简介：摘要目的观察Bufalin(蟾蜍灵)、AMD3100(普乐沙福)作为药物单独或联合作用于胆囊癌细胞株(GBC-SD)后，观察其对细胞增殖、迁移、凋亡以及CD133表达的影响，探讨其在胆囊癌中的作用。方法收集2017年1月至2021年12月郑州大学第二附属医院手术切除的胆囊癌标本20例，通过免疫组织化学法检测CD133在肿瘤以及癌旁组织的表达的差异。用不同浓度的Bufalin(80、160、320 nmol/L)；AMD3100(10、20、40 μmol/L)及联合用药(Bufalin 160 nmol/L+AMD3100 20 μmol/L)干预人胆囊癌(GBC-SD)细胞，细胞计数试剂盒(CCK-8)法观察药物对肿瘤细胞增殖产生的影响，Transwell小室法检测肿瘤细胞迁移能力，膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)法检测细胞凋亡，流式细胞法检测细胞CD133分子表达。率的比较采用χ2检验，组间比较用单因素及双因素方差分析。结果免疫组织化学结果示CD133分子在人胆囊癌组织中的阳性表达率为85%，明显高于癌旁组织表达率[30%，χ2＝10.23，P<0.01]，表达定位于胞质和胞核，流式结果显示CD133在GBC-SD细胞中阳性表达。Bufalin(80、160、320 nmol/L)作用(24、48、72 h)后与对照比较实验组细胞增殖受到明显抑制(F＝21.389、57.231、73.444，P<0.05)。160 nmol/L的Bufalin作用后细胞迁移数为(114.33±5.51)，明显低于对照组(270.67±13.65，F＝241.989，P<0.01)。CD133分子表达水平为(1.48±0.14)，低于对照组(3.22±0.46，F＝202.589，P<0.01)，细胞凋亡率[(32.57±0.69)%]高于对照组[(16.35±0.33)%，F＝171.288，P<0.01]。AMD3100组中，与对照组比较AMD3100 20 μmol/L作用48 h细胞活性为(87.58±7.10)%，40 μmol/L作用48 h为(67.84±0.75)%(F＝57.231，P<0.05)，40 μmol/L作用72 h[(72.57±10.23)%，F＝73.444，P<0.05]使细胞增殖明显受抑。40 μmol/L的AMD3100作用后，与对照组细胞迁移个数[(270.67±13.65)个]明显低于实验组[(193.33±8.08)个，F＝241.898，P<0.01]。CD133分子表达水平实验组为3.07±0.11，对照组为3.22±0.46，差异无统计学意义(F＝202.589，P>0.05)。凋亡率对照组为(16.35±0.33)%，实验组为(16.37±1.81)%，差异无统计学意义(F＝171.228，P>0.05)。联合用药组(Bufalin 160 nmol/L+AMD3100 20 μmol/L)与对照组比较各时间(24、48、72 h)细胞增殖均受到抑制(F＝21.389、57.231、73.444，P<0.05)；细胞迁移个数为(270.67±13.65)个，实验组为(133.67±6.50)个，差异有统计学意义(F＝241.898，P<0.01)。CD133分子表达水平(2.19±0.68)低于对照组(3.22±0.46，F＝202.589，P<0.01)。细胞凋亡率[(33.58±1.67)%]高于对照组[(16.35±0.33)%，F＝171.228，P<0.01]。结论CD133在GBC-SD细胞中阳性表达，在胆囊癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织。Bufalin、AMD3100可抑制胆囊癌细胞增殖、迁移。Bufalin单独以及与AMD3100联合用药抑制胆可囊癌细胞增殖、迁移、并促进细胞凋亡、抑制CD133分子表达。

简介：摘要目的观察白细胞介素-33(IL-33)在胆囊癌组织中的表达，并探讨沉默IL-33的表达对胆囊癌细胞增殖、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法收集20例通过手术切除的胆囊癌组织标本，采用免疫组织化学技术检测组织中IL-33的表达，然后将IL-33小干扰RNA(siRNA)转染进人胆囊癌GBC-SD细胞，通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法筛选出沉默效率较高的一条siRNA用于后续实验。将实验分为IL-33 siRNA组、未转染组(Blank组)和阴性对照组(NC组)，通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法和Transwell小室法分别探索siRNA沉默IL-33后对胆囊癌细胞增殖和侵袭能力的影响。通过蛋白质印迹(Western blot)法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平。率的比较采用χ2检验，两组以上数据采用单因素方差分析，使用Bonferroni法进行组间两两比较。结果IL-33在胆囊癌组织中的阳性表达率(90%)高于正常组织(40%)，差异有统计学意义(χ2＝8.901，P<0.05)。IL-33 siRNA组胆囊癌细胞在24、48、72 h的吸光度值和侵袭数目显著低于Blank组和NC组(24 h吸光度值分别为1.25±0.07、1.49±0.05、1.48±0.08，48 h吸光度值分别为1.51±0.02、2.15±0.10、2.08±0.02，72 h吸光度值分别为1.80±0.05、2.38±0.07、2.31±0.10，侵袭数目分别为50.25±9.29、243.00±24.32、217.25±14.97)，差异有统计学意义(F＝12.150、101.400、41.790、145.700，P<0.05)。IL-33 siRNA组中Vimentin的表达低于Blank组和NC组(0.66±0.01、0.87±0.06、0.86±0.04)，差异有统计学意义(F＝24.710，P<0.05)，IL-33 siRNA组中E-cadherin的表达高于Blank组和NC组(0.32±0.02、0.12±0.01、0.17±0.02)，差异有统计学意义(F＝121.000，P<0.05)。结论IL-33在胆囊癌肿瘤组织中高表达。siRNA沉默IL-33表达后，胆囊癌细胞的增殖和侵袭能力均受到了抑制，同时减弱了EMT过程。