DNA检测技术分析血迹陈旧度的初探

徐兴驰，红星

内蒙古自治区呼伦贝尔市满洲里市公安局

摘要：在刑事侦查、法医学鉴定等领域，血迹分析一直是一个重要的技术手段。血迹的存在与否、血迹的种类、血迹的形态、血迹的分布等信息，都可以为案件的侦破提供重要的线索。然而，在实际应用中，由于血迹在环境中的保存时间较长，经常遇到的是陈旧血迹。陈旧血迹的分析难度相对较大，因此，如何准确地分析血迹的陈旧度，一直是法医学领域研究的热点之一。

关键词：DNA；检测技术分析；血迹陈旧度

1材料与方法

收集 2009 ~ 2018 年每年度各 2 份血滤纸检材，共 20 份血滤纸检材，均为本鉴定中心日常检案的检材。根据《法庭科学 DNA 实验室检验规范》（GA/T383-2014）标准，通过直扩法、Chelex-100 提取法、磁珠提取法等 3 种不同的 DNA 分析方法对陈旧的血滤纸进行检测。采用 1.2mm 打孔器对 20 份血滤纸检材进行取样，其中，直扩法取1 片血滤纸，Chelex-100 提取法与磁珠提取法取 3 片血滤纸，同时，加入 10% 的 Chelex-100悬 液 为 30µL， 磁 珠 提 取 法 的 洗 脱 液 亦 为30µL，其余步骤按照试剂说明书进行规范操作提取 DNA。采用 GoldeneyeTM DNA 身份鉴定系统 20A 试剂盒（基点认知，北京，简称 20A）进行扩增，2 种方法均为全模板扩增，即加入3.84µL 的 DNA 提取液，扩增热循环数为 30 个循环，其余步骤按照商业试剂盒说明书进行操作。采用 ABI-3130 遗传分析仪进行电泳分离和基因分型。利用 GeneMapper® ID V2.0 软件进行分型结果的分析。

2. 结果

经过长时间保存的血滤纸检材，其取样面积有限。为了确保基因分型的准确性，我们采取了严谨的策略，将每个血滤纸检材所得基因分型与先前检案的图谱进行详尽的对比。图1至图2展示了血滤纸检测所得的图谱。通过观察不同年份图谱中的峰高值和峰面积值，我们可以清晰地看到血滤纸存在降解趋势，且随着年份的推移，这种降解趋势愈发显著。

图1 检材编号为 1 的图谱

图2 检材编号为 18 的图谱

我们根据265bp作为大小片段的分界线，将基因座细分为小片段基因座和大片段基因座。其中，小片段基因座涵盖了D19S433、D5S818、D21S11、D3S1358、D13S317、D7S820、AMEL、vWA、D8S1179、TH01、D12S391和D2S1338，而大片段基因座则包括D18S51、D6S1043、D16S539、CSF1PO、Penta D、TPOX、Penta E和FGA。

为了更深入地研究，我们采用了三种不同的方法，并详细记录了大小片段的峰高值和峰面积值（参见表1至表3）。从表1中可以明显看出，无论是大片段还是小片段，直扩法的峰高值和峰面积值都是最高的，其次是磁珠提取法，而Chelex-100提取法的值则是最低的。

表1 不同年份检材直扩法的峰高和峰面积

（单位：千）

表2 不同年份检材 Chelex-100 提取法的峰高和峰面积

（单位：千）

表3 不同年份检材磁珠提取法的峰高和峰面积

（单位：千）

直扩法、Chelex-100提取法和磁珠提取法的峰高比值分别为3.24、4.13、3.31，而峰面积比值则分别为2.81、3.57、2.81。这表明直扩法和磁珠提取法在峰高和峰面积比值上相当接近，而Chelex-100提取法的峰高和峰面积比值则呈现出较大的差异。

3. 讨论

在我们的研究中，我们观察到了长时间保存的血滤纸检材中DNA的降解趋势。这种降解可能源于多种因素，包括环境因素、保存条件、检材处理过程中的物理和化学损伤等。我们发现在不同年份的检材中，随着保存时间的增加，峰高值和峰面积值呈现出逐渐下降的趋势，这进一步证实了DNA降解的存在。

此外，我们还比较了三种不同的DNA提取方法，即直扩法、Chelex-100提取法和磁珠提取法。结果表明，直扩法和磁珠提取法在峰高和峰面积比值上较为接近，而Chelex-100提取法的比值则与其他两种方法存在较大的差异。这可能是由于Chelex-100提取法在提取过程中，对于DNA的纯化效果较差，导致提取出的DNA中含有较多的杂质，从而影响了DNA的质量和电泳结果。

4发展建议

4.1技术创新与优化

尽管DNA检测技术已经在血迹陈旧度分析方面取得了一定的成果，但仍存在进一步优化的空间。未来，可以通过技术创新，提高DNA序列测序的准确性和稳定性，减少误差，从而提高血迹陈旧度分析的准确性。

4.2标准化与规范化

为了确保DNA检测技术在血迹陈旧度分析中的广泛应用和可靠性，需要制定相关的标准化和规范化操作流程。这包括样本收集、保存、运输、处理、DNA提取、PCR扩增、序列分析等环节，以确保实验结果的准确性和可重复性。

4.3多学科交叉融合

血迹陈旧度分析涉及生物学、化学、物理学、法医学等多个学科领域。为了更好地推动DNA检测技术在血迹陈旧度分析中的应用，需要加强多学科交叉融合，整合各领域的研究成果和技术手段，形成综合性的分析方法。

4.4加强培训与普及

DNA检测技术在血迹陈旧度分析中的应用需要具备一定的专业知识和技能。因此，需要加强相关人员的培训和普及工作，提高从业人员的技术水平和专业素养，确保DNA检测技术在血迹陈旧度分析中的正确应用。

4.5扩大应用范围

目前，DNA检测技术在血迹陈旧度分析方面的应用主要集中在法医学领域。未来，可以进一步扩大其应用范围，如犯罪现场调查、生物安全、环境监测等领域。这将有助于提高DNA检测技术在血迹陈旧度分析领域的实际应用价值和影响力。

结语：

总之，通过本研究，我们初步探讨了DNA检测技术分析血迹陈旧度的可行性，并比较了三种不同的DNA提取方法的效果。这些结果对于法医学领域的研究和实践具有一定的指导意义，有助于我们更好地理解和解析陈旧血迹中的DNA信息，为案件的侦破提供更多的线索和证据。

参考文献：

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