HPLC法测定不同产地云木香中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量

何丽芳唐新宗*

云南云河药业股份有限公司，云南个旧 661000

[摘要]目的检测云南不同地区木香药材中木香烃内酯、去氢木香内酯的含量。方法 采用HPLC法检测木香烃内酯、去氢木香内酯含量。色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水（65∶35）为流动相，流速1.0 mL/min，进样量10 μL，检测波长225 nm，柱温30℃。结果 木香烃内酯回归方程为：Y=1614.7X+27.322，R=0.9999，木香烃内酯进样量在0.2～3.0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；去氢木香内酯回归方程为：Y=1347.9X+20.361，R=0.9999，去氢木香内酯进样量在0.2～3.0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；木香烃内酯、去氢木香内酯加样回收率（n=9）分别为99.98%、99.94%。结论该方法可用于云南不同产地木香中木香烃内酯、去氢木香内酯含量检测，该方法简便易行、准确可靠。

[关键词]木香；木香烃内酯；去氢木香内酯；高效液相色谱法

Determination of costunolide and dehydrocostus-lactone in Aucklandiae Radix Produced in Different Areas of yunnan by HPLC

HE Li-fang , TANG Xin-zong*

YunNan YunHe Pharmaceutical INC. Ge Jiu 661000, China

[ABSTRACT] OBJECTIVE To determine costunolide and dehydrocostuslactone in Aucklandiae Radix

produced in different areas of of yunnan. METHODS The content of costunolide and dehydrocostuslactonewere determined by HPLC method. The chromatographic column was ZORBAX Eclipse XDB-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm); Mobile phase of methanol-water (65:35); Flow rate of 1.0 mL/min; Injection volume of 10 μL; Detection wavelength of 225 nm; Column temperature of 30℃. RESULTSThe regression equation of costunolide was Y=1614.9X+27.408, R=0.9999, and the linear relationship between the peak area and the sample volume of costunolide in the range of 0.2-3.0 μg was considerable; the regression equation of dehydrocostuslactone was Y=1349.5X+20.653, R=0.9999, and the linear relationship between the peak area and the sample volume of dehydrocostuslactone in the range of 0.2-3.0 μg was considerable; the recoveries (n=9) were 99.98%, 99.94% .CONCLUSION This method can be used to determine the content of costunolide and dehydrocostuslactone in different areas of yunnan with high specificity, precision and reproducibility.

[KEY WORDS] Aucklandiae Radix; costunolide; dehydrocostuslactone; HPLC method

木香为菊科云木香属植物木香的干燥根，属单种属植物。始载 于《神 农 本 草 经》，列 为 上 品，味辛苦、性温，具有行气止痛、健脾消食的功效，临床上用于胸脘胀痛、泻痢后重、食积不消、不思饮食等症，煨制后涩肠止泻，用于泄泻腹痛，为治疗腹痛、泻痢的常用药

[1-4]。木香是许多中成药的原材料，如木香顺气丸、六味木香丸、止痢宁片等[5-6]。去氢木香内酯和木香烃内酯为主要的倍半萜类成分[7]，具有抗肿瘤、抗炎、抗菌等作用[8]，两种成分是木香活性性成分，也是木香药材检测指标成分。

本文采用高效液相色谱法对云南5个不同产地木香药材中的木香烃内酯、去 氢木香内酯进行定量检测。为控制木香药材质量，保证疗效，确保木香系列制剂安全性及有效性，为木香药材选择提供参考数据。

1.材料与方法

1.1药品、试剂与仪器  

1.1.1仪器  1260Ⅱ高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司），SQP电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）。

1.1.2药品  木香药材（编号：MX1，云南省个旧市；编号：MX2，云南省元谋县；编号：MX3，云南省玉龙县；编号：MX4，云南省洱源县；编号：MX5，云南省会泽县）；木香烃内酯（批号：11524-201108，纯度：99.9%，中国食品药品检定研究院）；去氢木香内酯（批号：111525-201712，纯度：99.9%，中国食品药品检定研究院）。

1.1.3试剂   甲醇（批号：116483，色谱纯，河北百灵威超精细材料有限公司）；甲醇（批号：2022110101，分析纯，成都市科隆化学品有限公司）；乙醇（批号：2021005001，分析纯，成都市科隆化学品有限公司）；水为纯化水。

1.2研究方法与结果

2.1 色谱条件  色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-水（65∶35）为流动相；柱温30℃；检测波长225 nm；流速1.0 mL/min，进样量10 μL；理论塔板数按木香烃内酯峰计算不低于5000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取木香烃内酯、去氢木香内酯对照品各20.00 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶液溶解并稀释至刻度，其浓度均为0.20 mg/mL混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

2.3.1 木香药材供试液  取木香药材粉末（过四号筛）约2.0 g，精密加入25 mL 甲醇溶液，称定重量，加热回流30 min，冷至室温，用甲醇溶液补重，混合均匀，过0.22 μm微孔滤膜，取滤液即得。

2.4 线性关系  精密吸取混合对照品液2、4、6、8、10、12、14、16 μL，分别注入液相色谱仪中，按“2.1”项下的色谱条件测定峰面积。以峰面积为纵坐标（Y），对照品进样量为横坐标（X）绘制标准曲线。木香烃内酯回归方程为：Y=1614.7X+27.322，R=0.9999，木香烃内酯进样量在0.2～3.0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系；去氢木香内酯回归方程为：Y=1347.9X+20.361，R=0.9999，去氢木香内酯进样量在0.2～3.0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验  精密吸取木香烃内酯、去氢木香内酯混合对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪中，按“2.1”项色谱条件连续检测6次，木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积的RSD分别为0.09%、0.08%，表明系统精密度良好。

2.6 重复性试验 取同一批木香样品，按“2.3.1”供试溶液的制备方法制备6份，以“2.1”色谱条件进行测定，木香烃内酯、去氢木香内酯含量RSD分别为0.75%、0.62%。表明此分析方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同同一批木香样品的样品，按“2.3.1”供试溶液的制备方法制备，以“2.1”色谱条件进行测定，分别在0、12、24、36、48h进样，木香烃内酯、去氢木香内酯含量RSD分别为0.49%、0.31%，结果表明在48 h内被测样品稳定性良好。

2.8 加样回收率试验  取已知含量的木香（木香烃内酯含量为21.034 mg/g，去氢木香内酯含量为36.112 mg/g）9份，每份约1.0 g，每3份1组，分别按1:0.8、1:1.0、1:1.2的比例加入木香烃内酯、去氢木香内酯对照品，按“2.1”色谱条件进行测定，试验结果如表1所示。木香烃内酯的平均回收率为99.98% ，RSD为0.02% ；去氢木香内酯的平均回收率为99.94% ，RSD为0.05% 。

表1    加样回收率试验结果（n=9）

检测成分	取样量/g	样品含量/mg	加入量/mg	测得量/mg	回收率%	平均回收率/%	RSD/%
木	1.0031	21.0992	16.8272	37.9225	99.98
香	1.0028	21.0929	16.8272	37. 9181	99.99
烃	1.0020	21.0761	16.8272	37.9007	99.98
内	1.0015	21.0656	21. 0340	42.0956	99.98
酯	1.0021	21.0782	21. 0340	42.1022	99.95	99.98	0.02
	1.0026	21.0887	21. 0340	42.12 07	99.99
	1.0021	21.0782	25.2408	46.3173	99.99
	1.0027	21.0908	25.2408	46.3341	100.01
	1.0030	21.0971	25.2408	46.3327	99.98
去	1.0031	36.2239	28.8896	65.0935	99.93
氢	1.0028	36.2131	28.8896	65.0927	99.97
木	1.0020	36. 1842	28.8896	65.0638	99.97
香	1.0015	36. 1842	36.1120	72.2565	99.89
内	1.0021	36. 1662	36.1120	72.2233	99.85	99.94	0.05
酯	1.0026	36.2059	36.1120	72.3206	100.01
	1.0021	36.1878	43.3344	79.5125	99.98
	1.0027	36.2095	43.3344	79.5336	99.98
	1.0030	36.2203	43.3344	79.5243	99.92

2.9 样品测定

2.10.1 木香药材木香烃内酯、去氢木香内酯含量测定

分别取5个不同产地的木香药材，按“2.3.2”方法处理，以“2.1”色谱条件进行测定，结果如表2所示。木香药材的木香烃内酯含量在9.281 mg/g~28.315 mg/g之间，MX1和MX2木香中木香烃内酯含量相差19.034 mg/g；木香药材的的去氢木香内酯含量在13.418 mg/g~36.112 mg/g之间，MX1和MX4木香中去氢木香内酯含量相差22.694 mg/g。结果表明不同产地的木香药材中木香烃内酯、去氢木香内酯含量及总量均存在差异。

表2    木香药材中木香烃内酯、去氢木香内酯含量测定

编号	木香烃内酯（mg/g）    去氢木香内酯（mg/g）		总量(%)
MX1	9.281	13.418	2.3
MX2	28.315	33.136	6.1
MX3	15.491	21.468	3.7
MX4	21.034	36.112	5.7
MX5	23.645	32.856	5.7

由表2数据可以知，5个产地的木香中木香烃内酯、去氢木香烃内酯含量存在较大差异，虽然以2020版《药典》中木香烃内酯、去氢木香烃内酯总含量不低于1.8%的要求来衡量[12]，5个产地的木香均符合药典标准。

3.讨 论

本研究建立果健消片中木香烃内酯、去氢木香烃内酯含量检测的方法，准确度高，专属性强，重复性好，可用于产品质量控制，为香果健消片质量标准修订提供依据。鉴于不同产地木香中木香烃内酯、去氢木香烃内酯含量存在差异，建议质量控制时分别对木香烃内酯、去氢木香内酯的含量进行限定，确保药材基源，以保证药品治疗效果。

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[12]国家药典委员会． 中华人民共和国药典(一部) [M]． 北京： 中国医药科技出版社， 2020．

作者简介：何丽芳（1975～），女，汉族，硕士，副研究员，研究方向：中成药二次开发.

通讯作者：唐新宗（1983～），男，汉族，硕士，高级工程师；研究方向：中药质量标准研究以及中成药开发研究.

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