不同环境下菠菜汁中亚硝酸盐含量检测

王立峰

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【摘要】：利用在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，用紫外吸光光度计于波长550 nm处比色，与标准比较定量，从而测定三种不同环境下菠菜汁中亚硝酸盐的含量随时间的变化。

【关键词】：亚硝酸盐、菠菜汁、紫外分光光度计

实验部分：

菠菜汁中亚硝酸盐的测定

一、实验原理

    试样经沉淀蛋白质后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸（sulfanilic acid）重氮化（diazotization）后，再与盐酸萘乙二胺（NETH）偶合形成紫红色染料，于波长550 nm处比色，与标准比较定量。

二、试剂

1  亚铁氰化钾（Potassium ferrocyanide）溶液：称取l0.6 g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]，用水溶解，并稀释至l00 mL。

2  乙酸锌（Zinc acetate）溶液：称取11.0 g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]，加1.5ml冰乙酸溶于水，并稀释至50 mL。

3  饱和硼砂（borax）溶液：称取5.0 g硼酸钠(Na2B4O7·10H2O)，溶于l00 mL热水中，冷却后备用。

4  对氨基苯磺酸（sulfanilic acid）溶液(4 g/L)：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于l00 mL 20％盐酸中。置棕色瓶中混匀，避光保存。

5  盐酸萘乙二胺（NETH）溶液(2 g/L)：称取0.2 g盐酸萘乙二胺，溶解于l00 mL水中，混匀后。置棕色瓶中，避光保存。

6  亚硝酸钠（sodium nitrite）标准溶液：准确称取0.1000 g于硅胶干燥器中干燥24 h的亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于200 μg的亚硝酸钠。

7  亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.25 mL置于50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当干5.0 μg亚硝酸钠。

8 氯化铵（ammonia chloride）缓冲溶液pH 9.6-9.7：50ml容量瓶中加入25 mL水，准确加入1.0 mL盐酸溶液，摇匀。准确加入2.5 mL氨水，用水稀释至刻度。

三、仪器

1  沸水浴

2  分光光度计（spectrophotometer）

3  分析天平（analytical balance）

四、分析步骤

1  试样处理

准确称取5.00g菠菜提取液，加1.25 mL硼砂饱和液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热l5 min，取出后冷却至室温，然后一面转动，一面加入0.5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，静置待用。

2 标准曲线法

吸取0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00 mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、2、4、6、8、10 μg亚硝酸钠)，分别置于25 mL带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5 mL缓冲溶液，2 mL对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)，混匀，静置35 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液(2 g/L)，加水至刻度，混匀，l5 min，以1号管作为参比溶液，调节分光光度计于波长550 nm处测吸光度，绘制标准曲线。同时各取10mL样液于三支比色管中，加入4.5mL缓冲溶液，2mL对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)，混匀，静置35 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺酸萘乙二胺溶液(2 g/L)，加水至刻度，混匀，l5 min，以1号管作为参比溶液，调节分光光度计于波长550 nm处测吸光度。即样液平行实验三次。

3标准加入法

吸取10 mL上述样液于6支25 mL具塞比色管中，另吸取0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00 mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、2、4、6、8、10 μg亚硝酸钠)，分别置于25 mL带塞比色管中。于标准管中分别加入4.5 mL缓冲溶液，2 mL对氨基苯磺酸溶液(4 g/L)，混匀，静置35 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺酸萘乙二胺溶液(2 g/L)，加水至刻度，混匀，l5 min，调节分光光度计于波长550 nm处测吸光度，绘制曲线。

五、实验曲线绘制

1. 三组菠菜汁，第一组置于室温环境，第二组置于冰箱环境，第三组80℃加热一小时后置于室温。得到的数据显示菠菜汁中亚硝酸盐含量是随时间变化的，菠菜汁中亚硝酸盐含量在最初几天逐渐上升，在达到一个最高值之后，就会慢慢下降逐渐接近于0。
2. 第二批三组菠菜汁，第一组置于室温环境，第二组添加1%PE9010（防腐剂）置于室温，第三组置于37℃环境中。实验证明防腐剂对菠菜汁中亚硝酸盐的含量降低有一定的延缓作用。
3. 从1、2的数据表明，温度越高，菠菜汁中亚硝酸盐达到最高值所需时间越短。
4. 为了证明PE9010对菠菜汁中亚硝酸盐的含量变化产生的影响，继续做实验检测。取一部分菠菜汁，待其亚硝酸盐含量已过最高值，亚硝酸盐含量处于下降过程中，将其分为两部分，一部分直接置于室温（不添加防腐剂），另一部分添加1%PE9010后置于室温。从实验数据来看，添加PE9010可阻止亚硝酸盐的含量降低，但是并不能完全抑制。

六、结果计算

式中：

X一一试样中亚硝酸盐的含量，mg/kg；

m一一试样质量，g；

A一一测定用样液中亚硝酸盐的质量，μg；

V1一一试样处理液总体积，mL

V2一一测定用样液体积，mL

七、精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

结论：

温度越高，菠菜汁中亚硝酸盐达到最高值所需时间越短。添加防腐剂可阻止亚硝酸盐的含量降低，但是并不能完全抑制。后续试验，是在菠菜汁中亚硝酸盐含量达到峰值后添加不同种类以及不同量的防腐剂，目的是能够极大延缓甚至阻止菠菜汁中亚硝酸盐的含量降低。