单克隆抗体药物组织交叉反应试验质量控制分析

张艳英

上海澳斯生物技术服务有限公司    200000

摘要：单克隆抗体药物自发行后，便在临床诊断与治疗中得到了广泛运用，促进了医药行业的进步，目前主要用于体外免疫组织研究，在生物组织评估交叉反应，但试验中需要一定的质量控制标准。因此本文从试验质量标准规定出发，提出了试验的设计思路，又提出了对报告书写以及相关组织的质量控制措施，希望为有关部门提供参考。

关键词：单克隆抗体药物；组织交叉反应；试验质量控制

引言：药品在试验过程中应着重于对试验过程的质量控制，这可以直接对药品安全性及其质量等方面做出保障，且随着科学的发展，药品质量也成为了各界极为关注的问题，且随着单克隆抗体药物的不断完善，也应做好针对组织交叉反应的试验，探明药物质量与用途，保证最终产品的安全性与稳定性。

1. 单克隆抗体药物组织交叉反应实验的质量标准规定

当前国际上针对单克隆抗体药物相关质量可参考《中国药典》、国际协调会议以及美国药品管理局所联合制定的各项政策，其中针对该类药品在交叉组织反应试验也称为“TCR”中，当前主要参与试验的部分组织有快速冷冻人体细胞、血液、仓鼠卵巢细胞、小鼠骨髓瘤细胞等，且按照我国标准要求，细胞在参加试验前，应针外源因子、内源因子等方面做好详细检查，而主细胞还应做好抗体分泌监测、免疫球蛋白等其他检查环节。而随着时间进展，其要求项目也在不断增多，时至今日还包括把微店序列的同源性比较以及其他动物的TCT研究，此外对于双特异性抗体成分，还应针对每一株亲本抗体进行逐个评估，且应遵循国际其他标准规定进行试验[1]。

2. 单克隆抗体药物组织交叉反应的试验设计
   1. 研究物种顺序

该试验的目的是研究在药物下，细胞组织表位的交叉反应，或是靶抗原以外的表位结合情况，为临床医疗等提供数据化参考，因此可直接进行人体组织研究，如果没有问题的话，也不需要开展其他动物组织研究了。针对TCR试验，国际已出台了相关规定，如美国FDA中规定动物种属组织进行研究可帮助毒性试验的物种选择，而人体组织在发现交叉反应时，通过相关动物组织进行试验则可以进一步提供临床毒性的补充数据作为进一步参考。因此试验中如果人体组织发现了交叉反应，则需要开始动物组织的研究，若在动物组织中发现了相关反应，则结束研究，如没有出现相关反应，则需要视具体情况而定，是否继续研究[2]。

2.2试验顺序

试验时不应更改操作步骤，首先应进行阳性对照组织切片的预试验，应注意纯化蛋白、琼脂糖珠等体外样本不能代表体内组织，都不属于阳性对照，且每次预实验时都应包括阳性对照切片试验，如果预实验中结果有区别，则应重新进行试件条件与试验。工作人员应注意可溶性靶抗原也应进行阳性对照试验与组织切片对照，如果试验多次仍然无法建立分析方式，则应将研究归为不可用，终止研究，并将研究报告详细记录，并提出申请。

3. 单克隆抗体药物组织交叉反应试验的质量控制
   1. 报告书写

单克隆抗体药物组织交叉反应试验中，应依照国际规定标准进行严格的质量把控，其中应参考试验详细进行报告的书写。试验报告一般应由病理学专家对结果进行判断后，通过附件的形式进行总结，当前对于抗体药物组织交叉反应试验的报告，并没有出台固定的标准格式要求，但在试验报告中还是应包括目录、总报告书的确认以及相关病理专家的签字证明，且试验涉及到专题、试验编号、单位等，都应进行详细记录，同时应在报告的摘要中注明试验目的、方法等，并记录试验所用的各项器具、实验系统以及测试方法，对于阳性结果、阴性结果等，都应详细进行注明，并对组织名称、对照标号、结果等进行罗列，此外如果该试验被用于临床新药，则应让其他同行专家进行二次审定。

3.2TCR研究冰冻组织质量控制

早在上世纪80年代，美国就对试验中有关于冰冻组织的研究进行了标准制定，规定可使用福尔马林固定石蜡包组织进行研究，且冰冻组织虽然并不是最为理想的组织，但也最为常用的组织样本。试验中为了减少误差，也应进行一定的质量控制，由于冰冻切片形态较差，容易影响TCR研究的染色结果，并对精确性造成误差，因此应严格控制其取材时间、组织来源、处理与储存方法等，且最好收集较为重要的组织器官，如心脏、中枢神经等，另外在收集尸检时应对医院与家属签署同意书，在伦理委员会同意方可采集，最好死亡不超过24h且不患有组织性疾病，并对全方位收集死者年龄信息、遗传信息、尸检报告等，存放时也应存于密闭容器中并放进零下20到80度的冰柜，并应尽快在最佳温度的情况下用于试验研究，减少长时间冰冻产生冰晶而出现误差[3]。

3.3 TCR研究石蜡组织质量控制

当前大多数试验汇总也会用到原则上并不推荐运用的石蜡组织切片，但很多石蜡组织在保存方面较之冰冻保存较为完好，对试验所造成的误差会更小，因此也被运用于试验，但依旧应做好质量控制，如对于石蜡组织切片应考察样本在福尔马林中的固定时间、氧化作用的影响以及储存过程中所采用的石蜡温度等因素，虽不作为常规方式，但针对于保存完好的样本也可以进行试验。

3.4 TCR研究动物组织质量控制

很多动物组织样本与人类组织在生物反应上存在差异，体外实验与体内实验也有区别，因此在试验中若必须使用，则应详细考量体外试验案例，并分析受体结合程度、代谢以及其他试验结果。动物组织在取材、更新方面较人体组织有很大便利，但在使用过程中也应保证其选材的质量，并做好各项测试，试验时应准备至少两个供体，减少单独供体的差异影响，且对于高度近交的动物由于遗传背景相似，应准备三个供体，必要时也可继续增加供体，保证试验结果的准确性。

3.5质量控制注意事项

3.5.1基于不同电荷大小的电泳技术

随着科技手段的进步，单克隆抗体类药物在试验过程中的质量控制也更为严格，其中可运用电泳技术进行试验，而基于不同电荷大小的电泳技术可通过毛细管等点聚焦进行分离技术，对于蛋白质、临床药品等活性物质分析方面可加以运用。企业由于耗时较短、样品所需量较少等优点被广泛运用，但使用中应注意活化步骤中会导致PH梯度产生变化，试验中为减少影响，可通过使用毛细管等电聚焦成像电泳，提高电镜分辨率，减少分析的时间，并通过该技术对重组单克隆抗体电荷进行分析，减少试验过程中的误差，提高试验的精准度。

3.5.2操作步骤可改变组织结构

在试验中，相关人员为了减少试验误差，应考虑到对TCR操作的步骤改变，还会直接影响到样品本身的抗原或机体内的结构，通常这些情况会由于风干、固定以及处理生物素而导致，因此在试验过程中不可随意改变操作步骤。试验中往往会需要风干组织切片，让抗原簇发生变性，且限制抗体与抗原的结合，且对于有机溶剂等，还会直接导致其内部蛋白质的折叠，限制了抗原表面的固态结构以及相邻分子结构，而运用有机溶剂则会去除掉膜表面的细胞受体，将本就失稳的抗原进一步破坏，或产生新的化学空间结构，从而大大提升实验的误差性。

结语：总而言之，在进行单克隆抗体药物组织交叉反应试验中，应严格遵循相关标准政策，并对试验中试剂样本进行明确考察，加强试验的精准性，为医药、临床诊断等领域提供新的发展方向，而从当前来看，单克隆抗体类药物的各项分析试验依旧充满艰难，当前也并没有统一的标准试验方式，也应结合实际情况分析，判断过程，且其研究也还有待提高，希望本文可以为试验的质量控制提供帮助。

参考文献：

[1]曲园园. 人源抗SARS-CoV-2单克隆抗体筛选与抗体功能研究[D].中国疾病预防控制中心,2021.

[2]刘丹丹. 人源化单克隆抗体药物临床前研发风险管理研究[D].沈阳药科大学,2019.

[3]邱晓,罗建辉. 重组单克隆抗体药物制剂处方的作用及相关审评要点[J]. 中国新药杂志,2019,28(16):1947-1954.