白花蛇舌草中多酚类成分的含量测定

李思月 1，曹丹，王多，付梦露，陈文英，王青 *

陕西国际商贸学院 陕西咸阳 712046

摘要：本实验建立紫外分光光度法测定白花蛇舌草中多酚含量的方法。以乙醇为溶剂，超声波法提取药材中多酚类成分，与对照品进入紫外分光光度计检测，并进行精密度、重复性、稳定性、加样回收率试验，同时对已建立的定量方法进行验证。结果在747nm波长处有最大吸收，没食子酸对照品在8.32~49.92µg/mL范围内线性关系良好(R²=0.9981)，回归方程为Y=0.0189X-0.0492；平均加样回收率99.60%(RSD=0.76%)。此方法稳定可行，简便可靠，可用于白花蛇舌草中多酚类成分的测定含量，为白花蛇舌草的质量控制和质量评价奠定了基础。

关键词:白花蛇舌草；含量测定；紫外分光光度法

1仪器与试药

TU-1810紫外可见分光光度计（北京普新通用仪器有限责任公司），CHCY-1-2L多功能恒温超声波萃取仪（诚洋生物科技有限公司），TE124S分析天平（万分之一，sartorius公司），没食子酸对照品（上海金穗生物科技有限公司）；白花蛇舌草经鉴定为茜草科耳草属植物，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1 对照品储备液的配制

精密称取没食子酸对照品10.4mg，精密称定，置50ml容量瓶中，以70%乙醇40ml微热使其充分溶解，冷却至室温，加入0.5ml福林酚试剂，以70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备

取白花蛇舌草粉末(过60目筛)0.1g，精密称定，置 150ml具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，摇匀，超声提取20min，放置，称重，用乙醇补足减失重量，滤过，残渣以少量70%乙醇洗涤，合并滤液，水浴挥去乙醇，加入已经处理好的聚酰胺柱(30~60目，1g，内径约为 9mm)，依次用 20ml水和70%乙醇洗脱，将乙醇洗脱液收集，回收溶剂，水浴蒸干，残渣用 70%乙醇使其溶解，溶液转移至10ml容量瓶，并稀释至刻度线，摇匀，即得。

2.3 最大吸收波长确定

通过紫外扫描溶液，在波长400~800nm之间依次进行扫描，结果显示：溶液于747nm位置出现最大吸收峰。因此：测定波长确定在747nm处。

2.4 线性关系考察

精密吸取对照品储备液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml，分别将其加入25ml的容量瓶当中，各加入70%乙醇的混合液至6ml刻度，加5%亚硝酸钠溶液1.0ml，摇匀，放置5min，加入10%硝酸铝溶液1.0 m L，摇匀，放置5 min，加氢氧化钠试液10.0ml，加70%乙醇至刻度，混匀，放置15min，将 l号容量瓶溶液设置为空白，于747 nm处测定吸光度值，以质量浓度（μg/ml）为横坐标(X)，以吸光度A为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0189X-0.0492，R²=0.9975。

2.5 精密度试验

精密吸取没食子酸对照品溶液2ml，按“2.4”项下的方法连续测定5次，测定吸光度A，结果RSD为0.83%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取白花蛇舌草粉末约0.5g，共5份，精密称定，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，测定白花蛇舌草的吸光度，计算含量。结果多酚类成分平均含量为0.49mg/g，RSD为0.81%，表明该样品测定重复性良好。

2.7 稳定性试验

取白花蛇舌草粉末约0.5g，精密称定，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液在0min，10min，30min，60min，90min，120min按照“2.4”项下的方法进行测定，结果RSD为0.71%，表明样品在120min内稳定。

2.8 加样回收率试验

精密称取“2.6”项下已测得多酚成分含量的样品5份，每份约0.25g，精密称定，每份加入对照品溶液3ml，分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述测定条件进行分析，计算加样回收率。结果多酚类成分的平均加样回收率为99.60%，RSD为0.76%。表明该方法稳定可靠，简便可行。

2.9 样品含量测定

分别取的白花蛇舌草粉末（过60目筛）0.5g，各3份，精密称定。按照“2.2”项下方法制备成供试品溶液，记录吸光度，根据标准曲线计算样品中白花蛇舌草中多酚的量，结果见下表。

表1 不同样品白花蛇舌草中多酚的含量(n=3)

样品 多酚类(mg/g)

1 0.496 2 0.492 3 0.501

结果表明：不同样品白花蛇舌草中多酚含量差异较小。

3 小结

本实验建立了紫外分光光度法测定白花蛇舌草药材中多酚类成分含量的方法。通过测定不同样品表明建立的定量方法稳定、可靠、重复性良好，为评价白花蛇舌草中多酚类成分提供了一种可靠的测量方法，同时为进一步研究白花蛇舌草的药理活性、质量控制和临床新产品研究开发利用提供了数据支持。

参考文献

[1]杨悠,许军,刘燕华,等.比色法测定白花蛇舌草中总黄酮含量的研究[J].中华中医药学刊,2011,29(02):313-316.

[2]张瑜,谈献和.白花蛇舌草中熊果酸的含量测定[J].中国野生植物资源,2005(03):46-47+51.

[3]邓刚,母健菲,刘玉琪,等.福林酚比色法和紫外分光光度法测定白花蛇舌草中总多酚含量的比较研究[J].重庆第二师范学院学报,2015,28(05):167-169+17.

[4]代龙,杨培民,魏永利.中药白花蛇舌草研究进展[J].现代中药研究与践,2009,

23(04):75-79.

[基金项目] 本文系2019年大学生创新创业训练计划项目省级立项项目，项目名称为白花蛇舌草中多酚类成分提取的工艺优化及抗氧化活性研究，项目编号为S201913123040；

[作者简介] 李思月，陕西国际商贸学院医药学院药学2016级

[通讯作者] 王青，讲师，主要从事中药化学与质量控制的教学与科研工作

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