摘要目的构建Spink5基因条件性敲除小鼠模型并鉴定其表型。方法采用CRISPR/Cas9技术构建基因型为Mb1cre/+Spink5floxp/floxp的B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠（敲除组），以基因型为Mb1+/+Spink5floxp/floxp的小鼠为对照组。提取小鼠脾脏单个核细胞并经流式细胞荧光技术分选B淋巴细胞及非B淋巴细胞，然后分别进行基因型鉴定及淋巴上皮Kazal型抑制物（LEKTI）蛋白表达的测定。切取小鼠皮肤行HE染色，测量表皮厚度，免疫荧光染色测定小鼠皮肤LEKTI蛋白荧光强度。组间比较采用配对t检验或两独立样本t检验。结果基因型鉴定结果表明，成功构建稳定的B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠模型。Western印迹显示，条件性敲除小鼠B淋巴细胞中LEKTI蛋白相对表达量为0.01 ± 0.02，显著低于非B淋巴细胞（0.66 ± 0.11，t = 9.99，P < 0.001）及对照组小鼠B淋巴细胞（1.08 ± 0.13，t = 13.78，P < 0.001）。39只敲除组小鼠中，4只出现皮肤干燥、散在鳞屑性肥厚型斑丘疹。敲除组皮损部位表皮厚度为（90.42 ± 21.31）μm，显著高于其非皮损部位[（29.71 ± 3.63）μm，t = 5.05，P = 0.002]及对照组表皮[（12.42 ± 2.21）μm，t = 6.74，P < 0.001]。免疫荧光检测显示，敲除组皮损处LEKTI蛋白荧光强度为46.21 ± 1.21，非皮损处为46.62 ± 2.13，与对照组（47.69 ± 1.71）差异均无统计学意义（P > 0.05）。结论成功构建了B淋巴细胞Spink5基因条件性敲除小鼠模型，为进一步探究Netherton综合征皮肤屏障缺陷伴免疫功能异常的机制提供研究基础。
