金钗石斛组培育苗关键技术研究试验

李海燕,杨静,何素芬

四川云辰园林科技有限公司  四川宜宾  644000

摘要：本试验是以金钗石斛为培养材料，试验研究组培快繁关键技术，筛选适合宜宾地区金叉石斛组培最佳培养基配方，为同行提供一些技术参考。 

关键词： 金钗石斛   组培  关键技术

1、金叉石斛相关介绍

石斛（学名：Dendrobium nobile Lindl），又名仙斛兰韵、金钗石斛、仙斛兰韵、不死草、还魂草、紫萦仙株等。列入中国国家重点二级保护野生植物；《濒危野生动植物种国际贸易公约》、《世界自然保护联盟濒危物种红色名录》易危。金钗石斛是一种重要的植物资源，珍贵的国药材，主要含有生物碱类、多糖类、黄酮类、酚类等多种化学成分，其中生物碱为其主要药理活性成分，具有降血糖、改善记忆、保护神经、抗白内障、抗肿瘤等药理作用，具有极高的药用经济价值。金钗石斛花姿优雅，玲珑可爱，花色鲜艳，气味芳香，被喻为“四大观赏洋花”之一 ,具有较高的观赏和文化价值。

    金钗石斛繁殖分有性和无性繁殖两种，由于种子小，繁育条件苛刻，发芽率极低，植株变异较大，一般不采取有性繁育。无性繁育主要有分株、扦插、高芽以及组培，分株、扦插、高芽繁育需要大量的母本，繁殖系数低，无法满足市场对种苗的需求。

该项目进行金钗石斛组培育苗关键技术研究，目的在于利用金钗石斛茎段作培养材料，通过试验筛选适合在宜宾地区诱导丛生芽萌发的培养基配方及其操作流程，为金钗石斛在宜宾及川内进行组培苗生产提供技术参数。

一、金叉石斛组培技术

（一）外植体取材与处理

1、取材

以生长健壮、无病虫害感染的盆栽金叉石斛为取材母本。

2、处理方法

摘去叶片，剥掉膜质叶鞘，用清水清洗材料表面，剪成约2 cm长带节的小段，加少许洗衣粉和清水洗涤1-2min，清水洗后再用少许新洁尔灭洗涤1-2min，倒掉洗液，自来水流水冲洗30-60min。

3、外植体表面消毒

方法一：75%酒精浸泡15 s，无菌水冲洗后，再用1.0-2.0%次氯酸钠浸泡消毒10-20 min，无菌水冲洗5次，每次5min。

方法二：75%酒精浸泡15 s，无菌水冲洗后，再用S106消毒剂，浸泡消毒1.0-2.0 h。

方法三：75%酒精浸泡15 s，无菌水冲洗后，再用120-140mg/L二氧化氯消毒剂浸泡消毒20-30 min。

4、接种方法

取出材料，适当修剪两端，接种于诱导分化培养基上，30天后统计不同消毒处理的污染率和死亡率。

5、培养条件

接种好的培养瓶放在培养架上，调控室内温度在23（±2）℃，光照1500-2000XL，时间14h。

表1 不同消毒剂处理对金钗石斛茎段灭菌效果

消毒方法	使用浓度	材料数	处理时间	污染	褐化	死亡率%
方法一	1.0%	80	10min	6	1	8.75
	1.5%	80	15min	5	4	11.25
	2.0%	80	20min	3	8	12.75
方法二	100：0.3	80	1h	5	1	6.25
	100：0.5	80	1.5h	3	1	5.0
	100：0.8	80	2.0h	2	6	10.0
方法三	110mg/L	80	20min	5	1	7.5
	120mg/L	80	25min	2	1	3.75
	130mg/L	80	30min	1	6	8.75

死亡率=接种数—（污染个数+褐化个数）x100%。

试验结果表明，三种消毒处理方面法均有效果，对比筛选出相对最佳效果的是方法三，污染、褐化、死亡率为2、1、3.75%。

（二）植物生长调节剂选择与培养基配方筛选

本试验以MS为基本培养基，以6-BA、NAA、GA几种植物生长剂物质，配方中均加入琼脂7.5g/L+糖28g/L，调整PH值5.8-6.0。

MS+6-BA 1.0-2.0mg/L +NAA 0.5-1.0mg/L+GA0.1-0.2mg/L 激素配比为芽的分化培养基；

MS+0.1GAmg/L为继代培养基；

1/2MS+NAA 0.5-1.0mg/L+IBA0.1-0.5 mg/L激素配比为生根培养基。

1、筛选最佳分化培养基

金钗石斛外植体不定芽分化来自两种情况，一是侧芽萌发生长形成，二是从茎基部分化从生芽。根据试验结果，筛选最佳分化培养基配方。

表2           不同的分化培养基对芽茎段诱导效果

培养基配方	样本数	出芽时间（天）	出芽率	30天芽均高（cm）	芽长势
MS+6-BA1.0+NAA0.1+GA0.1	80	28-32	46.8abA	0.54±0.04bcAB	芽生长正常长势一般
MS+6-BA1.5+NAA0.5+GA0.2	80	25-30	52.3aA	0.83±0.02aA	较粗壮芽，长势好
MS+6-BA2.0+NAA1.5+GA03	80	26-30	44.0bAB	0.71±0.08abAB	芽较细弱，生长较快

出芽时间为茎段接种到腋芽萌发的天数，同列不同字母表示差异分析达极显著（大写， P＜0.01）和显著水平（小写， P＜0.05）

2、继代培养

不定芽苗高1.5㎝左右，单个切下转接到继代培养基上继续培养，保持室内的温度在23 ℃±2 ℃，光照强度2000-2500 lx，光照时间14 h/d，培养时间为3-4个月，继代控制在3-5代。

3、生根培养筛选最佳生根组合剂

当苗高2-3cm，1-3片叶，切下小芽转入生根培养基上培养。培养30天左右，芽基部长出2-4条约1cm长的白色根，生根率可达到100％。

表3    不同浓度的ABT/IBA组合对生根的影响

序号	NAA浓度 （ mg.L）	IBAI浓度 （mg/L）	生根数 （株）	生根率 （%）	平均每株发根数
1	0.1	0	48	61.25	3.27
2	0.25	0	59	73.75	3.54
3	0.5	1.0	80	100	4.82
4	1.0	0.5	73	93.75	4.61
5	0	0.25	63	78.75	3.62
6	0	0.1	47	58.75	3.12

金钗石斛不定根萌发力强，根系粗壮生长势旺盛，只要培养基中含有生根剂物质，少数外植体在培养阶段都要长不定根，在生根培养阶段，NAA、IBA两种生长剂物质都能促进不定根的萌发，两种物质配合使用时，能显著促进不定根萌发，可达到100%。

（三）温室练苗栽培

选择树皮块、珍珠岩、蛭石、锯木面，按1：2：1：2比例混合均匀，辅在温室苗床上，基质厚度应在3-5cm以上，结合浇水用500倍液多菌灵进行消毒杀菌处理后，5天进行栽植。将试管苗取出，用清水洗掉小苗上的培养基，栽植在基质中压紧基质，浇透水分。15-20天成活达100%。

  二、结论与讨论

本试验是在有菌环境下组织实施，通过反复试验，摸索出适合宜宾的金钗石斛组培培养基配方和练苗栽植基质配比，规范了开放条件下的组培操作流程与练苗栽培日常管理。

在开放的有菌环境下进行金钗石斛组织培养育苗操作，并筛选出外植体消毒灭菌效果较好的消毒剂组合物，简化操作程序、提高了工作效率，试验数据可供参考。

作者简介：

李海燕 女 （1981-） 本科 研究方向 植物组培技术

杨静 女 （1981-） 硕士 高级园林工程师 研究方向 园林生产

何素芬 女 （1956-） 本科 副教授 研究方向 植物组培技术

项目基金：宜宾市翠屏区2021年科技计划项目

项目名称：《金钗石斛快繁关键技术研究》

项目编号：2021NY01