育龄女性中FMR1基因(CGG)n重复序列分布调查1

赵红霞

北京市房山区妇幼保健院 北京 102488

【摘要】目的：对育龄女性脆性X智力低下1（FMR1）基因（CGG） n重复序列及等位基因在人群中的频率进行调查研究，为脆性X综合征（FXS）和脆性X相关原发性卵巢功能不全(FXPOI)提供预警和参考依据。方法：选择在北京市房山区妇幼保健院进行婚前、孕前或产前检查的1662名女性，提取其外周血基因组DNA，应用脆性X-FMR1基因AmplideX检测试剂盒进行FMR1基因CGG重复序列检测，探究不同CGG重复数在人群中的分布。结果：FMR1基因重复次数在正常范围n=6-34的有1226例，占总数73.77%；正常范围高线n=35-44的有421例，占总数的25.33%；灰区n=45-54的有11例，占总数的0.66%；前突变n=55-200的有4例，占总数的0.24%。结论：育龄女性中FMR1基因灰区突变和前突变比例相当可观，FMR1基因检测可以降低FXS患儿的出生率，促进早期干预。所以要在育龄女性中广泛开展FMR1基因筛查，婚前孕前保健医师要积极宣教，提升婚育人群的健康素养和预防保健意识。

【关键词】 FMR1基因；脆X综合征；CGG重复数；育龄女性；婚前孕前

脆x综合征是继唐氏综合征之后智力障碍的第二大原因(占所有智力障碍的2.4%)，是遗传性智力障碍的首要原因，也是男性智力障碍最普遍的原因，在家族中累及范围较广，不仅给家庭和社会带来巨大压力，更是患儿一生的痛苦。为降低我国出生缺陷，对育龄女性进行FMR1基因突变携带者筛查，为预防脆X综合征的发生具有重要意义。本研究对1662名婚前、孕前和产前检查的女性进行FMR1基因（CGG）n重复序列及等位基因在人群中频率的调查研究，为国内脆X综合征的筛查和预防提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

纳入2018年5月12日-2021年9月30日来北京市房山区妇幼保健院进行婚前、孕前或产前检查的1662例女性为研究对象，年龄18~45岁，平均年龄30.22±4.37。其中婚前孕前检查者118人，占比7.10%；产前检查者1544人，占比92.90%。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取

采集外周血2ml于EDTA抗凝管内，应用基因组DNA纯化试剂盒(Magen)提取DNA，用Nanodrop2000逐次对其定量并记录每个样本的质量及DNA浓度。

1.2.2 PCR扩增

用脆性X-FMR1基因AmplideX检测试剂盒对DNA样本进行处理，配置好三引物反应体系，分装进96孔PCR板，加入DNA模板用膜封装后混匀离心，使用ABI7500扩增仪进行PCR扩增。

1.2.3 毛细管电泳

PCR扩增产物分析采用ABI3730xl毛细管电泳仪和 Gene Mapper 4.0分析软件。

1.3 统计学分析

采用spss22.0统计学软件和GraphPad Prism 5.01进行统计分析。计量资料以（`x±ｓ）及百分率（%）表示，差异性分析用卡方检验。

2 结果

在纳入研究的1662名育龄女性中，FMR1基因重复次数在正常范围n=6-34的有1226例，占总数73.77%；正常范围高线n=35-44的有421例，占总数的25.33%；灰区n=45-54的有11例，占总数的0.66%；前突变n=55-200的有4例，占总数的0.24%。各重复数分布见表1。

表1 研究人群中正常、灰区、前突变分布情况

CGG重复数	例数	频率	具体CGG重复数
正常范围n=6~34	1226	73.77% （1226/1662）	-
正常范围高线n=35~44	421	25.33% （421/1662）	-
灰区n=45~54	11	0.66% （11/1662）	45、46、47、48、49、50、51、52、53
前突变n=55~200	4	0.24% （4/1662）	55、57、59、 93

3 讨论

3.1在育龄女性中广泛开展FMR1基因筛查

脆X综合征是一种X连锁不完全外显性遗传病，主要因FMR1基因的(CGG)n重复序列异常扩增引起。根据CGG重复次数将FMR1基因突变分为中间/灰区突变、前突变和全突变三种类型。家系分析时，与本病相关的非经典孟德尔遗传方式包括动态突变、基因组印迹和遗传早现，特别是前突变的传递方式。女性前突变携带者后代有成为全突变的风险，有50%的几率传递给下一代，有可能生育脆X综合征患儿，因此对育龄女性进行前突变携带者筛查尤为重要。

灰区突变是后代发生全突变的潜在前体，有一定的扩增风险，在传递给子代时有可能扩增为前突变，在更远的世代中有可能扩增为全突变而发病。目前研究表明，灰区突变和正常范围的高线重复与卵巢早衰有关^[1]。FMR1基因作为评估卵巢储备功能的生物学指标也具有非常深远的意义。另外，前突变或灰区突变携带者，还有发生脆性X相关原发性卵巢功能不全（FXPOI）和脆性X相关性震颤共济失调综合征（FXTAS）的风险。

由表1显示，北京地区18-45岁育龄女性中FMR1基因前突变携带率为0.24%，即1:417，低于国外报道的1:291^[2]及国内赵绍杰等报道的1:325^[3]，高于国内陈高琴等调查的深圳地区育龄女性FMR1基因前突变携带率1:517.5^[4]及韩国的 1:788^[5]；灰区携带率为0.66%，即1:152。可见灰区突变和前突变携带者比例相当可观，应该在育龄女性中广泛开展FMR1基因筛查，尽早发现携带者，及时进行医学干预，避免子代患病。

3.2婚前孕前保健医师积极宣传推广遗传学检测

常规的婚前、孕前检查项目中不包括染色体和基因检测，需要婚前孕前保健医师不断拓展遗传学知识，提高对遗传病预防重于治疗的认识，向婚前、孕前人群积极宣教，引导她们在知情同意的原则下选择FMR1基因等遗传学检测项目。对于筛查出的脆X综合征全突变或前突变携带者，咨询医生要提供针对性的遗传咨询和生育指导，让当事人知情选择产前诊断或胚胎植入前诊断，避免患儿出生，达到优生的目的。

3.3婚育人群要提升健康素养和预防保健意识

在参与调查的1662名育龄女性中，婚前孕前检查者只有118人，占比7.10%，远远低于产前检查者（1544人，占比92.90%），说明大多数婚前、孕前人群没有意识到脆X综合征基因筛查的重要性。虽然在孕期筛查脆X综合征基因也非常重要，但可能使一部分前突变携带者错过了胚胎植入前诊断或产前诊断的时机，所以我们提倡关口前移，有生育意愿的婚育人群要充分了解遗传病相关知识，提高预防保健意识，主动筛查FMR1基因，为减少出生缺陷、提高我国出生人口素质出一份力。

参考文献：

1. Bretherick KL， Fluker MR， Robinson WP. FMR1 repeat sizes in the gray zone and high end of the normal range are associated with premature ovarian failure[J]. Hum Genet，2005，117(4):376-382.

2. Hunter J， Rivero-Arias O， Angelov A， Kim E， Fotheringham I， Leal J.Epidemiology of fragile X syndrome: a systematic review and metaanalysis[J]. Am J Med Genet A，2014，164A(7):1648-1658.

3. 赵绍杰，钱芳波，马凤英，鲁静洁，杭晨，王晓临，孙慧.不良孕产史孕妇FMR1基因 CGG重复次数分布特征[J].中国计划生育学杂志，2021，29(08):1753-1756.

4. 陈高琴，何广营，张燕，沈怿.1035名孕前育龄妇女FMR1基因(CGG)n重复序列多态性分析[J].中国优生与遗传杂志，2019，27(02):142-144.

5. Jang JH，et al. Frequency of FMR1 premutation carriers and rate of expansion to full mutation in a retrospective diagnostic FMR1 Korean sample[J].Clinical Genetics，2014，85（5）：441-445.

1 项目名称：吴阶平医学基金会项目

项目编号：320.6750.16156