分子生物学检验包括哪些方面？

王豫川

绵阳市人民医院 四川绵阳 621000

国际标准分类中，分子生物学检测方法涉及到农业和林业、微生物学、肉、肉制品和其他动物类食品、巧克力、食品试验和分析的一般方法。在临床上也有广泛的应用：

一、分子生物学检验包括哪些方面？

（一）肝炎系列病毒核酸定量
提高窗口期感染者的检出率；评估临床治疗效果和预后；血液制品和献血员的筛选；垂直传播风险评估,有助于指导怀孕；母乳喂养风险评估。
乙型肝炎病毒基因分型及耐药突变:
指导乙肝抗病毒用药，评估是否产生耐药，对及时调整治疗方案、合理用药及提高疗效具有重要的指导意义。
丙型肝炎病毒基因分型:
预后评估：不同HCV基因型感染者的临床表现、肝病严重程度及慢性化病程进展不同。
指导治疗：不同HCV基因型感染者对干扰素应答能力不同，抗病毒治疗的效果也不同，制定个体化治疗方案。
（二）性病系列相关病原体核酸检测
淋球菌NG-DNA： 用于淋病的快速诊断；指导用药和评价疗效。
沙眼衣原体CT-DNA：辅助诊断生殖泌尿道沙眼衣原体感染；指导用药和评价疗效。
解脲脲原体UU-DNA：辅助诊断生殖泌尿道解脲脲原体感染；指导用药和评价疗效。
单纯疱疹病毒HSVⅡ-DNA：为临床诊断疱疹病毒感染提供病原学依据；指导用药和评价疗效。
（三）呼吸道系列相关病原体核酸检测
肺炎支原体MP-DNA：
MP感染可引起咽炎、支气管炎和肺炎；为临床诊断MP感染提供病原学依据;评估治疗效果。
结核杆菌TB-DNA：
为早期、快速、准确地诊断结核病提供依据——肺结核、播散性结核和各脏器的结核病、中枢神经系统结核病、泌尿生殖道结核病、结核性胸膜炎；评估治疗效果；早期、快速、准确地诊断结核菌感染。
（四）优生优育系列相关病原体核酸检测
巨细胞病毒HCMV-DNA：
辅助诊断巨细胞病毒感染，先天、围产期感然(宫内感染、母婴传播)；后天感染；致畸病因；CMV感染是器官移植后最常见的感染之一
单纯疱疹病毒HSVI、HSVⅡ-DNA：
辅助诊断单纯疱疹病毒感染，HSV I主要引起口腔粘膜、口唇、鼻前庭的热性疱疹和溃疡以及眼角膜炎等。HSVII主要引起生殖器官疱疹和腰部以下的感染。
（五）肿瘤个体化治疗相关检测项目
用于检测EGFR、KRAS、B-raf基因突变的检测，提供突变状态的定性评估，主要为临床对肺癌或大肠癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考，辅助临床医生筛选出可受益于肿瘤靶向药物的癌症患者。通过对EGFR基因第18、19、20和21外显子的多个位点突变进行检测，外显子18、19、21上的位点突变提示患者对靶向药物敏感，而外显子20上的T790M、20插入突变则提示耐药。
（六）其它项
EB病毒EB-DNA：
早期诊断EB病毒感染；临床疗效评估。
人乳头瘤病毒及分型检测：
尖锐湿疣辅助诊断；妇女子宫颈癌的早期筛查，子宫颈上皮内高度病变和癌症治疗的监测。
低危型：引起外生殖器良性病变 (尖锐湿疣等),其中由HPV6、11型感染所致的尖锐湿疣占总数的90％。
高危型：引起宫颈癌等恶性肿瘤,尤其16、18型。
B族链球菌核酸检测：辅助诊断妊娠孕妇及新生儿B族链球菌感染。
BK 病毒核酸检测：为肾移植术后 BK病毒感染提供诊断依据。

二、常用方法

1、细胞增殖法
许多细胞因子具有细胞生长因子活性，特别是白细胞介素，如IL-2刺激T细胞生长、IL-3刺激肥大细胞生长、IL-6刺激浆细胞生长等。利用这一特性，现已筛选出一些对特定细胞因子起反应的细胞，并建立了只依赖于某种因子的细胞系，即依赖细胞株（简称依赖株）。这些依赖株在通常情况下不能存活，只有在加入特定因子后才能增殖医|学教育网搜集整理。例如IL-2依赖株CTLL-2在不含IL-2的培养基中很快死亡，而加入IL-2后则可右体外长期培养。在一定浓度范围内，细胞增殖与IL-2量呈正比，因此通过测定细胞增殖情况（如使用3H-TdR掺入法、MTT法等）鉴定IL-2的含量。除依赖株外，还有一些短期培养的细胞，如胸腺细胞、骨髓细胞、促有丝分裂原刺激后的淋巴母细胞等，均可作为靶细胞来测定某种细胞因子活性。
2、靶细胞杀伤法
是根据某些细胞因子（如TNF）能在体外杀伤靶细胞而设计的检测方法。通常靶细胞多选择体外长期传代的肿瘤细胞株，利用同位素释放法或染料染色等方法判定细胞的杀伤率。
3、细胞因子诱导的产物分析法
某些细胞因子可刺激特定细胞产生生物活性物质，如IL-2、IL-3诱导骨髓细胞合成胺、IL-6诱导肝细胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通过测定所诱生的相应产物，可反映细胞因子的活性。
4、细胞病变抑制法
病毒可造成靶细胞的损伤，干扰素等则可抑制病毒所导致的细胞病变，因此可利用细胞病变抑制法检测这类因子。

三、呼吸道感染分子生物学检测(基因检测)有什么常用方法

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呼吸道感染的分子生物学检测,也就是我们常说的基因检查,它都有哪些常用的方法?
目前来说最常用的方法,通俗的叫PCR的方法,是指我们设计好一个特异性的引物,去检测原始样本是否有某一种病原体的特异的片段,我们把它扩张出来,就可以进行一个相应的病原体鉴定的检测。
当然我们还可以用测序的方法,目前包括一代,二代,三代测序。总体来说就是告诉我们原始样本里面还有哪些病原体,把它的核酸取出来测序,序列确定,然后在网络上进行比对,告诉我们这里面的微生物的种类是哪些。
其他的方法还包括基因芯片的方法、电泳的方法等等这样。
总体来说,我们都是针对一些特异性的核酸的类别进行检测。如果有某一个特异性核酸的存在,我们再间接推测里面含有某一种病原体的存在。