者结果的-致性。方法：收集40例患者血清标本，以罗氏Cobas601电化学发光免疫分析仪为比较仪器（Ⅳ），博阳LICA光激化学发光免疫分析仪为实验仪器（Y），同时检测血清中AFP的含量；分析2种生化仪测定结果之间的相关性和2种方法检测结果的-致性。结果：2种仪器测定的结果相关性良好（r=O．9925），预期偏倚可以接受。结论：在严格按操作规程进行检测的前提下，2种方法测定结果基本-致，其偏差可为临床所接受。当同-实验室同-检验项目存在2种以上检测方法时，应进行方法比对，判断其临床可接受性，以保证检验结果的可比性。

简介：目的：探讨化学发光法在梅毒实验诊断中的应用价值。方法：采用化学发光法、RPR法、TPPA法分别检测150例梅毒患者及125例非梅毒患者血清。结果：化学发光法、RPR法、TPPA法对150例梅毒血清标本和125例非梅毒血清标本对照组的敏感性分别为98．0％、75-3％和97．3％，特异性分别为98-3％、81．6％和97．5％。化学发光法、TPPA法敏感性和特异性明显高于RPR法，差异有统计学意义（P〈0．05）；化学发光法和TPPA法相比，敏感性和特异性差别不大，差异没有统计学意义（P〉0．05）；联合3种方法检测，梅毒诊断阳性率可提高到100％。结论：梅毒的化学发光检测法具有极高的敏感性和特异性，是一种自动化、定量检测方法，能够用于梅毒的准确诊断和疗效观察，与传统方法联检可防止误诊、漏诊，具有较大的临床应用价值。

简介：目的：利用荧光定量PCR技术,建立快速敏感特异的检测产气荚膜梭菌的方法。方法：以产气荚膜梭菌基因为靶序列设计引物和探针,以自产气荚膜梭菌菌株中提取的DNA为模板,优化引物和探针的浓度比,同时验证方法的特异性、敏感性。结果：建立的反应体系在上游引物浓度为0.45μmol/L、下游引物浓度为0.15μmol/L、探针浓度为0.3μmol/L时,具有良好的特异性和敏感性,与创伤弧菌等12种相关细菌均无交叉反应;对纯菌检测的灵敏度低于10CFU/反应体系。结论：建立的实时荧光PCR方法特异、灵敏、快速,能对战时气性坏疽做出快速准确的报告,实现对这种战时高发疾病的安全、快速和定量检测。

简介：自发光学信号成像系统是近年来比较新颖的一项用于活体生物的基因或细胞活动的微观检测的光学技术,具有直观、操作简便以及分辨率高的特点。该技术主要分为生物发光成像技术和荧光成像技术,目前主要用于测定活体动物体内的细胞以及分子的活动或变化情况。由于该技术能够对动物体内的微观形态的变化进行精确的捕捉,对于癌症、基因表达、肿瘤以及其他病变均具有较好的监测作用。在本文中,将就自发光学信号成像系统在生物成像中的发展与应用进行详细的阐述。

简介：荧光光谱法是目前我国药物分析的主要方法,在我国各科研机构的应用广泛,具有一定的优势.荧光光谱法能够从分子之间的相互作用中分析药物的分子的相互作用,在药物分析中具有非常广阔的发展前景.荧光光谱法的主要原理,是根据不同物质在光照下的不同反射颜色和强度为主,根据反射光分析物质的原理.本文主要对荧光光谱的传统分析方法、新型分析方法以及与其他方法之间的联用三个部分进行分析,总结荧光光谱法在药物分析中的应用,并做发展展望.

简介：目的：建立李痘病毒（PPV）特异、灵敏、快速的实时荧光定量RT-PCR检测方法,用于核果类种苗的健康评测及李痘病毒疫情监测。方法：根据PPV-D株系和PPV-M株系的外被蛋白（CP）基因保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,扩增全长CP基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上,构建质粒标准品,建立PPV的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估。结果：此荧光定量RT-PCR方法对PPV检测呈现高灵敏度和高特异性,与马铃薯Y病毒和马铃薯X病毒无交叉反应,最低检出限可达1.6×10^2拷贝/μL,标准曲线的相关系数为0.99918。结论：建立了李痘病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,可望应用于检验检疫部门对李痘病毒的快速检测

简介：目的：通过多点突变构建增强型青色荧光蛋白（ECFP）慢病毒表达载体。方法与结果：根据增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和ECFP基因序列的差异设计3对引物,以pLentiLox3.7-EGFP为模板进行分段PCR扩增,再以分段PCR扩增产物为模板扩增出突变的ECFP基因片段,将其与载体连接,得到ECFP慢病毒表达载体pLentiLox3.7-ECFP,测序结果证实经过多点突变扩增的ECFP片段基因序列完全正确;磷酸钙介导pLentiLox3.7-ECFP在293T细胞中表达,48h后在荧光显微镜下观察到青色荧光蛋白。结论：通过多点突变的方法得到了ECFP慢病毒表达载体。

简介：建立了从肉骨粉中提取DNA的稳定、简便易操作的方法.根据牛、羊线粒体DNA基因片段设计特异性引物和TaqMan探针,建立了实时荧光PCR技术检测肉骨粉中牛、羊源性成分的快速、特异、敏感的方法.

简介：荧光漂白后恢复（FRAP）是一项利用荧光探针研究活体细胞中各类分子迁移特性的技术。简要介绍了FRAP技术的原理和具体实施要求,列出了动态比和扩散系数的计算公式,并例举了近几年FRAP技术在细胞分子机制研究中的应用。

简介：目的:利用喷雾干燥工艺制备芽孢杆菌dhs-330-021菌粉,并研究菌粉的活性及稳定性。方法:以脱脂乳、海藻糖、β-环糊精和谷氨酸钠为保护剂,采用喷雾干燥(条件为:进口温度100℃,出口温度50~60℃,进样速度2~4mL/min)制备芽孢杆菌菌粉,以喷干存活率和菌粉活菌数为指标,选择最佳制备条件。结果:获得喷干保护剂配方为脱脂乳10.0%、海藻糖6.0%、β-环糊精13.0%、谷氨酸钠15.0%,喷干存活率为65.9%,菌粉活菌数为1.38×10^9CFU/g,存放180d后菌粉活菌数为1.03×10^9CFU/g。结论:喷雾干燥工艺可以用于芽孢杆菌dhs-330-021菌粉的制备,获得的菌粉稳定性较好。

简介：目的:构建表达基因编辑钙探针(GECIs)的细胞系HeLa-GECIs,探究细胞应答外界ATP刺激中钙离子在细胞内的响应和变化。方法:分别用能够直接通过荧光强度反映细胞胞浆内和线粒体内钙离子相对浓度的2种钙探针cyto-GCaMP6和4mt-GCaMP6感染HeLa细胞,获得2种表达钙离子探针的HeLa细胞系;在感染了2种腺病毒探针24h后,用共聚焦荧光显微镜检测荧光探针在HeLa细胞内的表达情况;在表达2种钙探针的细胞的培养基中加入外源ATP,用Time-lapse成像动态观测技术观察HeLa细胞内钙离子对外环境中ATP的响应。结果:共聚焦荧光显微镜观察,确定95%以上的细胞表达了对应的钙离子指示荧光探针;Time-lapse成像动态观测技术观察发现,在细胞培养基中加入ATP后,细胞胞浆钙探针荧光强度瞬时(3~6s)升至10倍,200s后逐渐降低到基础水平;线粒体钙到达峰值(4倍)的时间稍滞后(5~8s),并且回落更慢,300s时至1.5倍。在ATP受体P2X7抑制剂A438079预处理的实验组,上述胞浆钙和线粒体钙浓度上升不明显。结论:构建了能在活体细胞内通过荧光探针实时监测钙离子响应胞外ATP刺激的细胞实验体系,为进一步深入探究ATP等危险信号导致细胞的炎性损伤机制奠定了基础。

简介：

简介：目的：构建带Myc标签的LC3B—PLA2基因的真核表达质粒，获得LC3B—PLA2融合蛋白，并应用LC3B—PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法：以本实验室保存的乳腺文库为模板，PCR扩增获得LCgB序列，与PLA2G]O拼接后插入pCMV—Myc载体，用构建的重组质粒转染HEK293T细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，用LC3B—PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果：菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功，Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达，LC3B—PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论：构建了pCMV—Myc—LC3B—PLA2真核表达质粒，LC3B—PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要，为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。

简介：HISCL-5000高敏发光全自动免疫分析仪以化学发光酶免疫测定法为工作原理,用碱性磷酸酶标记检测化学发光,采用目前最快速、最灵敏的化学发光底物CDP-Star,曝光时间只需15～60s。反应在液体中进行,实现了短时间内的高效率反应,反应时间可短至17min。我们根据美国临床和实验室标准化协会颁布的EP系列文件,对HISCL-5000分析仪的分析性能进行评价,对相关研究进展做一综述。

简介：C3d是补体C3不可再被酶解的最小片段,在抗原特异性免疫建立之前,C3d可识别非己抗原并与之共价结合,增强了抗原递呈细胞的递呈能力、降低了B细胞的活化阈、提高特异性抗体的滴度、促进抗体亲和力成熟等.近年来研究显示,C3d还可以促进抗原特异性细胞免疫应答水平并改变机体免疫应答模式.所以,C3d是连接固有性免疫和获得性免疫的桥梁.本文对C3d的分子生物学特征、生物学功能以及作为分子佐剂可能的分子机制进行了简要总结.

简介：Threetypesofroughsurfacewereprocessedbylaserirradiationonthe3Cr2W8Vmaterialhot-workdiesteelsurface.Thewearexperimentswithsmoothsurfaceandroughsurfacesampleswererepeatedonthepin-traywearmachine.Accordingtothewearresults,westudiedtheregularityofwearresistanceofdifferentroughsurfacesamples.Theresultsindicatedthatbionicroughsurfacecanimprovethewearresistanceofthematerialandthewearresistancecanbeincreased1-2times,comparedwiththesmoothsurface.Also,thewearresistanceoftheroughsurfacewasaffectedbylasercurrentanddurationofimpulse.Thebiggerthelasercurrentortheimpulseduration,thebetteristhewearresistance.Whenthedistancebetweenthesamekindofunitswhicharedistributedonthesurfacesischanged,thewearresistancechanges.Thewearresistanceofabionicroughsurfaceonwhichthegridunitsweredistributedatspacingof1mmwasthebest.Andwedesignedthewearmodels.

简介：目的：探讨胸骨旁肺动脉长轴切面在肺动脉高压肺动脉内径测量中的诊断价值。方法：对61例肺动脉高压患者在大血管短轴切面、肺动脉长轴切面测量肺动脉主干内径，并分别与CT测量结果进行对照。结果：大血管短轴切面测得的肺动脉内径与CT测值有显著性差异，肺动脉长轴切面与CT测值相关性好。结论：肺动脉长轴切面测量肺动脉内径明显优于大血管短轴切面。

简介：大环内酯类抗生素基因工程是近年来生物工程领域研究的一个热点,利用基因工程改造大环内酯类抗生素合成基因,已经合成了100多种"非天然”的天然化合物,为筛选新抗生素开辟了新的途径.本研究以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模板,先用PCR扩增出红霉素合成基因eryKR6两侧片段,再用重叠PCR将其拼接成去除KR6的约3.2kbDNA片段,并克隆于pWHM3载体,构建了同源重组质粒pWHM2201.用PEG介导将pWHM2201转入糖多孢红霉菌A226原生质体.PCR鉴定和生物活性检测均显示pWHM2201已重组到红霉素合成基因位点.在无抗性R3M斜面上生长两代后,制备重组体原生质体,并涂R3M平皿.利用PCR筛选出KR6敲除的突变体糖多孢红霉菌M.

简介：利用O－超家族芋螺毒素具有保守信号肽编码序列的特性，采用RACE方法，对线纹芋螺O－超家族芋螺毒素的cDNA进行克隆、序列测定，并经化学合成，获得一种新型高活性芋螺多肽毒素SO3。该肽含25个氨基酸残基，其序列为CKAAGKPCSRIAYNCCTGSCRSGKC－NH2，有三对二硫键。对其进行了正确折叠及活性筛选。结果表明，该肽折叠主峰对小鼠脑内给药100ng，可明显观察到小鼠颤抖现象，对小鼠有明显的镇痛作用，而非正确折叠则无反应。

简介：利用构建的犬2型腺病毒E3区缺失质粒pBE3L分别构建了含有和不含外源性启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因和狂犬病病毒糖蛋白(Rgp)基因的重组表达质粒pBE3LGFP、pBE3LCGFP、pBE3LRgp和pBE3LCRgp,并分别对DK细胞进行了转染实验,以检测其表达,结果显示,pBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后,于36h即可观察到荧光,72～96h无明显差别,传3代后仍可见表达荧光的细胞,pBE3LCRgp质粒转染DK细胞后,于48～96h用间接免疫荧光染色可检测到糖蛋白的表达,而pBE3LGFP和pBE3Rgp质粒转染DK细胞后经检测均无表达,表明构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的基因的表达,但利用外源性启动子可使外源基因获得良好表达.