杜马斯燃烧法和凯氏定氮法测定奶粉中的蛋白质含量分析

向轩萱

四川省绵阳市疾病控制中心，四川 绵阳  621000

摘要：目的 通过采用两种不同方法对奶粉中的蛋白质检测进行对比分析，为实验室更快捷，准确开展测定提供进一步的科学依据。方法 依据GB5009.5-2016第一法凯氏定氮法和第三法杜马斯燃烧法对高、中、低三种不同蛋白质含量奶粉质控样品进行测定对比其精密度和回收率。结果  杜马斯燃烧法结果准确度，精密度，回收率为：凯氏定氮法准确度精密度回收率为 结论 相较于凯氏定氮法，杜马斯燃烧法具有快速，高效，绿色，因而在检测牛奶中的蛋白质含量上具有推广意义。

    关键词：杜马斯燃烧法，凯斯定氮法，奶粉，氮含量测定

奶粉作为蛋白质的补充食品之一，因为冲调容易，携带方便，营养丰富在现代人的生活中已经成为不可少的食品补充手段。我国人口基数大，奶制品竞争大和需求巨大，奶粉以次充好以假乱真现象时有发生，目前能含量的快速测定奶粉中的蛋白质对于监控奶粉品质也具有非常重要的意义。             

1 材料与方法

1.1样品与材料

奶粉质控样品（NIM-RM3832-1、NIM-RM3832-2、NIM-RM3832-3）

1.2标准物质

EDTA（阿拉丁优级纯，含氮量  ）

1.3仪器与设备

SKalar Primacs SNC100燃烧法碳氮自动分析仪；500ml凯氏定氮全玻蒸馏器；可调节电路；万分之一电子天平。

2测定

2.1杜马斯燃烧法

采用SKalar Primacs SNC100燃烧法碳氮自动分析仪测定。分析天平准确称取10mg、20mg、50mg、100mg、200mg、300mg（精确至0.1mg）EDTA阿拉丁优级纯标准物质于陶瓷样品杯中，用于标准曲线测定绘制。另取样品杯准确称取（奶粉标准物质200mg左右），置于仪器自动进样盘。设置样品称样量、仪器参数等条件，待燃烧炉温度达到1000-1200℃，试样自动进样测定，燃烧产生的混合气体被氦气载气送至还原管中，其干扰气体及物质经吸收管吸收，氮氧化物被还原成氮气后通过TCD热导检测器检测，通过出峰面积计算氮含量乘以奶粉蛋白质换算系数6.25得出样品蛋白质含量。

2.2凯氏定氮法

准确称取奶粉标准物质0.2-2g（精确至0.1mg）于定氮瓶，分别加入6g硫酸钾、0.2g硫酸铜及20ml硫酸于电热板消解，待完全碳化后加大火力直至液体呈透明蓝绿色后继续加热0.5-1h，冷却后定容，用500ml全玻蒸馏器蒸馏，滴定计算蛋白质含量。

3实验结果与分析

3.1样品测定结果  

杜马斯燃烧法和凯氏定氮法测定样品含氮量结果见表1、表2

表1 杜马斯燃烧法测定奶粉质控样和RSD结果

样品名称              测定含氮量结果（%）          平均值（%）质控参考靶值（%）   RSD(%)

质控样品（低）2.9216、2.8765、2.9013、2.8861、2.9273                                    2.9311、2.8749、2.9734、2.9018、2.9316    2.9121         2.9216               1.06

质控样品（中）3.7972、3.8163、3.8021、3.8276、3.8183               3.9001、3.8017、3.7992、3.8032、3.9107    3.8276         3.7072               1.10

质控样品（高）5.2871、5.3201、5.2916、5.3009、5.3116             5.2793、5.3198、5.1210、5.2986、5.3027    5.3033         5.2800               1.11

表2  凯氏定氮法测定奶粉质控样和RSD结果

样品              测定含氮量结果（%）               平均值（%）  质控参考靶值（%）  RSD(%)

质控样品（低）2.6517、2.6918、2.7194、2.5983、2.7562               2.5176、2.7112、2.6735、2.5753、2.7387    2.6634          2.9216              2.91

质控样品（中） 3.6184、3.5385、3.4958、3.6473、3.7290                3.6361、3.7100、3.4638、3.5746、3.4193   3.5833          3.7072              2.89

质控样品（高） 5.0398、5.0186、5.1193、5.2057、5.0385                5.2837、4.9089、5.0038、5.0183、4.8673   5.0504          5.2800              2.48

3.2精密度结果分析

在精密度测定中，杜马斯燃烧法的相对标准偏差低于凯氏定氮法。可能由于凯氏定氮法在蒸馏过程中温度控制不易控制，蒸馏不彻底，导致样品结果偏差，因此表明杜马斯燃烧法精密度更高。

3.3 准确度测试结果分析

通过对低、中、高三种不同浓度奶粉质控样品10次测定，杜马斯燃烧法和凯氏定氮法测定结果标准值差值分别是0.0095、0.1204、0.0233与0.2582、0.1239、0.2296。凯氏定氮法差值明显高于杜马斯燃烧法，可得出燃烧法在蛋白质测定中准确度更高的结论。

4结论  凯氏定氮法测定过程需要用到浓硫酸、氢氧化钠等多种试剂,一批样品经前处理及蒸馏一般需要耗时5-6h,需要较多冷却水并产生大量废液,实验过程蒸馏温度不容控制对操作人员检测技术要求较高,容易造成随机误差。另外试剂对操作人员和周边生态环境危害较大。而杜马斯燃烧法操作简单、不需要样品前处理，具有高效准确，对外环境无污染等优点，适合大规模样品检测使其具有更深远的推广意义。