凝血酶时间偏高的原因

王勇

自贡市第三人民医院医学检验科，643020

1 凝血酶原时间如何测定？

    凝血酶原时间简称PT，指的是在体位满足外源性凝血全部条件的基础上，血浆凝固需要消耗的时间。当前测定凝血酶原时间的方法通常为试管法，是将过量组织凝血活酶与钙离子加入到抗凝血浆中，令凝血酶原向凝血酶转化，凝血酶会领纤维蛋白原向纤维蛋白转变。钙离子加入到血浆中，开始凝固消耗的时间，即为测定对象，也就是凝血酶原时间。

    操作时，首先应当分离血浆，采血之后用真空试管保存，以每分钟2500转的标准，持续离心15分钟，使血浆分层。水浴箱温度需要保持37℃的恒温状态。测定时应当在玻璃试管中提取0.1mL待测血浆，在37℃的环境下孵育180秒，加入0.2毫升试剂后计时，记录凝固时间。正常情况下，凝固时间在10-12秒范围内，最多不会超过14秒。

2 影响凝血酶原时间测定结果准确性的因素及控制方法

    首先，检测系统和操作方法。仪器是否精密，是影响测定结果准确性的重要因素，这也是仪器检测方式普遍优于常规手工检测的原因。其次，标本形状、保存条件、标本离心情况和抗凝剂选择同样有一定影响。当前可用于凝血酶原时间测定的抗凝剂，通常包含浓度为3.2%和浓度为3.8%的柠檬酸盐，有关研究表明，浓度为3.2%的柠檬酸盐，临床适用性更强，同时基于不同采血量条件，也发现浓度为3.2%的柠檬酸盐抗凝标本，也不会受标本采血量的较大影响，采血量只需要超过60%，就不会导致结果出现较大差异。相比之下，如果抗凝剂为浓度为3.8%的柠檬酸盐，则采血量不能低于80%，否则容易引发结果上的较大差异。同时，也有研究表明，应用浓度为3.8%的柠檬酸盐抗凝剂，接近1/6的患者凝血酶原时间会更高，相较于正常值，可高出大概7秒。这也是临床通常在测定凝血酶原时间时，更推崇使用浓度为3.2%柠檬酸盐的重要原因。

    此外，标本离心速度、保存条件、检测时间，同样会成为凝血酶原时间检测结果准确性的重要影响因素。正常情况下，凝血酶原时间的检测工作，应尽量控制在24小时之内，标本的储存时间或者以室温为标准（即18-24℃），或者保存在3℃左右的环境中（上下误差不超过1℃）。如果环境温度为37℃左右，且标本保存时间在6小时以上，则会增加测定结果出现误差的概率。

    此外，虽然一些学者认为，凝血酶原时间长短可能受离心速度的影响，但是研究表明，离心速度可能不是影响因素，根本原因在于血浆分离时间出现偏差。正常情况下，只需半小时至一小时，即可完成离心分离操作，这也表明，不管立新速度如何，选择常规速度还是高速，离心速度控制在10分钟之内，都不会对测定结果产生较大影响，而且保存时间一旦超过6小时，则下至6小时，上至24小时，同样不会影响检测结果的准确性。

    另外，标本形状同样会对凝血酶原时间的测定时间产生影响。基于此，在正式检测之前，应当对血浆中是否有凝块、脂血、黄疸和溶血现象加以明确。正常情况下，细胞膜中存在大部分成熟红细胞之类，总脂量中的绝大多数，主要成分为游离胆固醇与磷脂。由于磷脂为促凝物质，溶血会促进成熟红细胞细胞膜中的磷脂成分进一步释放，进而增加凝血酶原时间较低的概率。需要特别注意学将标本中的凝块，不管凝块体积如何，都可能对试验结果造成较大负面影响。与此同时，应格外重视抗凝剂和血液之间的比例，避免抗凝剂用量不到位，导致凝血酶原时间过高。实际测定时，应当以真空管为主，避免标本形状影响检测结果。

    对于临床而言，应重视对标本质量的控制。第一，在收集标本时，应以硅化玻璃器械或塑料制品等为主，包括硅化注射器和硅化试管等，以降低凝血因子的激活作用。试管不应有划痕，同时保证干燥洁净。第二，采血过程应顺利进行，避免凝血因子被激活。静脉压迫时间也不能过长，防止导致局部纤溶活化。第三，采血之后应第一时间对标本进行检查，判断标本是否有血凝块、止血、黄疸和溶血迹象，防止影响凝血酶原时间的准确性。第四，抗凝剂和血液样本应最大程度混合均匀，正常情况下，抗凝剂和血液的比例应为1:9。第五，采血之后的标本，应在60分钟之内完成测定工作。如果是4℃的环境，则保存时间应控制在4小时之内。如果确实因为现实情况无法在短时间内完成检测，应当将温度尽量降低，若是-20℃环境，则保存时间可达2周；若是-70℃，则保存时间可达6个月。第六，鉴于每次应用的氯化钙凝血活酶，在活性上存在一定差异，测定条件也可能难保完全一致，因此应当和正常条件相对照。离心血浆的条件也需要严格保证，血浆中应减少血小板含量，反之，可能引发凝血酶原时间的波动。第七，测定方法应保证规范，以国际血栓与止血委员会公布的方法为准。

    最后，试剂本身同样是影响凝血酶原时间的重要因素。究其原因，是因为凝血活酶在人和动物中均可提取，但是活性存在明显差异。如果凝血活酶试剂的活性和来源不相同，则会引发实验室明显差异。世界卫生组织认为的标准被，为人脑凝血活酶67/40。