胞磷胆钠注液含量检验方法的研究

李蕊1，陈昆鹏2，任航宇3

辰欣药业股份有限公司   山东  济宁

摘要：目的:建立胞磷胆碱钠的高效液相色谱法.方法:色谱法:Hypersuil 250mm*4.6mm,5μm;流动相:磷酸盐冲液：甲醇=95:5,流速:1.0ml/min,检测波长280nm.结果:最小检出量胞磷胆碱钠为0.01μg/ml,5'-胞苷酸为0.001μg/ml,结论 :此法快速,简便,灵敏,准确,适用于该产品的质量检验分析.

关键词：胞磷胆碱钠；5－胞苷酸；高效液相色谱法；

一 、仪器与试剂

1.1仪器与设备： 高效液相色谱仪（日本岛津，SPD-15C），电子天平（日本岛津，AUW120D），pH酸度计（上海雷磁，PHS-25C）；   

1.2药品与试剂：5’-胞苷对照品（中国食品药品研究院，批号：190921），胞磷胆碱钠对照品（中国食品药品研究院，批号：181103），磷酸二氢钾（天津科密欧，20190422），四丁基氢氧化铵（国药，20200224），磷酸（国药，20190918），甲醇（天津科密欧，20190927）

二、检验方法

2.1色谱条件

色谱在:C18；检测波长:UV276nm；流速:1.0ml/min；柱温:30℃；流动相A:磷酸盐冲液【0.1molL的磷酸二氢钾液和四丁基铵溶液(取0.01moL四丁基氢氧化铵溶液用磷酸调节PH至4.5)等量混合】；流动相B:甲醇；流动相A:流动相B=95:5

2.2溶液配制

系统适用性液：精密称取5’-胞苷酸约12.5mg，置50ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，制成每1m中约含0.25mg5`-胞苷酸的溶液，取胞磷胆钠对照品液适量，与5’-胞苷酸溶液等量混合，摇匀。

胞磷胆碱钠对照品液：精密称取胞磷胆碱钠对照品约50mg，置50ml量瓶中，用水稀释制成每1m中约含0.5mg胞磷胆钠的溶液，摇匀，平行配制两份。

供试品溶液：精密量取本品2ml，置100m量瓶中，用水稀释至刻度，再精密量取ml，至50m量瓶中，用水稀释至刻度，制成每1ml含0.25mg胞磷胆碱钠的溶液，作为供试品溶液。

三、检验结果

3.1专属性、系统适用性

结果表明，空白、溶剂对胞磷胆碱钠检测无干扰，系统适用性溶中主峰与5 `-胞苷酸峰分离度＞1.5。

3.2线性和范围

在0.25mg/mL~1.5mg/mL范围内，峰面积A和浓度C呈线性关系，Y=24214x-4548.7相关系数大于0.99。

3.3精密度

平行配制6份供试品溶液，6份含量结果RSD≤2.0%(n=6)；不同日期两个人员不同仪器各平行配制6份供试品溶，共12份含量结果%RSD≤2.0%(n=12)。

对照品溶液胞磷胆碱钠峰面积	1-1	1-2	1-3	1-4	1-5	2-1	2-2	F值
	113689	114954	113566	114027	113998	114492	114327	100.3%
	平均：114047  RSD ：0.48%					平均：114409
可接受标准	RSD≤2.0%							98.0%~ 102.0%

3.4准确度

配制0.25、0.5、1.0各三浓度准确度溶液回收率:98.0%～102.0%。

浓度	胞胆碱钠峰面积	理论加入量	测得加入量	回收率%	回收率平均	回收率RSD%
50%	55882	0.250	0.245	98.0	100.3%	1.2
	57660		0.253	101.7
	57964		0.254	101.1
100%	113689	0.500	0.498	99.7	100.0%
	114954		0.504	100.8
	113566		0.498	99.6
150%	172071	0.750	0.754	100.6	99.7
	170986		0.750	100.0
	168563		0.739	98.5

3.5溶液稳定性

对照品液室品放置24小时，峰面RSD≤2.0%，24小时的含量相比初始含量的比值为98.0%～102.0%；供试品溶室温放置24小时，峰面积RSD≤2.0%，24小时的含量相对于初始值含量的值为98.0%~102.0%。

	对照品溶		供试品溶
放置时间(小时)	胞磷胆碱钠峰面积	相对于0h含量比值	胞磷胆碱钠峰面积	相对于0h含里量比值
0h	113896	100.0%	114795	100.0%
8h	114226	100.3%	115663	100.8%
12h	113935	100.0%	115087	100.3%
16h	114754	100.8%	114361	99.6%
24h	112970	99.2%	114876	100.1%
RSD%	0.57	------	0.41	------
平均	-----	100.2%	------	99.8%

四、结论

对照品溶液室温放置24h，峰面积的RSD为0.57 (≤2.0%)，含量相对于初始值含量的比值范围为100.2%(98.0%~102.0%)，表明溶液稳定;供试品溶液于室温放置24 h，峰面积的RSD为 0.41(≤2.0%)，含量相对于初始值含量的比值围为99.8%(98.0%～102.0%)

，且 (有没有)新的色峰出现，表明溶液稳定。

参考文献：

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