反向高效液相色谱法测定丹桃合剂中苦杏仁苷的含量

司大龙 1 和 2 ， 梅勇 1 ， 田建 1 ，宋世戈 1 ，刘欣 1 和 3 ， 龙涛 1 ， 郭娟 1 ，杨莉 1

重庆希尔安药业有限公司 重庆 401520

庆希尔安康泽医药连锁有限公司 重庆 401520

重庆国舒制药有限公司，重庆 401320

摘要 目的：建立高效液相色谱法测定丹桃合剂中苦杏仁苷的含量。方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为 50mm，内径为 2.1mm，粒径为1.8μm）；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B，按梯度洗脱；流速为每分钟0.4ml；柱温为20~25℃；检测波长为210nm。结果：该高效液相色谱法能准确测定丹桃合剂中苦杏仁苷的含量，进样量为10μl下，苦杏仁苷在0.04～1.60mg/mL浓度范围内，峰面积与浓度有良好的线性关系，线性方程为y=20502500x-3106.2（r=1.0000）。苦杏仁苷平均加样回收率为99.20%（n=9），RSD为0.54%。结论：本法采用HPLC色谱条件检测丹桃合剂中苦杏仁苷的含量，方法专属性强、线性范围广，准确度高，重复性好，可作为丹桃合剂的质量控制方法。

关键词 丹桃合剂；高效液相色谱法；苦杏仁苷；含量

丹桃合剂是重庆希尔安药业有限公司开发用于盆腔炎的中药组合物合剂（批准文号为国药准字B20020906），其主要成份包括桃仁、牡丹皮、蒲公英、柴胡、忍冬藤、枳实、白芍、甘草组成的、具有活血化瘀、行气止痛、清解郁热作用的中成类药物，主要治疗因湿热蕴结所引起的带下增多、小腹痛、腰骶酸痛等病症^[1]。其中桃仁做为本品的君药，具有活血祛瘀，润肠通便，止咳平喘的功效，在处方中起着重要的作用，丹桃合剂质量标准（WS-5885- ( B-0885) -2004Z）未对苦杏仁苷含量进行控制，为了更好的了解产品的质量，笔者研究了一种高效液相色谱法能能准确的测定丹桃合剂中苦杏仁苷的含量，可作为产品质量标准提高的检测依据。

1 仪器与试药

1.1仪器 岛津LC-2030HPLC色谱仪，紫外检测器、LabSolutions色谱工作站；CP225D型电子分析天平（北京塞多利斯）。

1.2 试药 苦杏仁苷对照品（批号110820-201506，含量93.4%）由中国药品食品检定研究院提供；丹桃合剂（国药准字B20020906，批号：210401、210402、210403，由重庆希尔安药业有限公司提供）；乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸未分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1苦杏仁苷含量测定

2.1.1 溶液的制备

①对照品溶液的制备：精密称取苦杏仁苷标准品适量，加70%甲醇制成0.4mg/mL，即得。

②供试品溶液的制备：取丹桃合剂，精密量取5ml，置10ml容量瓶中，加70%甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

③阴性溶液的制备：取不含桃仁药材的阴性合剂，精密量取5ml，置10ml容量瓶中，加70%甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.2检测波长的确定

取苦杏仁苷对照品溶液，照紫外-可见分光光度法，分别在190nm～400nm波长范围内进行扫描，结果苦杏仁苷在210nm波长附近有最大吸收，因此确定苦杏仁苷的检测波长为210nm。

2.2.2 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为 50mm，内径为 2.1mm，粒径为 1.8μm）；以乙腈为流动相 A，以 0.1%磷酸溶液为流动相 B，按梯度洗脱程序0~10分钟，流动相A：流动相B（3:97）、10~13分钟流动相A：流动相B（3:97~4:96）,13~28分钟，流动相A：流动相B（4:96）；流速为每分钟0.4ml；柱温为 20~25℃；检测波长为210nm。在此色谱条件下，苦杏仁苷与相邻分峰的分离均大于2.0，理论板数按大黄素峰计算均大于5000，系统适用性符合要求。

2.2.3 专属性试验 在该的色谱条件下，苦杏仁苷与样品中其它组分色谱峰可基线分离，阴性无干扰，专属性强。

2.2.4 线性关系考察 进样量为10μl下，苦杏仁苷在0.04～1.6 mg/mL浓度范围内，峰面积与浓度有良好的线性关系，线性方程为y=20502500x-3106.2（r=1.0000）。

2.2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液，重复进样5次，苦杏仁苷峰面积值的RSD为0.62%，仪器精密度良好。

2.2.6重现性 取本品样品5份，按上述色谱条件平行测定5次含量，结果样品中苦杏仁苷的含量平均值为0.603mg/ml，RSD值为0.54%，方法重现性良好。

2.2.7 稳定性试验 取对照品溶液和供试品溶液于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时和8小时分别进样测定，测定苦杏仁苷的峰面积值，对照品RSD为0.64%，供试品RSD为0.57%，表明对照品和供试品溶液在8h内稳定。

2.2.8 准确度 9份样品苦杏仁苷的回收率平均值为99.20%（n=9），RSD为0.54%，该方法准确度好。

2.2.9 样品测定 取3批丹桃合剂大生产样品，按照“2.2.1”项下方法制备供试品和对照品溶液，参照拟定色谱条件进样测定，按外标法计算苦杏仁苷的含量，210401、210402、210403苦杏仁苷含量分别为0.603mg/ml、0.617mg/ml和0.621mg/ml。测定结果表明各批成品苦杏仁苷含量稳定。

3 讨论

桃仁为丹桃合剂方中为君药，其桃仁具有活血祛瘀，润肠通便。可用于经闭，痛经，癓瘕痞块，跌扑损伤，肠燥便秘。桃仁性甘平、味苦，入肺、肝、大肠经;有破血行瘀，润燥滑肠的功效;治经闭、痛经、瘕瘕痞块，跌打损伤、肠燥便秘。苦杏仁苷作为《中国药典》收载类似品种的含量测定成分，但丹桃合剂质量标准并未収载苦杏仁苷质量控制，为了真实了解产品中苦杏仁苷的含量，建立了高效液相色谱法对产品中苦杏仁苷含量测定进行的研究，结果该方法专属性强、线性范围广，准确度高，能准确的检测出产品中苦杏仁苷的含量，多批检测结果表明苦杏仁苷含量稳定，产品质量优异。

参考文献

[1] 王笑笑，许莺婷. 丹桃合剂中芍药苷的鉴别和含量测定方法学研究.Strait Pharmaceutical Journal[J].2015，27（8）：43-45

[第一作者] 司大龙 执业中药师，从事药品质量管理与药品研发，邮箱：[e-mail]

[通讯作者] 梅 勇 高级工程师、执业药师，从事新药研发工作，电话：[phone]，邮箱：[e-mail]