用 HPLC指纹图谱对复方甘草片实施全质量控制研究

胡健

身份证号； 23011919880909 ****

【摘 要】目的：采用HPLC指纹图谱测定复方甘草片质量，建立完善的质量控制体系。方法：采用指标优化法确定检测条件，将双定性相似度作为监测指标，选择26批次复方甘草片成品，按照设定好的计划测定所有批次的药物。结果：建立完善的指纹图谱，将双定性双定量相似度法作为评判指标，共计得到11批合格的药物及15批不合格药物，不合格的原因主要包括含量过低、含量过高、劣质品等。结论：HPLC指纹图谱可以满足复方甘草片的质量控制需求，具有精度高等优势，可以从宏观角度分析中药制剂质量，可以推广应用。

【关键词】复方甘草片；HPLC指纹图谱；色谱指纹图谱相对指数；双定性相似度

近些年，我国感染呼吸系统疾病患者持续增加，其中咳嗽患者占比达到1/6，危害广大人民的生命健康安全。复方甘草片属于常用镇咳药物，具有价格便宜、疗效稳定等优势，被广泛应用到呼吸系统疾病治疗，取得了不小的成效，销售量居呼吸系统用药榜首。为了控制复方甘草片的质量，采用指纹图谱作为控制方法，深入研究其质量，采取试验的方式，得到药物的指纹图谱，从宏观角度上分析其质量特征，下面为具体的实验过程。

1研究实验

1.1仪器及试剂

仪器：Agilent1100型液相色谱仪、ChemStation工作站、Sarturius—BSll0S分析天平、KQ-50B型超声波清洗器。

样品：甘草酸铵、甘草次酸对照品、甘草浸膏粉。

试剂：甲醇、乙腈、冰乙酸、其他试剂均为分析纯、水为去离子水。

1.2制备对照品溶液

首先，先制备出苯甲酸钠溶液，使用精密量具称取适量对照物，具体为8.0mg，将对照物放入量瓶内，滴入适量的水，直到达到制定刻度，采取手工摇匀的方式即可，直到得到混合均匀的对照品溶液。接下来，制备甘草次酸溶液，使用精密量具称取适量对照品，具体为5.2mg，将对照物放入量瓶内，滴入适量的甲醇溶液，直到达到制定刻度，采取手工摇匀的方式即可，直到得到混合均匀的对照品溶液。最后，制备甘草酸按溶液，使用精密量具称取适量对照物，具体为5.65mg，将对照物放入量瓶内，滴入适量的甲醇，直到达到制定刻度，采取手工摇匀的方式即可，直到得到混合均匀的对照品溶液。

1.3制备供试品溶液

取出准备好的复方甘草片，称量10片药物的质量，并记录在册，采用专用仪器研磨均匀，称取其中2片的药品，选择25ml量瓶，加入甲醇溶液，内部含有1%的氨水，在超声的环境下溶解药物，持续20min后加入甲醇溶液，稀释到刻度线即可，同样手工摇匀，将溶液放入离心机，转速控制在3500r/min即可，持续10min滤出上层清液，再次过滤后得到供试品溶液。

2结果分析

2.1优化色谱条件

共计分为三个部分：一是考察溶剂系统。根据指纹图谱指数公式可知，有效分离率及峰信号均化系数是关键指标，两个指标数值越大，则代表信号越小。在分离提取液50min以后，可以通过计算得到F值，可以看出F值受到多方面影响，本次研究将其作为考察目标函数，判断试验系统是否符合要求，本次选择6种系统，经过计算后发现5号系统数值最大，最后确定为5号系统。二是考察提取溶液。提取溶液主要以水、乙醇、甲醇三种溶液为主，主要是测试不同浓度下提取溶液的质量，同样将F值作为判别指标，经过计算以后发现浓度在95%左右的甲醇及乙醇溶液都符合要求，但是这种溶液的色谱峰不符合要求，为此最终选择浓度为75%的甲醇溶液。三是考察提取时间，取样品制备供试液，根据色谱图计算F值，最终选择20min的超声时间。

2.2系统适应性试验研究

将S2供试品溶液、苯甲酸钠、甘草次酸、甘草酸铵对照品溶液别进样。对比保留时间确定样品中t=61.98min峰为甘草酸，其理论板数应≥2163825；t=27.72rain峰为苯甲酸钠，t=86.44rain峰为甘草次酸。因GHIA与相邻峰分离良好且保留时间适中，因此选作参照物峰。2h空针色谱图和2h样品供试液图表明检测系统无其他干扰峰出现，组分在98min内基本出峰完全。

2.3精密度试验研究

精密吸取S2号供试液，连续进样6次。以甘草酸峰为参照物峰，计算各峰相对保留时间的RSD均<1.O%，相对峰面积的RSD<3.O%，表明检测系统的进样精密度良好。

2.4稳定性试验研究

取S2号供试液，分别在制备样品后的0、3、6、9、12、15、18、21h进样测定，记录色谱图。结果在18h内各峰相对保留时间的RSD均<1%，相对峰面积的RSD均<3%，在18h后有6个峰相对峰面积的RSD变动过大。以上表明样品中的所有化学成分在18h内基本稳定。

2.5重复性试验研究

取S2号样品制备供试液5份，分别精密吸取进样测定，记录色谱图。计算各峰相对保留时间的RSD<1.O%，相对峰面积的RSD除6号峰外，其余<3.O%，表明方法的重现性较好。

2.6检测结果

将13批样品以双定量相似度C和P为变量，采用类内平均链锁法，利用欧式距离平方作为样品测度得到2×13阶原始数据矩阵，运用SPSS软件进行系统聚类分析。结果S8，S9，S15为第1类；S11为第Ⅱ类，S5，SIO，S13，S14，S16，S17，S18和S19为第Ⅲ类；S21为第Ⅳ类。第1类双定量相似度l15

O.90表明化学成分数量合格，但其化学成分分布比例与RFP有明显差异，而且其含量相似度均值>146%明显偏高。尽管S6的含量相似度合格，但其S

3讨论

本次实验将GHIA峰作为参照物，建立相应的指纹图谱，深入分析复方甘草片的化学成分，共计分析了26批复方甘草片，其中11批的CLTs含量在合理的范围内，3批的含量过高，6批含量过低，1批的化学比例不合格，还有5批药物属于劣质品，不符合国家相应的相关要求。本次研究涉及到两个重要概念，一个是双定性相似度，主要是反映药品的化学成分及相关比例是否存在相似性，另一个则是双定量相似度，从宏观角度入手，反映药物化学成分含量，可以解决含量差异问题。药品要符合相关要求，才能判定为合格药品，主要有两大判别标准，一个是相似度要在0.9以上，另外一个则是C、P在85%-120%，同时要满足差值在15%以内。同时，这种判定方法可以解决很多问题，得到精准可靠的实验结果。经实验证明，采用指纹图谱可以精准测定复方甘草片的质量，为药物质量控制提供精准数据。

参考文献

王珊,时伟朋,田文月,etal.莲子心HPLC指纹图谱研究及不同产地生物碱含量测定[J].中华中医药学刊,2018.（6）.

龚曾豪,于春光,金艳霞,etal.传统海洋中药淡菜高效液相.（HPLC）指纹图谱研究[J].农村经济与科技,2018.（11）.

赵青舟,刘文兰,曹丽.中药复方一贯煎HPLC指纹图谱研究[J].辽宁中医药大学学报,2018.（12）:51-54.

蒋秋香,韦雪丹,莫海彦,etal.救必应胃痛片的HPLC指纹图谱研究[J].中国药房,2018.（13）:1786-1789.