常用的HIV检测方法

1.秦小喻  2.张陈维通讯作者

1.秀山土家族苗族自治县中医医院 重庆 409900     2.秀山土家族苗族自治县妇女儿童医院 重庆 409900

艾滋病主要是由人类免疫缺陷病毒感染导致的，造成人体免疫功能缺陷。HIV可以通过血液传播、性传播和母婴传播等多种途径进行传播，HIV可以对人体的免疫系统造成严重破坏，使患者发生反复感染，疾病后期会继发肿瘤、中枢神经系统病变以及多重感染性疾病。目前，对于艾滋病的预防和治疗来说，既没有疫苗也没有特效药物，人体一旦感染HIV只能制定相应的治疗方案对其病程加以控制，延长个体生命，提升其生活质量。所以，无论是HIV感染者、高危人群或健康人群，想要及时了解自身HIV受感染的情况，选择合适的检测方法尤为重要，在这里我着重介绍几种常用的检测技术。

一、酶联免疫法

酶联免疫法（ELISA）在HIV检测中是一种常用的血清学免疫测定方法，该方法基于抗原-抗体特异性反应的原理，利用合成多肽或重组抗原作为试剂，与HIV抗体和固相载体表面结合，以酶标记的抗原（或抗体）进行免疫测试，检测血清中的HIV抗体。在测定时，受体标本以及酶标抗原按不同步骤和固相载体表面抗原（或抗体）发生反应，通过洗涤，分开抗原抗体复合物和其他物质，最后可结合在固相载体上的酶量以及标本中受检物质的量呈一定比例。然后加入酶反应底物后，底物会被酶催化成有色产物，产物的量和标本中受检物质的量呈正相关，故可以观察颜色深浅进行分析。

酶联免疫法将酶催化反应的放大作用和抗原抗体反应的特异性相结合，其优点是：检测速度快、费用低廉、自动化程度高且具有大规模检测的能力。缺点是：对于某些特殊人群，如免疫缺陷患者，由于体内抗体产生不足可能导致假阴性结果。故它是HIV筛查的常用方法之一。

二、化学发光免疫分析法

化学发光免疫分析法（Chemiluminescent Immunoassay）是一种将化学发光系统与免疫反应相结合而建立的微量生物活性物质检测技术，这种方法结合了化学发光的高敏感性和免疫反应的高特异性，在医学研究、临床诊断和药物开发等领域具有广泛的应用。目前市面上使用的化学发光免疫分析技术种类繁多，这里我介绍两种临床最为常用的方法。

1.直接化学发光免疫分析法（Direct Chemiluminescence Immunoassay）

在直接化学发光免疫分析法中，特定的标记物（如吖啶酯）直接标记在抗体（或抗原）上，当这些标记的抗体与待测样本中的相应抗原（或抗体）发生免疫反应时，会形成一个复合物。随后，通过加入特定的试剂（如氧化剂和碱性溶液），标记物会在没有酶催化的情况下直接分解并发出光。这种发出的光的强度与待测抗原（或抗体）的量成正比，因此可以通过测量光的强度来确定待测物质的浓度。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物（acridinium ester），它是有效的发光标记物，其通过启动发光试剂（NaOH -H2O2）作用而发光，强烈的发光在一秒钟内完成，为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析，其化学反应简单、快速、无需催化剂，检测小分子抗原采用竞争法，大分子抗原则采用夹心法，且与大分子的结合不会减小所产生的光量。这种方法具有高灵敏度、高特异性和操作简便等优点。

2.化学发光酶免疫分析法（Chemiluminescence Enzyme Immunoassay）

通过酶标记的抗原或抗体与待测样本中的相应抗体或抗原发生免疫反应，形成酶标记的免疫复合物。从标记免疫分析角度来看，化学发光酶免疫分析属于酶免疫，只是其反应的底物是发光剂，操作步骤与酶免分析完全相同。以酶标记的生物活性物质（抗原或抗体）进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行测定。目前最常用的标记酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP），它们有各自的发光底物。这种方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。

化学发光免疫分析法是HIV筛查的常用方法之一。若受检者过了窗口期（4~6周）的检测结果为阴性，基本可以排除感染，但窗口期的长短也与该检测技术相关。因此，如果在高危行为发生后不久的，可能需要等待一段时间再做检测。

三、免疫印迹法

免疫印迹法（western blot）是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来的一项检测蛋白质的技术。它将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的高特异性相结合，第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快，此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。第二阶段为电转移，此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。第三阶段为酶免疫定位，将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色

，常用的HRP底物为3，3－二氨基联苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈蓝紫色）。阳性反应的条带清晰可辨，并可根据SDS-PAGE时加入的分子量标准，确定各组分的分子量。通过对这些组分的分析和解读，可以判断患者是否感染了HIV。

免疫印迹法是HIV确诊试验的检测方法，有很高的特异性和灵敏度。同时，该方法还可以用于区分不同亚型的HIV病毒，这对于了解病毒的传播途径、制定针对性的治疗方案等具有重要意义。

四、PCR技术

PCR技术（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是一种人工体外DNA扩增技术，其基本原理包括双链DNA在特定温度下加热分离成单链，然后引物与模板DNA的特定末端相结合，最后DNA聚合酶以单链DNA为模板合成新生的DNA互补链。这种技术可以扩增样本中含有的特定DNA片段，提高序列测定的灵敏度。此外，PCR技术还可以用于检测人体内HIV病毒的载量。

PCR技术具有很高的灵敏度，对于早期发现和监测HIV感染具有重要意义。虽然PCR技术优势明显，但并不能单独作为HIV感染的确诊依据。

综上所述，根据不同的需求对HIV进行筛查、诊断和监测目的的，我们可以选择合适的检测技术，并结合其临床表现和病史进行分析判断。