利用气相色谱-串联质谱法测定螺旋霉素中的N-亚硝基二甲胺

张宇驰

浙江美诺华药物化学有限公司 浙江 绍兴 312300

摘要：气相色谱-串联质谱法是当前测定多种药品的一种有效方法，其测定的结果相对准确，且效率颇高，因而得到了很好地应用。本文主要是研究了使用该方法来测定螺旋霉素中的N-亚硝基二甲胺，最终判断了该种测定方法的有效性。

关键词：N-亚硝基二甲胺；气相色谱-串联质谱法；螺旋霉素

引言：N-亚硝基二甲胺是一种致癌的物质，其在许多药物当中都含有，若是其含量过高会对人体造成损害，因而对药品中的N-亚硝基二甲胺进行有效测定是十分重要的。

1.测定实验分析

1.1仪器与试剂的选择

本次测定实验选择的相关试剂主要为N-亚硝基二甲胺试剂，其浓度为99.0%、盐酸与硫酸的分析纯试剂，由相关的化学试剂厂所提供、二氯甲烷色谱纯试剂、N₂气以及He气，其规格皆为>99.999%、水试剂为标准的纯净水，可选择购买饮用纯净水。相关仪器包括：气相色谱三重四级杆质谱联用仪，其型号为8890-7010B、色谱柱型号为VF-WAXms型、精度颇高的电子天平、高速冷冻离心机，型号为LR10-2、多管涡旋混合仪器，型号为MTV-100型。

1.2实验仪器的相关参数

调整仪器使用的内部参数，其中主要是调整气相色谱参数和质谱参数。气相色谱参数为：其柱内升温采用程序升温的模式，设置一开始的温度为40摄氏度，并保持这个温度持续30秒，然后开始进行升温，其升温的速率为每分钟20摄氏度，一直到升至200摄氏度，然后调整升温速率为每分钟60摄氏度，升至240摄氏度，保持这个温度五分钟；其进样口的温度调整为250摄氏度，使用He气作为载气，气体的内部流速约为每分钟1毫升，在进样的过程中主要是采用脉冲不分流的方式，设置压力值为20psi，持续脉冲1分钟，最后的实际进样量为2μL。

质谱的相关参数为，设置离子源温度为250摄氏度，其传输线的具体温度同样为250摄氏度，将N₂气作为碰撞气，其具体的流速为每分钟1.5毫升，将He气作为淬灭气，其具体流速为每分钟2.25毫升，设置增益因子为10，其电压为70ev，采用多反应扫描的方式，待到溶剂延迟五分钟左右后扫描，设计74.0-44.0定量离子对的碰撞能量为5ev，其实际保持时间为100毫秒；设计74.0-42.0定性离子对的碰撞能量为20ev，其实际保持时间为100毫秒^[1]。

1.3制备测定溶液

一是制备标准品溶液，其主要是使用电子天平将N-亚硝基二甲胺进行精密称重，然后对N-亚硝基二甲胺进行稀释以制备溶液，使用的稀释剂为二氯甲烷，最终获得的标准品溶液浓度为每升0.5g，再将该标准品溶液稀释成为浓度为0.25μg/L、0.5μg/L、1μg/L、2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L以及50μg/L的标准品溶液；二是制备供试品溶液，取规格为50毫升的离心管设备，将0.5螺旋霉素药品放入到离心管当中，然后加入硫酸溶液，其浓度为每升0.5摩尔，加入的量约为5毫升，充分振荡使其均匀成溶解液，然后再向离心管中加入二氯甲烷，其加入了量约为20毫升，然后振荡十分钟后进行萃取，萃取过程中的离心速率为每分钟6000转，处理5分钟后将溶解液下层的二氯甲烷提取出，再使用规格为0.45μm的尼龙滤膜来进行过滤，过滤后的液体即为待测液。

1.4建立标准曲线并测定其回收率

将上述制备的不同浓度标准品工作液取出进行连续进样工作，先是建立起测量分析的标准曲线，其x轴表示为溶液浓度、y轴表示为面积，建立一个线性回归方程曲线。在进行回收率测定的过程中，将测定阳性供试品溶液的加标回收率以及空白溶剂的加标回收率，形成对比以供分析，标准品工作液的加标测定，选择浓度为1μg/L、2.5μg/L、5μg/L，测定基础液为螺旋霉素溶液和硫酸溶液，向其中加入以上三种浓度的标准品工作液，然后对其溶液进行振荡处理、离心处理以及过滤处理，获得最终待测液，然后对回收率进行计算。最后，分别取不同批次的螺旋霉素溶液来进行检测，测定其含有的N-亚硝基二甲胺情况。

2.实验结果讨论

2.1考察系统的适用性

对测定系统适用性的考察，主要是将标准品工作液的图谱、空白溶剂图谱以及供试品溶液的图谱进行对比分析，最终确定N-亚硝基二甲胺的实际保留时间约为5.515分钟，同时，通过对供试品溶液的图谱和空白溶剂图谱的分析可知，这两种溶液的N-亚硝基二甲胺色谱峰值的检测不会受到干扰，这也说明这种测定系统的方式具有较好的专属性，连续测定六次浓度为0.5μg/L的标准品工作液，然后对其相对标准偏差进行计算，主要是可通过图谱的峰面积计算，其最终的计算结果为0.84%，同时，N-亚硝基二甲胺的峰值信噪比都是在10以上。

2.2考察供试品溶液的制备方法

先是建立标准曲线，将N-亚硝基二甲胺标准品溶液的浓度作为X轴，Y轴表示面积，其具体构建曲线的线性回归方程表示为：14178.5*x+5306.7=y，其具体的线性范围为0.25μg/L到50μg/L之间，相关系数取0.99998，再运用相关公式计算定量限与检测限，获得仪器的定量限为0.3819μg/L，其检测限为0.1260μg/L。

对供试品溶液的制备进行考察，先是考察其对硫酸溶液的使用，螺旋霉素这种药品本身是碱性药品，其一般萃取溶解都是选择酸，在中性的水中不容易溶解，一般溶解后的颜色为淡黄色，而若是使用醋酸或是磷酸作为溶解液时，其萃取后所获得的待测液，即二氯甲烷为淡黄色，这也说明在有机相和水相当中，螺旋霉素都有分布，且实际分布均匀，而若是降低酸溶液的浓度，则二氯甲烷不会出现淡黄色情况，但在后续的测定中，其N-亚硝基二甲胺的浓度会变大，而若是使用硫酸溶液，则不会出现以上的问题，因而相关实验选择硫酸溶液，其溶解的速度较快且十分充分，最适合的溶解浓度为每升0.2摩尔，最终获得的检测结果也是十分稳定。再对萃取的最适体积进行考察，本次实验主要是使用液液萃取法，为了判断其萃取效果最好的溶液体积，取不同体积的硫酸溶液与标准品工作液进行混合，然后进行萃取，最后对回收率进行计算，发现其最适体积时，二氯甲烷的体积应当保持20毫升，而水相体积则约为5毫升，这时计算的回收率高达99.3%。，萃取的效果也是最佳的^[2]。

2.3回收率测定结果

选择标准品工作液的浓度为1μg/L、2.5μg/L以及5μg/L这三种，对螺旋霉素加标回收率以及空白溶剂加标回收率进行进行计算。通过其结果发现，在三种不同浓度的标准品工作液下，螺旋霉素的加标回收率波动范围在103.23%-107.87%之间，而平均回收率约为105.4%，其RSD的波动范围约为0.56%-0.64%；空白溶剂的加标回收率波动范围在100.20%-103.07%之间，而平均回收率约为101.9%，其RSD的波动范围约为0.27%-0.72%。

2.4考察溶液稳定性与方法重复性

对溶液稳定性进行考察，其在24小时内计算螺旋霉素供试品溶液的峰面积，获得其RSD的计算结果约为3.14%，然后取浓度为0.5μg/L的标准品工作液，对其峰面积进行计算，获得其RSD的计算结果约为3.42%，这两项结果都符合相关要求。考察其方法的重复性，主要是取螺旋霉素的供试品溶液共六份，然后计算其RSD的结果，发现其均为4.25%，这也说明了这种方法具有着较好的重复性。

结论：综上所述，本文中研究了利用气相色谱-串联质谱法来测定螺旋霉素中N-亚硝基二甲胺的具体方法，其主要是通过萃取后溶于二氯甲烷后进行测定，且测定的结果比较准确。由本文分析可知，该方法的优点在于使用的液液萃取法有效去除了螺旋霉素中的杂质，同时其使用仪器可进行大批量、多种药物的测定，效率较高。

参考文献：

[1]王璐,刘峰.气相色谱-串联质谱法测定芬地柞酸左旋氯哌斯汀中N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺含量[J].中国药业,2021,30(15):81-85.

[2]王文华,臧文生,张宏周.气相色谱-串联质谱法测定螺旋霉素中的N-亚硝基二甲胺[J/OL].应用化学:1-9[2021-08-30].