通关藤的研究

王国强 刘禹含 张译丹 柴睿 隋勇

吉林京辉药业股份有限公司 吉林通化 134000

摘要:通关藤是一味常用民族药，具有良好的抗肿瘤功效，通过查阅国内外与通关藤有关的文献，综述药材的化学成分、药理等方面研究进展，为通关藤的开发利用提供理论依据。

关键词：通关藤；化学成分；药理研究

1化学研究

通关藤化学成分复杂，主要成分有甾体苷类、醇类、多糖、有机酸和挥发油及萜类化合物等。甾体苷类物质是通关藤药材抗肿瘤的主要活性成分，包括通光藤苷元甲、通光藤苷 A、通光藤新苷 A、通光藤苷元甲和通光藤苷元乙、通光素、二氢肉珊瑚苷元、苦绳苷元、萝藦苷元等; 醇类物质是其调节免疫的活性成分，主要包括牛奶菜醇、牛奶二氢醇、蒲公英甾醇、豆甾醇、β－谷甾醇、半乳糖醇、羽扇豆醇等; 含有的多糖类具有提高免疫和抗肿瘤作用，主要有乌骨藤多糖、葡聚糖、加拿大麻糖、夹竹桃糖等；绿原酸也是通关藤所含的一种重要物质，常作为成品制剂的质量控制指标之一。

目前普遍采用分光光度法、液相色谱法等仪器分析方法对通关藤化学成分进行特征表征和定量研究。

李媛媛等采用正交试验，以总皂苷收率作为指标优化通关藤总皂苷的最佳提取工艺为：加入10倍量70%乙醇，加热回流提取3次，每次2 h。ZTC-1具有最佳吸附与解析参数，最佳纯化工艺为：取通关藤粗提取物，加相当于生药量15倍的蒸馏水溶解，离心，取上清液，通过ZTC-1树脂柱，依次用水、50%乙醇洗脱至无色，弃去，再用70%乙醇洗脱1.5 BV，收集洗脱液，减压浓缩至无醇味，冷冻干燥，即得通关藤总皂苷。所得提取纯化工艺简单可行，具有很好的应用前景，为通关藤总皂苷的深度开发提供依据。徐东伟通过优化通关藤中总皂苷的超声提取工艺及纯化工艺，制备纯化的通关藤总皂苷，最优超声提取工艺条件为乙醇体积分数85%、液料比18.5∶1(ml/g)、提取温度80℃；验证试验中通关藤总皂苷平均提取率为4.80%(RSD=1.06%，n=3)。

颜昱等利用HPLC-IT-TOF-MS对通关藤的化学轮廓进行，准确归属了6个绿原酸类化合物和15个孕甾烷衍生物；通过相关文献数据结合质谱裂解规律推导，初步鉴定了100个孕甾烷类衍生物、4个黄酮类化合物和2个绿原酸类化合物。为通关藤及其制剂消癌平的质量标准及体内药效物质研究提供了有效信息。

陈美玲采用水浴回流提取,高效液相色谱法,蒸法发光散射检测器检测，乙腈-水(50:50)为流动相，Kromasil 100-5-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱，通关藤苷H在0.15742-0.78710 mg/mL范围内，呈良好线性关系(r=0.9998)。加样回收率平均为102.0%，重复性RSD为0.8%。可作为消癌平软胶囊质量分析控制方法。李思雨等采用HPLC-DAD-ELSD法同时测定22个产地通关藤中3种皂苷G、H、I的含量，发现不同产地样品中三者含有量有明显差异。可用于通关藤的质量控制。王祁民等采用Phenomenex Kinetex XB-C18色谱柱，以0.1%甲酸∶乙腈为流动相，线性梯度洗脱，通过电喷雾离子源，多反应监测(MRM)，正离子模式。结果消癌平片中通关藤苷A、H、I含量分别为620.33～622.00、310.67～311.33、377.33～379.33μg/g。

周全以通关藤为原料分离纯化得通关藤多糖组分TCS4，并进行初步结构分析结果表明相对分子质量约7000，单糖组成为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖，摩尔比为1∶3.5∶1.9∶6.9∶7.8∶10∶4.7。

此外，李迩娜建立HPLC-ELSD法测定消癌平注射液中牛奶菜醇和果糖的含量方法，采用COSMOSIL Sugar-D糖分析专用柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，乙腈-水(80∶20)为流动相，ELSD漂移管温度：100℃，氮气流量：2.5 L·min-1。结果发现牛奶菜醇和果糖在标准曲线范围内有较好的线性关系(r>0.9994)。

2 药理研究

通关藤及其制剂均表现出良好的药理活性，主要表现出良好的抗肿瘤药理活性。

2.1抗肿瘤活性

周婧倩研究消癌平注射液(通关藤)及其三大类有效组分(糖类、酚酸类、和甾体皂苷类)抗肿瘤细胞黏附、迁移及侵袭的能力。结果表明消癌平注射液及有效组分能不同程度抑制A549、BEL-7402细胞的生长。不同配比药物组能够不同程度地降低A549、BEL-7402细胞的黏附能力，侵袭能力和迁移能力(P<0.01)。结论消癌平注射液及有效组分抗细胞增殖作用及抗肿瘤细胞转移作用是三类组分协同作用的结果具有时间剂量依赖性。

消癌平能导致斑马鱼胚胎发育毒性，包括抑制孵化、心脏水肿和运动行为能力降低，氧化应激、内质网应激、凋亡和wnt通路参与这些毒性的调控机制。胚胎发育毒性大小比较：消癌平>通关藤皂苷G>通关藤皂苷H>通关藤皂苷I。消癌平能够通过抑制MDA-MB-231细胞在斑马鱼体内的迁移发挥抗肿瘤效应；抗炎活性大小比较：通关藤皂苷H>消癌平>通关藤皂苷G>通关藤皂苷I。

通关藤对肝癌细胞有调节作用，相对对照组，通关藤能够明显抑制肝癌细胞的增殖和侵袭(P<0.05)，并显著性的降低VEGF-D的表达(P<0.05) 。通关藤总皂苷对人肝癌细胞Hepg2具有抑制作用，高浓度组与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。当提取物浓度大于0.312 mg/mL时，人肝癌细胞Hepg2的增殖即受到抑制，且随着药物剂量的增大其差异更为显著。韩丽发现不同剂量通关藤提取物皂苷、皂苷元体外对4种肿瘤细胞的生长抑制率呈量效关系，其中对人肝癌细胞SMMC-7721肿瘤细胞抑制最为显著。体内实验表明，与模型组比较，不同剂量通关藤提取物皂苷、皂苷元高、中剂量组显著抑制肿瘤生长；皂苷元能提高荷瘤小鼠胸腺指数，而皂苷对胸腺指数无明显影响；皂苷元及皂苷均能提高H22荷瘤小鼠脾指数，但皂苷随着剂量增加呈现双向调节作用，说明结论通关藤提取物在体内外均有明显抗肿瘤作用，且具有一定的免疫调节作用。

乌骨藤提取物通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制黑色素瘤细胞的活力并诱导细胞凋亡。

通关藤提取物可下调人胃腺癌BGC-823细胞MTDH mRNA表达，并通过下调Bcl-2、Bcl-xl，上调Caspase-3的表达而诱导BGC-823细胞凋亡，从而抑制了BGC-823细胞的生长增殖。

乌骨藤粗提取物能够显著抑制C6胶质瘤细胞的增殖，其中主要有效成分Fr2能够诱导C6细胞发生G2期周期阻滞，并通过影响Bax和Bcl-2的表达，促进其凋亡。

2.2抑制新生血管生成活性

通关藤水提物剂量可依赖性地舒张KCl、 PE及U46619收缩的肠系膜小血管。可通过抑制钙离子内流及促进肿瘤微环境-的重要组成部分内皮细胞释放可显著抑制肺腺癌细胞增殖的NO以舒张血管，即通关藤水提物可通过作用于肿瘤微环境细胞而抑制肿瘤进展。谢一唯发现乌骨藤提取物在体外具有一定的抑制脐静脉内皮细胞增殖和代谢、促进其凋亡的作用，并在鸡胚实验中明显抑制新生血管生成的作用。

参考文献

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 2015 年版. 北京:中国医药科技出版社,2015.

吉林省医药健康产业发展专项引导资金项目（YYZX201607）