复方烟酸片中辛伐他汀有关物质方法的建立

傅超婷

海南通用三洋药业有限公司 570100

复方烟酸缓释片是以缓释烟酸与辛伐他汀为主药制成的复方口服固体制剂，已在国外上市但未在国内上市，原研药缓释烟酸辛伐他汀片由美国Abbott公司研制，2008年2月获FDA批准上市，商品名为SIMCOR，用于治疗单用辛伐他汀或单用缓释烟酸治疗效果欠佳的高甘油三酯血症（Fredrickson分型Ⅳ）患者，降低其TG^[1]。本文参照USP27 Oil-and Water-Soluble Vitamins with Mineral Tablets质量标准^[1]、辛伐他汀质量标准WS₁-（X-064）-2003Z^[2]、辛伐他汀片质量标准WS₁-（X-240）-2004Z^[3]、中国药典2005年版二部烟酸片质量标准^[4]对本品辛伐他汀有关物进行了系统研究，确定了本品有关物质检测方法，为今后有效地控制本品有关物质提供了科学依据。

一、样品及对照品来源

样品：复方烟酸缓释片，海南通用三洋药业有限公司自制。

样品规格、批号详见下表：

规格(1) 0.5g/20mg：每片含烟酸0.5g与辛伐他汀20mg；

批号：070924、070926、070928、

规格(2) 1.0g/20mg：每片含烟酸1.0g与辛伐他汀20mg。

批号：071210、071212、071214

对照品：烟酸（批号：100434-200301）、辛伐他汀（批号：100601-200502）均由中国药品生物制品检定所提供。

二、辛伐他汀有关物质检测条件

参考标准号为WS₁-（X-064）-2003Z的辛伐他汀质量标准^[2]中有关物质的测定方法，采用高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录Ⅴ D）测定辛伐他汀的有关物质。

仪器：日立L-7110泵；L-7420紫外检测器；

色谱柱：VP-ODS 150mm×4.6mm；

流动相：乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH4.5）（65：35）；

检测波长：238nm；流速：1ml/min。

理论板数按辛伐他汀峰计算应不低于2000，辛伐他汀与洛伐他汀两峰之间的分离度应大于3。

三、辛伐他汀有关物质方法学验证

3.1 流动相及溶剂选择

参考标准号为WS₁-（X-064）-2003Z的辛伐他汀质量标准^[2]中有关物质的测定方法及标准号为WS₁-（X-240）-2004Z的辛伐他汀片质量标准^[3]中含量的测定方法，以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（pH4.5）（65：35）为流动相，检测波长为238nm，流速为1.0ml/min，以乙腈-0.05mol/L醋酸钠溶液（pH4.0）（80：20）为溶剂。

取辛伐他汀适量，加乙腈-0.05mol/L醋酸钠溶液（pH4.0）（80：20）制成每1ml含0.08mg的溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：辛伐他汀的主峰保留时间为11.51分钟，理论塔板数为9778，见附图10-23。

另取辛伐他汀与洛伐他汀的混合溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明：辛伐他汀与洛伐他汀的分离度为7.3，符合要求。

3.2 检测波长的选择

取辛伐他汀对照品适量，用乙腈-0.05mol/L醋酸钠溶液（pH4.0）（80：20）制成每1ml约含10μg的溶液，照紫外-可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录Ⅳ A），在200~400nm波长范围内测定吸光度，结果表明：辛伐他汀在238nm的波长处有最大吸收，同时参照辛伐他汀质量标准WS₁-（X-064）-2003Z^[2]中有关物质的测定波长238nm，选择238nm作为辛伐他汀有关物质的检测波长。

3.3 破坏试验

采用070924批规格0.5g/20mg的复方烟酸缓释片进行破坏试验。取本品5片，分别小心取下包衣层，置250ml量瓶中，加乙腈-0.05mol/L醋酸钠溶液（pH4.0）（80：20）适量，强力振摇使辛伐他汀溶解，并用上述溶液稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。

a、高温破坏 取贮备液5ml，置10ml量瓶中，水浴加热40分钟，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液20μl注入液相色谱仪。结果表明：本法能有效地将杂质峰与主峰分离。

b、酸破坏 取贮备液5ml，置10ml量瓶中，加0.5mol/L盐酸溶液1ml，置水浴加热5分钟，放冷，用0.5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，加溶剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将杂质峰与主峰分离。

c、碱破坏 取贮备液5ml，置10ml量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液1滴，放置5分钟（呈中性），加溶剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将杂质峰与主峰分离。

d、氧化破坏 取贮备液5ml，置10ml量瓶中，加30%双氧水1ml，放置30分钟，再水浴加热10分钟，放冷，加上述溶剂稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将各杂质峰与主峰分离。

e、光照破坏 取本品1片，小心取下包衣层，置50ml量瓶中，加上述溶剂稀释至刻度，置光照度约4500lx的光照箱中放置24小时，过滤，取续滤液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：本法能有效地将各杂质峰与主峰分离。

3.4 空白辅料干扰试验

称取空白辅料适量，用上述溶剂制成适当浓度的溶液，滤过，取续滤液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明：空白辅料不干扰本品中辛伐他汀有关物质的测定。

3.5 定量限和检测限

定量限　精密称取辛伐他汀对照品适量，用上述溶剂溶解并稀释成每1ml含辛伐他汀0.166μg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，测得样品的响应值约为基线噪音信号的10倍高，故辛伐他汀的定量限为1.66ng。

检测限　精密称取辛伐他汀对照品适量，用上述溶剂溶解并稀释成每1ml含辛伐他汀0.083μg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，测得样品的响应值约为基线噪音信号的3倍高，故辛伐他汀的检测限为0.83ng。

3.6 线性范围及回归方程

精密称取辛伐他汀对照品20.74mg，置50ml量瓶中，加乙腈-0.05mol/L醋酸钠溶液（pH4.0）（80：20）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用上述溶液稀释至刻度，摇匀；分别精密量取0.2、0.6、1.0、1.4、1.8ml，置5个10ml量瓶中，用上述溶液稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积对浓度作曲线，用最小二乘法计算回归方程及相关系数。结果见表1。

表1　辛伐他汀的不同浓度与其相应的峰面积

Amount（μg/ml）	0.830	2.489	4.148	5.807	7.466
Area	20520	62438	102558	144773	186179

回归方程：Amount（μg/ml）=4.010e^-005×Area+5.492e^-003

相关系数：r=1.0000

结果表明：辛伐他汀在浓度为0.8~7.4μg/ml的范围内线性关系良好。

3.7 精密度试验

取辛伐他汀有关物质线性项下中间浓度的溶液，重复进样6次，记录色谱图，并计算主峰面积的相对标准偏差，结果见表2。

表2　复方烟酸缓释片中辛伐他汀有关物质精密度试验结果

序 号	1	2	3	4	5	6	RSD（%）
峰面积	101919	101940	101680	101814	101699	101330	0.22

结果表明：复方烟酸缓释片中辛伐他汀有关物质测定精密度试验结果良好。3.8 溶液稳定性试验

取辛伐他汀有关物质线性项下中间浓度的溶液，分别于0、2、4、6、8小时进样，记录色谱图，并计算主峰面积的相对标准偏差，结果见表3。

表3　复方烟酸缓释片中辛伐他汀有关物质溶液稳定性试验结果

时间（小时）	0	2	4	6	8	RSD（%）
峰面积	102558	101699	101998	102280	102332	0.32

结果表明：复方烟酸缓释片中辛伐他汀有关物质测定溶液至少在8小时内稳定。

四、辛伐他汀有关物质的测定

取本品10片，分别小心取下包衣层，置500ml量瓶中，加乙腈-0.05mol/L醋酸钠溶液（pH4.0）（80：20）适量，强力振摇使辛伐他汀溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用上述溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰高约为满量程的20%；精密量取供试品溶液及对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至辛伐他汀主峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，量取单个最大杂质峰面积与对照溶液主峰面积的比值得单个最大杂质含量，量取各杂质峰面积之和与对照溶液主峰面积的比值即得总杂质含量。依法检验两种规格各三批样品中辛伐他汀的有关物质，结果见表4、5。

表4　复方烟酸缓释片（规格0.5g/20mg）中辛伐他汀有关物质测定结果

批 号	070924	070926	070928
单个最大杂质（%）	0.11	0.11	0.11
总杂质（%）	0.67	0.70	0.74

表5　复方烟酸缓释片（规格1.0g/20mg）中辛伐他汀有关物质测定结果

批 号	071210	071212	071214
单个最大杂质（%）	0.14	0.13	0.12
总杂质（%）	0.78	0.70	0.78

结果表明：两种规格各三批复方烟酸缓释片中辛伐他汀单个最大杂质均小于0.5%，总杂质均小于2.0%。

五、结论

采用此色谱条件下，辛伐他汀在浓度0.8~7.4μg/ml的范围内，峰面积对浓度呈良好的线性关系，Amount=4.010e^-005×Area+5.492e^-003，r=1.0000；且能有效地将热、酸、碱、氧化及光照等各条件下降解的杂质与主峰完全分离，专属性强；辛伐他汀的定量限为1.66ng；检测限为0.83ng；空白辅料不干扰辛伐他汀有关物质的测定；重复性进样6次的RSD为0.22%，即精密度高；溶液在8小时内稳定，RSD=0.32%。

经验证本方法可用于本品辛伐他汀有关物的测定，为本品质量研究提供科学依据。

参考文献：

[1]USP27 Oil-and Water-Soluble Vitamins with Mineral Tablets质量标准.

[2]国家药典委员会编. 国家食品药品监督管理局国家药品标准: 新药转正标准第34册,标准号为: WS₁-（X-064）-2003Z的辛伐他汀质量标准.

[3]国家药典委员会编. 国家食品药品监督管理局国家药品标准: 新药转正标准第57册,标准号为: WS₁-（X-240）-2004Z的辛伐他汀片质量标准.

[4]中国药典2005年版二部 烟酸片质量标准.