激光捕获显微切割技术在法医物证检验中的应用体现

刘妍

南京东南司法鉴定中 心 ， 江苏南京 210000

摘要：激光捕获显微切割作为现今社会发展研究分离特定同质细胞群的先进技术，特别是在处理细胞占据样本细胞数较小的情况下，亦或是研究细胞呈现分散状态时，这项技术的应用非常关键。对法医物证检验工作而言，合理运用激光捕获显微切割技术对精子细胞、上皮细胞等各种形态的细胞进行分离检验，由此获取单一的DNA分型，有助于保障最终检验结果的真实性和准确性。因此，本文在了解当前激光捕获显微切割技术分类原理的基础上，对实际技术研究进展进行简单分析，而后结合实践案例明确这项技术在法医物证检验工作中的具体应用，由此证明激光捕获显微切割技术可以用于处理精子细胞、上皮细胞等不同形态的细胞组织。

关键词：激光捕获显微切割技术；法医；物证检验；RNA提取；扩增

0引言：简单来讲，显微切割技术可以堆组织病理学中明确的细胞群、特定细胞、细胞器或染色体等进行有效的分子病理学研究，以此保障高度的敏感性和特异性达到统一。特别是在研究细胞只占据样本细胞数较少的情况下，亦或是研究细胞呈现分散状态，因此选用激光捕获显微切割技术至关重要。现如今，在法医物证检验工作中，随着实践科技技术的不断革新，激光捕获显微切割技术开始与其他技术融合推广，不仅表现出了极为广阔的发展前景，还对法医物证检验工作产生了积极影响。因此，本文主要了解激光捕获显微切割技术的应用原理和研究进展，而后根据实际案例明确这项技术在法医物证检验中的应用体系。

1.激光捕获显微切割技术的运作机理

从本质上讲，激光捕获显微切割技术（LCM）利用低能红外激光脉冲激活热塑膜-乙烯乙酸乙烯酯膜，而后在直视的条件下，选择性地将目标细胞或者是组织碎片连接到膜中^[1]。这项技术作为现阶段最为先进的组织纯化病理技术，可以在缩短操作时间和提升纯化目的的基础上，保护蛋白质分子和核酸不会受到影响。而激光显微切割和压力弹射原理是指，PALM Microbeam系统运用弹激光来切割感兴趣的区域，而后依据激光光压将分离之后的样品装入到有裂解液的管盖中，实际情况分为三种：第一，假设组织细胞之间可以彼此分离时，那么可以直接利用光压进行弹射；第二，假设利用激光切割的组织过小时，那么在完成切割操作之后，所获取的样品要在切割激光的影响下，直接飞装到有裂解液的管中；第三，假设切割组织较大，那么在完成切割操作之后，要再进行一次激光脉冲，促使样品弹装到有裂解液的管中。

2.法医物证检验中应用激光捕获显微切割技术的研究进展

2.1样品制备呈现标准化

制备样品过程涉及到固定、包埋、切片等操作，而激光显微切割技术对准备样品有特殊要求，不仅要保障其具备细胞学形态，还要确保内部生物分子的完整性。样品准备在原有技术研究中，一直是影响技术发展和应用的主要因素，但经过科研学者和各个实验室的技术经验总结，现已提出了较为标准的样品制备方案，主要适用于不同组织或各类植物的切片制作，特别是对成熟的组织细胞而言，运用丙酮固定材料可以在一定意义上保障荧光蛋白具有活力，以此为准确辨别切割目标提供有效依据^[2]。同时，因为石蜡切片技术的含量要求要比冷冻切片更低，实际应用设备技术较为廉价，且对细胞组织形态具有极强的保存性和辨识性，所以这些技术现已成为常规操作。

2.2提取RNA和扩增技术

由于激光显微切割所运用的细胞数量较少，所以在进行芯片分析时，可以提出，RNA提取和扩增技术。现阶段，最常见的就是PicoPure试剂盒得到激光显微切割获取的微量细胞RNA，这项操作技术的效果极好；而Epicentre的RNA线性扩增试剂盒可以将低于1ng的总RNA看作是初始材料，实际特异性可以增加到100万倍，由此满足芯片分析，而实际研究的保真率可以达到80%左右。

2.3免疫LCM

虽然当前激光捕获显微切割技术得到了全面推广，但在处理固定不加盖玻片或常规染色的组织起切片时，视觉分辨率很容易受到影响。而对本身存在结构缺陷或较为复杂的结构而言，要想准确分离出来存在极高的技术难度。比如说细胞对显微切割的细胞裂解物造成污染，必然会影响实际研究结果。此时要利用特殊染色的方式让目标细胞变得更加明确。将激光补货鲜为切割技术和免疫组化融合到一起，可以准确区分形态相似，但免疫表型存在差异的细胞，比如说T细胞、B细胞等。

3.基于法学物证检验的技术研究

以强奸案为例，在法医物证检验期间，经常会有男女物质混合的检验样品，此时利用传统意义上的差异链接发很难全面清除女性成分，而最终获取的混合型样品也无法准确判断DNA，直接影响证据的应用强度。而利用激光捕获显微切割技术可以对混合检验样品进行检验，利用不同的样本制备和染色对比分析DNA分型结果，明确以去离子水处理样本、苏木素、甲基紫染色制备样品并利用切割收集、细胞图片等方式对DNA进行检测分型

^[3]。最终结果发现，激光显微切割技术最大的优势是分离细胞时可以得到单一的分型结果，而实践操作难点是如何准确寻找目标细胞并进行定位，尤其是对精子细胞而言。因此，科研学者在实证研究期间会利用较小的细胞来得到可靠的检验结果，这也是当前技术研究探讨的主要内容。经过分析发现，精子检验存在杂带的实际概率要超过上皮组织，原因在于精子检验期间实际切割次数较多，即容易引入污染。由此可见，在实践技术研究和样本制作期间，必须要保障实验室内部技术设备和实验人员具有整洁性，以此避免在操作期间产生不必要的污染影响最终研究结果。

结语

综上所述，整合研究近年来法医物证检验工作的发展情况可知，激光捕获显微切割技术在科学处理组织一致性问题的基础上，保障了实践研究结果的精确性和快速性，因此这项技术在实践研究中具有非常广阔的应用前景。从未来技术发展角度来看，科研学者要从实证研究获取的技术成果入手继续进行深化和创新，比如说改善提升免疫组化的染色步骤，开发设计应用的具体程序，促使操作人员只需要输入组织特异性参数或目标细胞就能利用计算机进行自动控制等。与此同时，还要加强专业人才的培养力度，注重从可持续发展角度全面推广技术研发和应用工作，只有这样才能在技术革新探究中获取更为优异的成果。

参考文献

[1] 陈璐瑶, 吴钧坚, 龚琳,等. 激光捕获显微切割技术在生物学方面的应用[J]. 福建轻纺, 2020(8):7.

[2] 常文婧, 赵彦艳. 激光捕获显微切割在肿瘤多组学研究中的应用进展[J]. 生物技术进展, 2020, 10(2):7.

[3] 董艳侠. 法医物证DNA自动化检验技术的有效运用分析[J]. 名医, 2020, No.82(03):114-114.