隐球菌病的实验室检测的临床研究进展分析

龙安

柳州市中医医院检验科， 广西 柳州 545001

【摘要】隐球菌病好发于免疫力低下人群，发病缓慢，临床表现不典型，患者感染后难以察觉，容易延误最佳治疗时机。近年来，临床检测技术发展和进步，对隐球菌认识的增加，使隐球菌病检出率显著提升，同时该疾病实验室检测手段、药敏试验、治疗手段均有较大的进展。对此，文章总结近几年隐球菌病的实验室检测的临床研究，以提高临床和实验室检测对隐球菌的认识，加强隐球菌病诊断和治疗效果。

【关键词】隐球菌病；实验室检测；研究进展

隐球菌病是因隐球菌入侵肺部而感染人体的散播性感染性疾病，大部分病菌局限于肺部，当人体免疫能力下降时，部分病原菌会随血液传播扩散至其他组织和器官，其中皮肤和中枢神经系统是继发感染的常见部位。目前，隐球菌传播途径尚未明确，传播媒介一般为鸽子粪，人与人之间传播少见。隐球菌病患者临床表现主要为低热、胸痛、咳嗽、恶心、呕吐等，缺乏特异性，难以根据临床症状检出该疾病^[1]。随着病原菌扩散，会对神经细胞、皮肤、脏器和脊柱造成损伤，威胁患者的生命。隐球菌病无特效药治疗，只能通过对症治疗缓解病情，抑制病原菌的扩散。据报道，2014年隐球菌病性脑膜炎患者约22万例，其中死亡率为81.82%左右。可见，隐球菌病继发感染疾病会增加患者的死亡风险。对此，临床应加强隐球菌病早期诊断，及时发现病情，阻止病情恶化。由于隐球菌病临床症状、影像学特征与肺癌、肺结核、肺炎具有相似性，诊断具有一定的难度。因此，文章总结该疾病的实验室检测研究进展，为临床深入认识和诊断该疾病提供参考。

1.隐球菌的分类

隐球菌是一种环境腐生菌，主要从鸽子粪和土壤中分解，隐球菌至少37个种类，其中格特隐球菌、新型隐球菌是入侵感染人体的常见隐球菌。格特隐球菌、新型隐球菌被称为格特隐球菌复合体或新型隐球菌复合体。二者区别在于格特隐球菌感染常见于免疫功能正常人群，新型隐球菌感染常见于免疫功能受损人群。根据传统分型，新型隐球菌分为3个变种，分别为新型隐球菌新生变种、新型隐球菌格鲁比变种、新型隐球菌混合变种，而格特隐球菌不分变种。但随着临床对隐球菌进化的深入了解，在格特隐球菌分型问题中存在较多的争议。隐球菌分型方法包括小卫星或微卫星特异引物扩增重复高变序列、随机扩增DNA多态性技术、多位点序列分型技术等。目前认为新型隐球菌复合体和格特隐球菌复合体中有7种是动物与人类的病原菌，其中包括格特隐球菌5个变种和新型隐球菌的2个变种，临床流行型别为新型隐球菌血清A型VBⅠ基因型^[2]。

2.隐球菌的检测

目前，临床实验室鉴定隐球菌的方法主要为培养鉴定法、墨汁染色法、蛋白鉴定法等。

2.1培养鉴定法

培养鉴定法是取出带有隐球菌的标本，将标本放置在沙保罗培养基上，培养基培养温度设定25℃和37℃，培养2-4d，可见菌落生长。对菌落采用ID32C、API-20C Aux微生物鉴定系统，能鉴定出格特隐球菌和新型隐球菌。同时刀豆氨酸-甘氨酸-溴百里酚琼脂可以依据菌落产生色素颜色有效区分新型隐球菌和格特隐球菌，新型隐球菌菌落颜色没有变化，而格特隐球菌菌落产生蓝色色素^[3]。这是因为格特隐球菌甘氨酸在琼脂上呈蓝色，但也有假丝酵母菌产生蓝色色素，故还需进一步鉴别区分。

2.2墨汁染色法

墨汁染色是临床实验室检测新型隐球菌的新型方法之一，操作便捷，检测速度快。在检测中，经光学显微镜下见新型隐球菌酵母细胞周围出现一圈透亮的厚荚膜。有研究^[4]指出，非艾滋病病毒感染隐球菌脑膜炎患者脑脊液隐球菌墨汁染色诊断灵敏度高达45%左右，而艾滋病病毒感染者检测灵敏度高达80%。

2.3蛋白鉴定法

蛋白鉴定法是采用基质辅助激光电离或解析飞行时间质谱分析鉴定系统对新型隐球菌和格特隐球菌进行鉴别，大多数实验室自行扩增质谱数据库，是为了提升鉴定能力。这是因为质谱可以更好地区分隐球菌不同分子型和血清型，所以有较好的鉴定效果，还能缩减鉴定时间^[5]。

2.4分子鉴定法

分子鉴定法主要用于确诊疑似隐球菌病，在培养菌落不生长、患者已服用大剂量抗真菌药物等情况下可以发挥重要作用。基于核酸的分子检测方法加入隐球菌的特异性引物，既能鉴定培养物，又能直接检测血压、组织、脑脊液等样本中的隐球菌^[6]。

2.5胶体金测定法

胶体金测定法是一种夹心免疫层析试纸条试验，具有标本操作简单快速、测定结果易读等优点，对隐球菌感染检测诊断具有较高的特异性和灵敏度，广泛用于隐球菌感染高危者筛查，同时还能检测到其他实验室测定方法检测为阴性的格特隐球。虽然胶体金测定法测定隐球菌具有较高的敏感度，但也假阳性与假阴性的可能，对于溶血、血清抗原少和疾病早期的检测标本、抗原浓度＞0.140 mg·mL^－1检测标本检测出隐球菌的假阴性较高，对此可以采用半定量滴度检测排查是否存在假阴性。此外，曲霉菌和隐球菌发生交叉反应会造成假阳性结果，通过降低标本浓度后，可以减少假阳性的发生情况。胶体金测定法的准确度与患者检测标本有密切关联，脑脊液、血清检测标本灵敏度、特异度分别高达100%、98%，而尿液标本灵敏度最高仅达到92%。

3.隐球菌药敏试验

通过开展隐球菌药敏试验，可以为临床治疗提供参考依据，及时调整治疗方案，选择具有针对性抗菌活性、耐药性低的药物治疗患者，以增强疗效，避免药物滥用和病情加重。临床实验室开展的隐球菌药敏试验包括 Rosco 纸片扩散法、E-test 真菌药敏试条、微量肉汤稀释法、酵母菌纸片扩散药敏试验方法^[7]。常用的商品化微量肉汤稀释法包括比色法真菌药敏板和 ATB Fungus 真菌药敏试条。

4.结语

隐球菌病患病率逐渐提升，引起社会的关注和重视，临床实验室检测技术也逐渐提升，包括分子检测技术、抗原检测和质谱技术等，其中分子检测技术可以鉴定新型隐球菌和格特隐球菌，还能对隐球菌基因分型，同时实验室药敏试验技术也在更新，为临床诊治该疾病提供重要依据。

参考文献

[1]雷莉莉,张宇,邹珏,等.57例免疫功能正常肺隐球菌病临床特征[J].中华医院感染学杂志,2021,31(13):1941-1945.

[2]贾鑫淼,肖盟,孙天舒,等.格特隐球菌基因组学研究进展[J].协和医学杂志,2019,10(5):505-513.

[3]杨丹,徐雯慧.显色培养基对酵母菌MALDI-TOF MS鉴定结果的影响评估[J].中华医院感染学杂志,2019,29(18):2736-2740.

[4]黄黎俐,刘五高,林德.直接墨汁染色在脑脊液培养阳性液中隐球菌检测的应用[J].中国卫生检验杂志,2019,29(5):557-558+561.

[5]吴思颖,康梅,刘雅,等.MALDI-TOF MS对新生隐球菌和格特隐球菌的快速鉴定与分析[J].国际检验医学杂志,2020,41(14):1699-1702

[6].尤丽吐孜·许合热提,哈地丽亚·哈斯木,王晓东,等.新疆首次临床分离新生隐球菌菌株分子鉴定、基因分型及体外药物敏感性研究[J].中国真菌学杂志,2016,11(6):327-331.

[7]朱均昊,韩德忞,李莉,等.华东地区新生隐球菌药物敏感性分析[J].检验医学,2016,31(09):761-764.