分子生物学技术在临床微生物检验中的应用

李雷

广安市广安区人民医院 四川 广安 638000

一个人如果出现感染之后，医生都会为病人先做微生物学感染诊断。以明确疾病感染物。以往的检验方式通常都是比较单一的，一般都是采用类似于酶活性等相关特征来进行检验。这种检验手段很难满足现代微生物检验的需要，同时也很难达到预期检验要求。可以说存在着一些弊端。采用分子生物学技术来检验便能突破传统检验中的一些难题。今天就为大家做一番介绍。

一、质粒指纹图分析法

质粒指纹分析技术是目前临床微生物检验中最常用的一种技术，这种技术最大的优点就是能通过技术分析来病菌纹图来进行分析，然后再结合不同的病菌图纹来找出相对应的感染源。因而，这一种检验方法，才能够被越来越多的人们所熟悉。在进行检验检疫的过程中，医学人士首先对病人做抽提纯化质粒DNA工作，然后在对纯化质粒DNA做检验，

经琼脂糖凝胶电泳之后的DNA分析，根据分子量大小来作分析，以质粒指纹图来做判断，这也是一个重要的一个标志。这也帮助医学人士更好来做分析。如：医学人士可以利用紫外灯来进行光照检测，而在等下可看见菌群下呈现一条条，或者是多条质粒带构成突破。这即是质粒指纹图形。

质粒指纹技术可用于检测多种不同的病菌，同时还能够用于分析类似于革兰阴性菌在不同的属的、种间之间的传播，目前也主要用到革兰阳性菌之中，如：金黄色葡萄球菌等。主要还是因为凝固酶阴性葡萄球菌常含有数个不同的质例等。质粒指纹图分析主要原理是根据质粒大小与数理相同的菌株，这其中还是有很多相似的图形，即质粒指纹图。当细菌有多个质粒，特别就是在分子量还较小的时候，质粒指纹图就成为一个相对的稳定的标志。

二、染色体DNA指纹图分析

染色体DNA指纹图分析是一种现代生物检验技术，这种技术最早被著名遗传学家Jefferys及其合作者所发明出来，当时，Jefferys与众多学者在前人的研究基础上，将离析的提取出来的人源小卫星DNA使用到检验当中，即采用基因探针检验，然后，与人体里面所提取出来的的核DNA的酶切片段作杂交处理，最终获取了几个位点上的等位基因组成的长度不相等的杂交带图纹，这一种图纹一般来说都是很少出现完全相同的图谱，因而也就能够帮助医学人士开展医学研究工作，因此在当时也被称之为"DNA指纹"。

染色体DNA指纹图分析有两种不同的分析方法，其中就包括有：探针指纹图分析与限制性内切酶（REA）。前者是一种将电泳分离的片段转印至硝酸纤维素膜等上面，然后在使用做探针杂交处理工作，而在经过了杂交之后便会出现特异现象，而重复性较为良好的片段所构成的图谱就是探针指纹图形。后者是一种先进的提纯技术来进行检验，经染色体DNA合适的限制内切酶消化处理，经凝胶电泳分离处理，最后生成酶切图谱，然后就可以用于分析菌株之间的是否存在亲缘关系。

三、钳位均匀电场电泳

钳位均匀电场电泳技术是一种先进的微生物检验技术，该技术自被发明出来之后便很快推广到医学临床当中，该技术的检验原理是基于琼脂糖凝胶分离长度＞40kb的线状DNA分子的时候可采用的脉冲场电泳来进行检验。

目前，这一种技术装置主要采用分压器环路中的呈六边形排列的点电极，长而平行的电极对形成匀强电场来进行检测。首先，这种技术能得到推广，主要是因该技术能够根据DNA分子变换方向不统计时间不痛来进行分析，其次，再通过对比DNA分子来进行检验，一般而言，可以结合DNA的大小与形态来加以区分的。钳位均匀电场电泳在分子生物学检验分析及生物化学研究当中有着不可替代的作用。而在医学临床方面同样起着很大的检验作用。

目前，质粒指纹图分析法、染色体DNA指纹图分析、钳位均匀电场电泳技术在微生物检验领域已经得到充分的应用。这三种技术各有不同的优点，应用领域也比较的广泛，可以帮助医生人士更好的用于检测人体微生物感染，能帮助病人在最短时间内确定感染病菌，然后制定相对应的治疗方法，提高治病效率，降低病人的痛苦。因而，这三种技术在微生物检验当中具有很重要的作用。