实时荧光定量 PCR在病毒检测中的应用效果评价

于启波

黑龙江省绥化市北林区疾病预防控制中心，黑龙江绥化 152072

【摘要】目的：评价实时荧光定量PCR在病毒检测中的应用效果。方法：研究我中心2019年3月~2019年9月期间纳入的158例疑似HFMD患者，研究中使用到的核酸检测仪器选取ABI-7300进行FQ-PCR检测，观察并分析FQ-PCR检测病毒发生情况。结果：经检测，158例疑似HFMD患者中，FQ-PCR检测的EV阳性确诊为115例，阳性率72.78%，其中EV71RAN阳性有109例，CA16PNA检测的阳性53例；而ELISA检测出的EV阳性确诊为63例，阳性率39.87%，两者差异大，P<0.05。15例HFMD患者实行FQ-PCR检测到的EV阳性12例，而ELISA检测6例阳性数，差异显著，P<0.05。结论：实行FQ-PCR检测对HFMD病毒检测率提升，值得临床进一步研究。

【关键词】病毒检测；实时荧光定量；PCR；应用效果；评价

Evaluation of the application of real-time fluorescent quantitative PCR in virus detection

Yu Qibo

(Center for Disease Control and prevention, Beilin District, Suihua City, Heilongjiang Province, 152072)

[Abstract] Objective: To evaluate the application effect of real-time fluorescent quantitative PCR in virus detection. Methods: 158 suspected HFMD patients in our center from March 2019 to September 2019 were studied. Abi-7300 was selected for FQ-PCR detection by the nucleic acid detection instrument used in the study. The occurrence of virus detected by FQ-PCR was observed and analyzed. Results: of 158 suspected HFMD patients, 115 were confirmed to be ev positive by FQ-PCR, with a positive rate of 72.78%, of which 109 were ev71ran positive and 53 were ca16pna positive, while 63 were confirmed to be ev positive by ELISA, with a positive rate of 39.87%, with a large difference (P<0.05). There were 12 EV positive cases detected by FQ-PCR in 15 HFMD patients, and 6 EV positive cases detected by ELISA, the difference was significant (P<0.05). Conclusion: FQ-PCR can improve the detection rate of HFMD virus, which is worthy of further clinical study.

[Key words] virus detection; real-time fluorescence quantification; PCR; application effect; evaluation

肠道病毒（简称EV）是一种不存在包膜的小核糖核酸（RNA）病毒，依照血清学可分成脊髓灰质炎病毒、埃可病毒、肠道病毒68-71型及柯萨奇等67各血清型^[1]。临床中，手足口病（简称HFMD）作为临床常见疾病，其病原体主要是由肠道病毒71型（EV71）及柯萨奇A16（CA16）构成，而EV71不仅能够引发HFMD疾病，还会严重影响中枢神经系统^[2]，诱发其他并发症（如脑膜炎、急性迟缓性瘫痪等等）^[3]，对人类的生命安全造成不同程度的损害^[4]。为快速查明病因，及时控制病情，获得最佳治疗方案和时间，实行有效的检测方式对病情的后期治疗显得尤为重要

^[5]。本文就此针对HFMD患者实行实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测，研究筛选2019年3月~2019年9月收治的158例疑似HFM患者，分析该检测方式对HFMD病毒的检测情况，正文报道叙述如下：

1 资料和方法

1.1临床资料

研究我中心2019年3月~2019年9月期间纳入的158例疑似HFMD患者，收集患者粪便7份、咽拭子128份、血清4份以及疱疹液19份，同时采集患者的血清。其中，男性69例，女性45例，年龄在0.8~6岁，平均年龄（3.4±1.02）岁。此外，选取某托幼机构中同HFMD患者有亲密接触的儿童，收集其咽拭子及血清各33份。所有标本施行病毒学培养，并将采集到的血清施行FQ-PCR和ELISA两种方式进行检测。而同HFMD接触的患者选取15例进行送检，实行ELISA法检测。

1.2方法

研究中使用到的核酸检测仪器选取ABI-7300进行FQ-PCR检测，而检测用到的试剂则由本中心内提供，病毒分离细胞是人横纹肌瘤肉RD细胞，而ELISA检测法则选用EV71IgG及CA16IgG试剂进行测定。具体措施如下：

将收集到的粪便、咽拭子、疱疹痰液标本放置装有生理盐水的容器中搅拌几次，随后行病毒学培养标本置于病毒保存液中，暂时存放需在-20℃环境，若需长久存放则应放置在-70℃环境下。

1.3观察指标

观察并分析FQ-PCR检测病毒发生情况。

1.4统计学处理

应用SPSS19.0统计学软件进行数据处理，P<0.05，差异显著。

2 结果

2.1 对比FQ-PCR和ELISA检测EV病毒情况

经检测，158例疑似HFMD患者中，FQ-PCR检测的EV阳性确诊为115例，阳性率72.78%，其中EV71RAN阳性有109例，CA16PNA检测的阳性53例；而ELISA检测出的EV阳性确诊为63例，阳性率39.87%，两者差异大，P<0.05。详见表1。

表1：FQ-PCR和ELISA检测EV病毒比较分析表（n，%）

项目	例数	EV	阳性率
FQ-PCR	158	115	72.78（115/158）
ELISA	158	63	39.87（63/158）
X2	-	-	34.785
P	-	-	0.001

2.2 对比密切接触患者的儿童FQ-PCR检测EV

15例HFMD患者实行FQ-PCR检测到的EV阳性12例，而ELISA检测6例阳性数，差异显著，P<0.05，详见表2。

表2：密切接触患者的儿童FQ-PCR检测EV比较分析表 （n，%）

组别	例数	核酸检测		抗体检测
		阳性	阴性	阳性	阴性
标本培养阳性	10	10	0	7	3
标本培养阴性	5	0	5	1	4

3 讨论

HFMD是一种传染性强的疾病，属于世界性的疾病。该病主要是受粪便、咽喉分泌物、疱疹液及唾液中的病毒传播导致^[6]。通常情况下，该病病症较轻，但随着病情的持续发展，患者的呼吸系统、中枢神经系统均会出现不同程度的损伤，严重可导致死亡，对患者的生命安全造成严重伤害^[7]。该病多体现在神经系统等症状，且早期症状并不明显，因而患者及其家属往往会忽视，从而延误最佳治疗时机。为此，实行有效的早期检测对诊断病情具有重要意义^[8]。

随着医疗检测技术的不断发展，实时荧光定量PCR（简称FQ-PCR）技术属于一种新兴的检测手段，主要针对病原体核算进行的快速检测法，具有定量、快速、敏感度高及特异性强等特点，自动化程度明显，能够完全闭关操作，具有无污染、耗时短、灵敏度高等优势，可在HFMD潜伏期便能检测出是否存在手足口病病毒，继而避免病情的发展，提高检测率^[9]。

总而言之，实行FQ-PCR检测对HFMD病毒检测率提升，值得临床进一步研究。

参考文献

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