气相色谱法测定饲料中百里香酚的含量

郝宗贤

安徽海华科技集团有限公司 安徽省蚌埠市 233316

摘要：建立了气相色谱法测定饲料中百里香酚含量的方法，对饲料的前处理方法进行了讨论，比较了不同升温程序获得的提取结果，选择了最优的升温程序，方法的回收率在99.5%~99.6%，精密度RSD≤5%。

关键词：气相色谱法;饲料；百里香酚

引言

百里香酚是我国饲料中常被添加的一种饲料香味剂,香味剂的作用是通过添加,来改善三饲料的口味和香味,以促进牲畜进食,提高牲畜的生长效率,百里香酚除了具有一定的麝香的香味之外,还有一定的杀菌作用,因此在我国的饲料中基本上都会添加百里香酚以提高饲料的口感和品质。对于百里香酚的测定，一般采用气相色谱法或者高效液相色谱法，本文重点讨论的是气相色谱法。根据GB 1886.139-2015的规定，对于饲料中的百里香酚含量，采用的是GB/T 11538-2006,这一标准是一个精油通用性标准，本文以GB/T 11538-2006为依据，针对饲料中百里香酚的特点，通过反复试验，制定出一个操作性更强的测定方法，为了规范香味剂的市场，更加准确的进行饲料中百里香酚的质量控制提供一些理论性的参考。根据试验结果，本方法的可操作性更强，前处理方法简便快捷，只需要很短的时间就可以准确获得试验结果，基本可以满足目前我国市面上流通的饲料的检测^[1]。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1样品

饲料由饲料市场购得。

1.1.2仪器和设备

仪器和设备详见表1

表1 仪器和设备

仪器	型号	生产厂家
气相色谱仪	Aglient 7890	美国安捷伦公司
超声波清洗器	SK5200LHC	上海科导超声波清洗器有限责任公司
高速离心机	Himac CF 16RX	日本Hitachi公司
超纯水机	Million-Q型	美国Millipore公司
分析天平	ME104	瑞士梅特勒-托利多公司

1.1.3试剂和溶液

试剂和溶液见表2

表2试剂和溶液

		纯度	生产厂家
试剂	乙腈、乙醇、正己烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、石油醚（30～60 ℃）	分析纯	西安化学试剂厂
标准物质	百里香酚对照品	≥99.0%	美国Sigma-Aldrich 公司
实验室用水	超纯水		由超纯水机试验当日制得
1mg/L标准溶液			95%乙醇配制，在2~8 ℃之间避光储存，有效期 1 个月
1.0、5.0、10.0、50.0、100、500ug/ml标准溶液			95%乙醇配制，现配现用

1.2 实验方法

1.2.1样品前处理

用分析天平准确量取市售饲料样品3g（精确到0.0001g）于50ml的离心管中，先加少量的水润湿样品，再用量筒准确的量取无水乙醇20mL到离心管中，用手轻轻振荡让样品混匀，再讲离心管至于超声波清洗机中超声25min左右。再将离心管放置于高速离心机中离心，离心时间设定为6min，将上清液用玻璃棒转移到50mL的容量瓶中，再将离心管里的残渣重复以上提取步骤再提取以一次，将提取液转移到50mL容量瓶中，然后用无水乙醇定容，充分摇匀，在将容量瓶中的溶液过0.45um的有机膜，再进入气相色谱仪进行检测^[2]。

1.2.2色谱分离条件

色谱分离条件详见表3

表3 色谱分离条件

条件	设置
毛 细 管 色 谱 柱	Agilent HP- Innowax，30 m ×0.32 mm×0.25 μm
升温程序	初始温度 75℃，以15 ℃/min 的速率升温至 150 ℃，以 5℃/min 升温至180 ℃，保持2 min，以20 ℃/min升温至240 ℃
进样口温度	240 ℃
分流比	10:1
进样量	1mL
载气	氮气

1.2.3定量检测

将仪器调制到最佳工作条件，将标准溶液进样，以被测组分的浓度为横坐标，以被测组分的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，将试样溶液以相同条件进样，获得试样溶液的浓度。

2结果和讨论

2.1色谱条件的确定

2.1.1选择气相色谱柱

百里香酚属于小分子化合物，从极性来看，它的极性较弱，从结构来看，它含有氧基团，因此极性色谱柱或者中等极性的色谱柱更加适合分离百里香酚。

2.1.2升温程序

不同的升温程序有可能得到不同的分离效果。笔者固定了色谱柱，设置不同的升温程序，根据分离结果选择最优的升温程序，分析结果见表4。

表4 选择不同的升温程序得到的色谱分离结果

色谱柱 型号	升温程序	分离度		保留时间
Agilent HP- Innowax，30 m ×0.32 mm×0.25 μm	初始温度60 ℃，以10 ℃/min升温至140 ℃，以4 ℃/min升至200 ℃，保持2 min，以25 ℃/min升温至240 ℃。		2.2	16.5
	初始温度 75℃，以15 ℃/min 的速率升温至 150 ℃，以 5℃/min 升温至180 ℃，保持2 min，以20 ℃/min升温至240 ℃		2.9	13.0

综合分离度和保留时间，程序2的分离结果更好，因此选择程序2作为本次试验的升温程序。

2.2样品前处理的优化

一般饲料中百里香酚测定的前处理可以采用两种方式，一种是超声波提取，一种是索氏，提取，两种提取方法的回收率如图1.

图1 两种提取方法的回收率对比

由图1可见，超声提取的回收率要远高于索氏提取的回收率，因此本次试验选择超声提取作为提取方法。

2.3方法准确度和精密度

选择几种由代表性的市售饲料样品，包括仔猪饲料、鸡饲料，按照1.2进行测定，并进行20mg/kg的加标，方法的准确度和精密度见表5.

表5方法准确度和精密度

样品	回收率(%)	RSD
仔猪饲料	99.5	2.5
鸡饲料	99.6	2.6

由表5可见，方法的回收率在99.5%~99.6%，精密度RSD≤5%。

3结论

本文在国标的基础上建立了气相色谱法测定饲料中的百里香酚含量，对饲料提取方法做出了优化，并且设定了较为合适的升温程序，方法的回收率在99.5%~99.6%，精密度RSD≤5%，该方法的前处理过程简单，可以在很短的时间内得到较为准确的检测结果，符合实验室检测的要求^[3]。

参考文献：

[1]贺习文,李宏,赵彩会,等. Qu ECh ERS高效液相色谱法测定饲料中牛至香酚新方法的研究 [J].饲料工业, 2019, 40(22): 55-60.

[2]任玉琴,张晓丽.高效液相色谱法同时测定饲料香味剂中肉桂醛、丁香酚、香芹酚和百里香酚含量的研究[J].中国饲料, 2018 (9): 60-62.]

[3]梁建勇,李晓康,焦婷,等.牛至精油在畜禽生产中的研究进展 [J].中国饲料, 2017(9): 22-25.