低温过氧化氢消毒剂性能研究

王芳，李瑶，向鑫，饶梦莹，李艳花，赵胜杰，谢平（通讯作者）

重庆两江创享医药检验认证科技有限公司，重庆，400714

摘要 目的探究低温过氧化氢消毒剂性能研究。 方法 依据GB/T 38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》。结果过氧化氢含量约为5.56%-6.53%范围，中和剂为5g/L硫代硫酸钠、0.5%卵磷脂、0.5%吐温80的PBS，加防冻剂后，随着过氧化氢含量的增加，PH值降低，防冻剂为乙醇和氯化钠的综合作用下，在-20℃低温条件下，作用30min对载体片上白色念珠菌（ATCC 10231）、大肠杆菌（8099）和金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）的杀灭对数值＞3.00，加稳定剂前后的消毒剂在-20℃条件下对白色念珠菌（ATCC 10231）、大肠杆菌（8099）和金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）杀灭对数值＞3.00；低温过氧化氢消毒剂20℃和-20℃恒温条件下，白色念珠菌（ATCC 10231）、大肠杆菌（8099）和金黄色葡萄球菌（ATCC 6538），低温消毒剂的杀灭对数值依旧均＞3.00。

关键词：低温过氧化氢消毒剂；杀灭对数值；白色念珠菌；大肠杆菌；金黄色葡萄球菌。

Study on properties of low temperature hydrogen peroxide disinfectant

AbstractObjectiveTo explore the properties of low temperature hydrogen peroxide disinfectant Methods According to GB/T 38502-2020《Disinfectant Laboratory Sterilization Effect Test Method》.ResultsThe content of hydrogen peroxide is about 5.56%-6.53%, and the neutralizing agent is 5G /L sodium thiosulfate, 0.5% lecithin and 0.5% Tween 80 PBS. After adding antifreeze, with the increase of hydrogen peroxide content, the PH value decreases, and the antifreeze is ethanol and sodium chloride under the combined action of -20℃. The antifungal values of candida albicans (ATCC 10231), Staphylococcus aureus (ATCC 6538) and Staphylococcus albicans (ATCC 10231) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538) were > 3.00.Disinfectants with and without stabilizer were able to kill more than 3.00 candida albicans (ATCC 10231), Escherichia coli (8099) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538) at -20℃.Under the constant temperature conditions of 20℃ and -20℃, the death pairs of candida albicans (ATCC 10231), Escherichia coli (8099) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538) were still higher than 3.00.

ConclusionLow-temperature hydrogen peroxide disinfectant; Killing logarithm; Candida albicans; E. coli; Staphylococcus aureus.

过氧化氢消毒剂是一种强氧化性消毒剂，利用其氧化性来杀灭细菌繁殖体及真菌，氧化后变成水氧气，故不会造成二次污染，称为清洁消毒剂[1]。市面上常用的过氧化氢消毒剂一般是在常温下作用，因为疫情的原因和新型冠状病毒怕热喜冷的特性，冷链运输物品外包装表面常检测出新型冠

[作者简介]王芳，女，山东.济南，硕士，高级工程师，从事消毒产品检测工作

单位：重庆两江创享医药检验认证科技有限公司

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状病毒阳性样本，在-20℃、-40℃甚至更低温度时仍能发挥杀菌作用的低温消毒剂成了紧迫的需求。普通的过氧化氢消毒剂在-20℃、-40℃条件下会凝结，不能有效的发挥杀灭微生物的作用，在常规过氧化氢消毒剂中添加合适的防冻剂，能有效的防止消毒剂在低温的条件下结冰[2]。本研究添加防冻剂使过氧化氢消毒剂在-20℃保持液体状态，研究调整过氧化氢含量、加入不同稳定剂与不同温度下对白色念珠菌（ATCC 10231）、金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）和大肠杆菌（8099）的杀灭效果进行测定，现将结果报告如下。

1器材和方法

1.1试验仪器及耗材

（1）试验菌株：白色念珠菌（ATCC 10231），金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）、大肠杆菌（8099）。

（2）试剂：过氧化氢生产原液、无水乙醇、氯化钠、纯化水、硫代硫酸钠、D/E中和肉汤、过氧化氢酶、无水硫酸氢二钠、硫酸二氢钾。

（3）培养基：胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）、沙氏琼脂培养基。

（4）有机干扰物：3%BSA。

（5）生物安全柜、培养箱、低温恒温槽、涡旋振荡器、无菌器材和电子计时器等。

1.2检验方法

1.2.1检验依据

GB/T 38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》第5.1项、第5.4项、第5.6项和5.8项[3-4]。

1.2.2中和剂鉴定及杀灭试验

1.2.2.1中和剂鉴定菌片制备：取培养18~24h的新鲜菌培养物，用稀释液进行洗下，稀释到使用浓度，用3%BSA进行对倍使用，试验后的回收菌在50CFU/片~300CFU/片。

1.2.2.2杀灭试验菌片制备：取培养18~24h的新鲜菌培养物，用稀释液进行洗下，稀释菌悬液范围在1×108~9×108CFU/ml，用3%BSA进行对倍稀释，用移液枪吸取10μl在10mm×10mm脱脂平纹棉布上涂抹均匀。

1.2.2.3中和剂鉴定试验

中和剂鉴定试验为中和剂组，中和产物组，和稀释液的阳性组，中和产物为4.5ml的中和剂与0.4ml消毒剂的比例进行配比，中和作用10min后，吸取5ml，进行实验，将染菌载体片分别投入到5ml的中和剂、中和产物和稀释液中进行稀释接种平皿。

分别用三种中和剂对样品进行中和剂鉴定试验，分别为用消毒中和肉汤、5g/L硫代硫酸钠、0.5%卵磷脂、0.5%吐温80的PBS和D/E中和肉汤进行中和剂鉴定试验，对试验结果进行分析。

1.2.3过氧化氢含量对低温杀菌效果的影响

经试验，常低温过氧化氢消毒液的过氧化氢含氯控制在5.56%-6.53%范围内，应用GB/T 38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》进行载体杀灭试验，利用染菌载体片在-20℃恒温半小时，消毒剂在低温恒温槽中恒温至消毒剂内部达到-20℃，然后进行杀灭试验，将每一个菌片投入到5ml的恒温后的消毒剂中，进行-20℃恒温计时，分别作用15min、30min、和45min。计时结束后，投入到中和剂的试管中，进行涡旋振荡，稀释分别吸取1ml到无菌平皿中，倾注相应的琼脂培养基，凝固后倒置培养到规定时间。

1.2.5稳定剂配方对低温过氧化氢消毒剂杀菌效果的影响[5]

加入稳定剂后的低温过氧化氢消毒剂，试验选用白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭效果进行对比。

1.2.6温度对低温过氧化氢消毒剂杀菌效果的影响

试验在20℃恒温条件下，评价低温过氧化氢消毒剂对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭效果。

2结果

2.1中和剂鉴定结果

1．试验选用消毒液中和肉汤、含5g/L硫代硫酸钠、0.5%卵磷脂、0.5%吐温80的PBS、D/E中和肉汤三种中和剂进行低温过氧化氢消毒剂对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的中和剂鉴定试验，对金黄色葡萄球菌的三组间的误差率分别为11.9%、6.04%和15.29%，对白色念珠菌的三组间的误差率分别为17.4%、6.83%和16.55%。结果表明，含5g/L硫代硫酸钠、0.5%卵磷脂、0.5%吐温80的PBS中和剂鉴定试验合格，可以中和低温过氧化氢消毒剂对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的残留作用，且中和剂及其中和产物对培养基无不良影响、对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的生长基本无影响。

2.2不同含量的过氧化氢对微生物杀灭效果

过氧化氢含量分别在5.56%、6.22%和6.53%时，低温过氧化氢消毒剂在-20℃条件下，作用30.0min，经3次试验，对载体上白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭对数值均＞3.00。

2.3 稳定剂配方对低温过氧化氢杀灭微生物的影响

在过氧化氢含量为6.53%的低温过氧化氢消毒剂中加入两种配方的稳定剂，在-20℃条件下，作用30.0min，经3次试验，对载体上白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭对数值均＞3.00两种稳定剂配方对三株菌的杀灭效果无影响。且两种稳定剂配方在

54℃放置14d 后，过氧化氢下降率均＜10%，两种配方的稳定性均合格。

2.4温度对低温过氧化氢消毒剂杀菌效果的影响

在20℃恒温条件下，低温过氧化氢消毒剂对载体上白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭对数值均＞3.00。此低温过氧化氢消毒剂在20℃常温和-20℃低温条件下均能达到满意的杀菌效果。

3讨论

鉴于冷链系统容易受新冠病毒污染，因而冷链系统各个环节进行科学有效的消毒变得至关重要。低温过氧化氢消毒剂在当今疫情反复的现状催使下，是应运而生的一种消毒剂。实验结果表明，含5g/L硫代硫酸钠、0.5%卵磷脂、0.5%吐温80的PBS的中和剂可以中和低温过氧化氢消毒剂对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的残留作用，且中和剂及其中和产物对培养基无不良影响、对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的生长基本无影响。过氧化氢含量分别在5.56%、6.22%和6.53%时，低温过氧化氢消毒剂在-20℃低温条件下，对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的杀灭合格，且在常温20℃条件下上述三种菌的杀灭效果合格。两种稳定剂配方对杀菌效果无影响，且均能使产品有限期维持1年。

通过对不同配方不同浓度的低温过氧化氢消毒剂的杀菌效果、稳定性试验等表明，此低温过氧化氢消毒剂在低温和常温条件下性能稳定，能达到低温和常温消毒的目的，应用领域广泛，可以大力推广使用。

参考文献：

[1]苏伟东.过氧化氢消毒剂应用研究进展[J].中国消毒学杂志,2019,36(2):150-152．

[2]魏兰芬,潘协商,李晔.某强化过氧化氢消毒液在低温下的消毒效果研究[J].中国消毒学杂志,2020,37(12):894-900.

[3]GB/T 38502-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》[S].2020.

[4]胡顺铁,吴庆,郁文.含过氧化氢的低温消毒剂相关性能试验观察[J].预防医学情报杂志,2021,37(08):1168-1172.

[5]张卓娜,罗嵩,杨艳伟.过氧化物类消毒有效成分的检测及稳定性分析[J].中国卫生检验杂志,2017,027(016):2376-2378.

[通讯作者]谢平，女，重庆北碚，硕士，助理工程师，从事消毒检测工作

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