免疫组化GPC-3检测联合生物化学检查在肝癌诊断中的效果研究

印倩

吉林大学基础医学院 吉林长春 130021

【摘 要】目的：分析免疫组化措施实施后，肝癌患者诊断效果，对上述方案的应用价值进行评估。方法：选择我院100例肝癌患者（原发性肝癌、继发性肝癌各50例）作为此次研究样本，入选时间：2020年12月-2021年8月，随后选取同期入院接受健康体检者50例的数据资料与之进行对比，肝癌患者肿瘤组织行GPC-3免疫组化诊断措施，将上述患者设置为原发性肝癌组、继发性肝癌组、对照组。对比上述措施的临床效果。结果：AFU（α-L岩藻糖苷酶）、sF（血清铁蛋白）、AFP（血清甲胎蛋白）、CAl9—9（唾液酸化的乳-N-岩藻戊糖II）的平均检测水平对比结果显示，原发性肝癌组、继发性肝癌组均显著高于对照组，P<0.05，统计学有意义；联检的阳性检出率高于单独检测，P<0.05，结果有意义。结论：GPC-3免疫组化检测联合生物化学检查应用价值及可行性较高，可以显著提升疾病诊断有效率，对后续针对性治疗方案的落实具有积极意义。

【关键词】免疫组化；肝癌；诊断；应用价值

肝癌是临床多发、常见疾病类型，分为原发性肝癌、继发性肝癌，前者具有较高的死亡率，仅次于胃癌^[1]。常见病因为环境、饮食、家族史、病毒感染等，患者发病后常见疾病表现为纳差、乏力、肝区疼痛、腹胀、消瘦等。出现以上疾病表现后需及时入院接受检查与治疗，防止疾病恶化增加治疗难度，对患者生命健康产生威胁^[2]。临床研究结果显示，疾病发作早期诊断具有积极意义，可以改善后续治疗效果，对患者身心健康具有积极意义^[3]。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,GPC3)是一种包含硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)链和核心蛋白的细胞表面糖蛋白,通过磷脂酰肌醇锚(glycosylphosphatidylinositol,GPI)连接于细胞表面,与多种肿瘤的发生发展密切相关,对肿瘤细胞的增殖、凋亡及侵袭转移有着重要的调控作用^[11]。为进一步提升疾病诊断准确率，临床需将相关联合检测方案作为研究重点内容。本文主要是对原发性肝癌、继发性肝癌及健康体检者各50例进行分析，表明GPC3免疫组化优势显著，sF、CAl9.9、APF、AFu联合检测对肝癌，特别是原发性肝癌具有较高的诊断价值。

1资料与方法

1.1一般资料

以共计150例受检者作为此次调查对象（时间：2020年12月-2021年8月），根据患者实际状况将其分为以下三种：原发性肝癌组、继发性肝癌组、对照组（均为50例）。对照组50例患者：男性、女性患者分别为30例、20例；平均年龄为（63.49±1.78）岁（年龄区间为55-75岁）；原发性肝癌组50例患者：男性、女性患者分别为32例、18例；平均年龄为（63.18±1.85）岁（年龄区间为56-74岁）；继发性肝癌组50例患者：男性、女性患者分别为29例、21例；平均年龄为（63.20±1.77）岁（年龄区间为55-75岁）。SPSS26.0：三组受检者上述指标显示P>0.05，统计学无意义。

纳入标准：（1）100例患者经临床诊断确诊符合肝癌相关指征^[4]；（2）150例患者临床资料完整；（3）所有入选者者及家属均对本次研究试验知情。排除标准：（1）中途退出者；（2）血液、自身免疫性疾病；（3）恶性肿瘤疾病；（4）依从性差；（5）严重精神、意识障碍；（6）重大疾病史、过敏史；（7）语言、智力、精神及意识障碍。

1.2方法仪器与设备实验：

实验方法：所有受试者早上采集3ml空腹静脉血，以3500r/min离心5min，随后立即分离检测血清。仪器和试剂：采用化学发光免疫分析法分析cal9-9、AFP、SF。测量仪器为化学发光免疫分析仪（厂家及型号：美国雅培i2000），所用试剂为雅培i2000专用试剂盒，严格按照说明书内容实施操作。采用速率法对Afu进行测量。测量仪器为全自动生化分析仪（厂家及型号：西门子；Diininsion RXL Max），所用试剂由南京强汉医疗设备有限公司提供。判断指标：各检测项目的阳性界值分别为：sF、CAl9.9、APF、AFu各指标分别为男>280μg/L；女>145μg/L、>37u／ml、AFP>8.05ng／ml、>40U／L。将组织样本固定在4％中性缓冲甲醛(pH=7．0)固定液（北京九州柏林）；PBs缓冲液(PH7．3)，使用北京中杉金桥生物技术有限公司：即用型快捷免疫组化Pv8000试剂盒；GPC3即用型单克隆抗体；EDTA抗原修复液(PH8．0)。进行HE、IHC染色制片，观察染色效果。经两位以上高年职主治医生对诊断结果进行判读。IHC阳性表达为棕黄色颗粒，染色部位主要集中在细胞膜、细胞核、细胞质中。免疫组化采用半定量积分法：通过阳性表达细胞百分比、染色程度评分评分评价

GPC-3表达。染色程度评分：0-3分别表示为未染色、轻微着色和浅黄色得、中度着色和棕黄色、严重着色和棕褐色。阳性细胞染色率得分：1-3分分别为<1>、1/3-2/3、>2/3。根据二者的乘积判断阳性等级：0分为负（-），3-6分为阳性（10），>6分为强阳性（10）。

1.3观察指标

分析三组受检者标志物检测水平，主要分析指标包括：AFP、AFU、SF、CAl9-9；计算原发性肝癌组患者，sF、CAl9.9、APF、AFu单项及联检阳性检出率；分析GPC-3阳性表达情况。

1.4统计学分析

在SPSS26.0中输入所有样本资料，分析统计学处理（计数资料检验方式为X²，表示形式为n%；计量资料检验方式、表示形式分别为T、 ±S）结果，若结果显示P<0.05，表示对比有意义，反之（P>0.05）为无意义。

2结果

2.1 三组受检者标志物检测水平差异分析结果显示：原发性肝癌组、继发性肝癌组AFU、sF、AFP、CAl9-9的平均检测水平均显著高于对照组，P<0.05，统计学有意义。具体见表一：

表一 三组受检者标志物检测水平对比
组别	例数	AFU（U/L）	AFP（ng/ml）	CAl9-9（u/ml）	SF（μg/L）
继发性肝癌组	50	42.36±10.12a	15.45±6.26a	22.56±8.45a	258.36±100.23a
原发性肝癌组	50	55.56±28.15a	60.26±20.48a	42.36±18.45a	355.78±159.34a
对照组	50	25.12±3.23	2.89±1.12	12.36±4.58	150.34±60.29

注：^aP<0.05，表示与其他两组对比，统计学分析有意义。

2.2 原发性肝癌组单项及联检阳性检出率：联合检测阳性率显著高于单项检测，数据对比结果存在差异分析意义（P<0.05）。见表二：

表二 原发性肝癌组单项及联检阳性检出率对比
项目	例数	阳性例数	占比
AFU	50	33	66.00%
AFP	50	39	78.00%
CAl9-9	50	30	60.00%
sF	50	27	54.00%
联合检测	50	48	96.00%b

注：^bP<0.05，表示与其他两组对比，统计学分析有意义。

2.3 GPC-3阳性表达情况：与癌旁组织相比，肝癌组织中的总阳性率较高，P<0.05，统计学有意义。见表三：

表三 GPC-3阳性表达情况对比
组别	例数	-	+	++	总阳性率
肝癌组织	50	6	14	30	88.00%
癌旁组织	50	35	10	5	30.00%
X2	-	-	-	-	34.7664
P	-	-	-	-	0.0000

3讨论

肝癌具有较高的发病率，近年来呈逐年增加的趋势增长，主要包括原发性肝癌、继发性肝癌（主要来源于结直肠癌的肝转移）。目前，我国原发性肝癌占多数，可分为胆管癌、肝细胞癌。前者主要来源于慢性肝内胆管炎症，后者主要来源于肝硬化^[5]。数据研究结果结果显示，肝细胞癌在中国最常见，其次是胆管癌。目前，临床上关于原发性肝癌发病机制尚不明确，相关研究学者认为疾病发作与多种因素相关，常见包括环境、饮食乙型肝炎病毒、酒精、肝硬化、丙型肝炎病毒感染、性激素、亚硝胺类物质、黄曲霉素、饮水污染以及微量元素等^[6]。继发性肝癌可直接侵润肝脏，或通过血液、淋巴液转移等不同途径形成疾病。前者主要疾病表现为纳差、乏力、消瘦、低热、黄疸、肝区疼痛、腹胀、腹泻、上消化道出血等，常见并发症为肝癌破裂出血、上消化道出血、肝肾衰竭等^[7]。后者多表现为患者主诉乏力、食欲差、上腹或肝区闷胀不适、消瘦或发热等。患者出现以上疾病表现后需及时入院接受检查与治疗，防止对其机体健康、生活质量以及生命安全等产生消极影响。常见预防措施为，高发区新生儿和易感人群应积极接种乙肝疫苗，考虑多个肝炎病毒、病毒变体的参与，预防丙型肝炎，注意乙型和丙型肝炎的传播途径等。近年来，随着临床医学的发展与进步，免疫组化技术受到临床的广泛应用，对肝癌疾病诊断具有积极意义。免疫组化是癌症组织的基因检测。手术切除的癌组织将接受一般病理检查。将癌组织制成标本，在显微镜下观察癌细胞的形态，以确定癌症的类型。临床研究结果显示，免疫组化对检测癌细胞中的基因具有积极意义^[8]。正常人体中有500多种癌基因，癌基因可以促进细胞增殖。然而，一些细胞增殖紊乱、功能过度的癌基因会形成癌组织。每种癌症对应的癌基因均存在较大的差异性。免疫组化是检查癌基因在癌细胞中作用的重要措施，可以为后续针对性抗癌药物的实施提供指导^[9]。GPC3在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中高表达,且可以通过影响Wnt和YAP等信号通路控制HCC细胞的增殖,进而影响肿瘤的生长和转移。临床上GPC3已被用于HCC的诊断^[11]。相关研究学者表示，在进行原发性肝癌诊断中，AFP发挥了显著优势，作为是胚胎干细胞所产生的一种特殊蛋白质，具有较高的灵敏性，在疾病早期诊断中发挥了显著优势，但存在一定比例的假阳性、假阴性。此外，对于某些慢性肝病患者、生殖腺胚胎癌以及肝硬化患者，其检查后血清中AFP值也会出现升高的趋势，常与原发性肝癌混淆，若实施单一的AFP诊断方案应用受到一定的限制，可能会出现一定程度的误诊及漏诊率，不利于疾病针对性治疗^[10]。AFU可以催化糖脂、含岩藻糖的糖蛋白等生物活性大分子水解酶，是一种溶酶体酸水解酶，参与糖脂、低聚糖、糖蛋白的代谢，广泛分布于人体细胞、血液、组织、体液中。研究结果显示，肝脏和肾脏中的AFU含量较高，当肝细胞癌变时，AFU增加，释放到血液中，肿瘤细胞膜通透性增加，导致血清AFU浓度升高。数据研究结果显示，AFU活性与肿瘤大小无关，对肝细胞癌诊断的敏感性及特异性较高，一般在70-90%、85%左右。与AFP相比，AFU对于诊断直径小于3cm的原发性肝癌敏感性较高，可以提升疾病诊断阳性率，是早期原发性肝癌的重要指标，方便后续针对性治疗措施的落实。本文研究结果显示，与继发性肝癌和正常人相比，AFU在原发性肝癌患者血清中的活性较高，其增长机制尚不清楚。SF是检查营养状况、缺铁及铁超载的重要指标。研究结果显示，由于肝细胞变性或坏死，增加了血液中SF的水平，肝癌患者肝脏中大量的SF流入血液循环，对肝癌疾病诊断具有积极意义。本文研究结果证实，与健康体检相比，肝癌患者的SF水平更高，可以将其作为肝癌疾病诊断的标志物。CAl9-9含量在正常人体内较低，是一种寡糖相关抗原。临床研究结果显示，该指标是一种敏感的标志物不仅可以提升肝癌疾病诊断准确率，而且可以用于监测是否复发、疗效观察、预后判断。有学者表示，当肿瘤复发时，CA-199再次升高，与CA-199降至未降至正常患者相比，降至正常患者的生存时间较长。本文研究结果显示，与健康体检着相比，肝癌患者CA-199水平较高，且对原发性肝癌患者的阳性检出率较高，表示可以将该指标作为肝癌疾病的早期诊断，而其原发性肝癌的诊断尚不多见。除此之外，AFP、AFU、SF、CAl9-9单一诊断措施的阳性检出率较低，与联合诊断差异显著。由此分析结果可以看出，联合诊断具有较高的可行性，可以帮助患者提升疾病诊断准确率，为后续临床工作提供科学指导，进而实现患者身心健康。

综上所述，GPC3免疫组化检测对疾病检出具有积极意义，通过AFP、CAl9-9、AFU、SF联合检测可以提升疾病阳性检出率，实现疾病的早期诊断与治疗，为疾病恢复创造更多可能性，具有较高的推广及应用价值。

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