补体调节蛋白 CD55在胃癌中的表达及其意义探讨1

曾浩 1　　殷继鹏 1　　顾勇 1　　聂勇战 1　　柴娜 1,2△

1第四军医大学西京消化病医院，肿瘤生物学国家重点实验室　陕西 西安　 710032 中国 ；2第四军医大学西京医院放射科，　陕西 西安　 710032 中国

基金项目：国家自然科学基金面上项目（81571651）；陕西省社会发展攻关计划项目（2015SF178）

摘要 目的：检测CD55在胃癌及癌旁组织中的表达，分析CD55与临床病理参数之间的关系。方法：收集109对胃癌及癌旁组织，进行免疫组织化学染色，观察CD55在组织中的分布情况，利用非参数检验等统计学方法，分析CD55与性别、年龄、分化程度及TNM分期等临床病理参数之间的关系。结果：免疫组化结果显示CD55在胃癌组织中的阳性率为35.78%，在癌旁组织中的阳性率为98.17%（P<0.05）；统计分析结果提示CD55在胃癌组织的表达与患者的性别、年龄、胃癌的分化程度和TNM分期均无显著相关（P值均>0.05）。结论：CD55在癌旁组织中的表达显著高于胃癌组织，且表达水平与病人的临床病理参数无关。

关键词：膜补体调节蛋白（mCRPs）；胃癌；CD55

中图分类号：R735.2　 文献标识码：A　 文章编号：

Expression and Significance of CD55 in Gastric Cancer

Zeng Hao¹, Yin Ji-peng¹, Gu Yong¹, Nie Yong-zhan¹, Chai Na^1,2△

( 1 Xijing Hospital of Digestive Diseases & State Key Laboratory of Cancer Biology, Fourth Military Medical University, Xi’an, Shaanxi, 710032, China; 2 Radiology Department, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, Xi’an, Shaanxi, 710032, China )

ABSTRACT Objective: To study expression of CD55 in gastric cancer and paracancerous tissues. To analyze relationships of CD55 and clinicopathological parameters Methods: The protein level of CD55 were studied by immunohistochemical staining in 109 pairs of gastric cancer and paracancerous tissues. The relationships of CD55 and clinicopathological parameters (sex, age, classification and TNM stages) were analyzed by nonparametric tests. Results: Immunohistochemistry staining showed that the positive rate of CD55 was 35.78% in gastric cancer tissues and 98.17% in paracancerous tissues (P<0.05). The statistical analysis showed that there were no significant relationships of CD55 and clinicopathological parameters (P>0.05). Conclusions: The expression levels of CD55 in normal tissues were significantly higher than those in gastric cancer tissues. CD55 was not related with sex, age, classification and TNM stages.

Key words：mCRPs; Gastric cancer; CD55

Chinese Library Classification(CLC)：R735.2　 Document code：A

Article ID：

前言

在我国，胃癌的发病率和死亡率逐年上升，其发病机制和治疗方法仍有待进一步提高^[1]。肿瘤发生发展的免疫学机制是目前研究的热点，免疫疗法也是肿瘤治疗的新的有效方法。以往研究表明，补体系统介导的免疫监视功能可以自发性的杀死新转化的肿瘤细胞，但是肿瘤细胞如何逃避机体的免疫监视从而发生发展是关键问题之一^[2]。这其中，细胞膜表面高表达补体调节蛋白（Membrane complement regulatory proteins, mCRPs）^[3]可能是其中机制之一。目前发现，机体多种细胞中表达丰富的补体调控蛋白，包括作用于补体活化早期阶段的CD55、CD46和作用于补体活化终末阶段的CD59，它们分别通过抑制补体活化过程中关键的C3、C5转化酶和抑制形成膜攻击单位，抵抗补体对自身组织细胞的攻击^[4]。

在本研究中，我们选取了109对胃癌和癌旁组织标本，利用免疫组织化学染色观察CD55的组织分布，并通过统计学分析推测CD55与临床病理特征间的关系，以期从一个新的角度探讨胃癌恶性转化的机制，找到新的调控靶点，对于理解胃癌发生和研究新的预防治疗策略具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

胃癌及癌旁标本共109对，石蜡包埋后切片，由第四军医大学西京医院病理科提供，其中男性68例，女性31例，平均年龄61岁。鼠抗人CD55单克隆抗体（sc-13320）购自Santa Cruz公司；DAB显色试剂盒及其它免疫组化所用试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1　免疫组织化学染色　用二甲苯将组织切片脱蜡1h，梯度酒精（100%、95%、85%、75%）水化，每个浓度5min；PBS振洗后将切片置于枸橼酸钠缓冲液中煮沸10min，自然冷却；PBS振洗后加入山羊血清室温封闭45min，然后甩干；将切片置于湿盒中，滴加CD55抗体，4℃过夜；PBS振洗后加入酶标二抗，室温孵育1h；PBS振洗后加入新鲜配置的DAB试剂，显微镜下观察控制显色时间，而后用蒸馏水冲洗15min；苏木精衬染1min，再用蒸馏水冲洗15min；梯度酒精（75%、85%、95%、100%）脱水，每个浓度5min；二甲苯透明处理后中性树胶封片。

1.2.2　结果判定　两位资深的病理医师采用盲法对免疫组化结果判定，具体方法为：显微镜下随机取5个视野，根据每个视野中阳性细胞数占总上皮细胞数的百分比和染色强弱进行评分[145]。阳性细胞数为0，记0分；阳性细胞数<25%，记1分；阳性细胞数25-50%，记2分；阳性细胞数50-75%，记3分；阳性细胞数>75%，记4分。染色强弱分为：0分阴性，1分弱阳性，2分中等强度阳性，3分强阳性。各组织染色结果为这两者的乘积。结果判定如下：I（0）、II（1-4）、III（5-8）、IV（9-12），其中I为阴性，II、III、IV为阳性。

1.2.3　统计学分析　统计分析软件使用SPSS20.0；采用Wilcoxon秩和检验比较CD55在胃癌组织和正常胃粘膜中的表达差异，采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis检验来比较CD55与患者临床病理特征的相关性；P<0.05认为有统计学意义。

2 结果

1.1 CD55在胃癌组织及癌旁组织中的表达

免疫组化结果显示：CD55主要定位在癌旁组织上皮细胞的胞膜和胞浆中，细胞核也偶有着色，而胃癌细胞中的分布较少，偶见胞浆着色。在109对标本中，胃癌组织有39例CD55呈阳性表达，阳性率为35.78%；癌旁组织有107例CD55呈阳性表达，阳性率为98.17%。结果表明：CD55在胃癌组织和癌旁组织均有表达，但在癌旁组织中的表达显著高于胃癌组织（P<0.05）（见图1和表1）。

2.2 CD55的表达与临床病理参数之间的关系分析

将109对胃癌及癌旁组织标本按照性别、年龄、分化程度及TNM分期进行分组，采用非参数检验方法比较各组CD55表达分布强度的差异。统计分析结果表明：男性和女性CD55的表达没有显著差异；60岁（含）以上组和60岁一下组CD55的表达没有显著差异；高分化胃癌、中分化胃癌和低分化胃癌CD55的表达没有显著差异；I、II期胃癌和III、IV期胃癌CD55的表达没有显著差异。结果提示：CD55表达水平与病人年龄、性别、胃癌的分化程度和TNM分期均无显著相关（P>0.05）。（表2）

图1　CD55在胃癌和癌旁组织中的表达

Fig.1　CD55 Expression in Normal and Neoplastic Gastric Tissues

CD55在胃癌组织中主要定位于细胞胞膜，部分为胞浆着色，呈浅黄至棕黄颗粒，胞核基本不着色。

表1 CD55在胃癌和癌旁组织中的表达

Table 1　CD55 Expression in Normal and Neoplastic Gastric Tissues

	No.	CD55 Expression
		﹣	+	++	+++
Normal	109	2	19	34	54
Caner	109	70	31	5	3

表2 CD55在不同病理参数分组中的表达

Table 1　The correlation of CD55 Expression with clinicopathological features

Variable	n	CD55 Expression				P Value
		﹣(%)	+(%)	++(%)	+++(%)
Normal	109	2(1.8)	19(17.4)	34(31.2)	54(49.5）	0.015
Caner	109	70(64.2）	31(28.4)	5(4.6)	3(2.8)
Sex
M	78	49(62.8)	23(29.5)	3(3.8)	3(3.8)	0.613
F	31	21(67.7)	8(25.8)	2(6.5)	0
Age, y
≥60	59	39(66.1)	16(27.1)	3(5.1)	1(1.7)	0.642
<60	50	31(62.0)	15(30.0)	2(4.0)	2(4.0)
Differentiation
High	17	9(52.9)	7(41.2)	1(5.9)	0	0.570
Moderate	35	22(62.9)	10(28.6)	1(2.9)	2(5.7)
Poor	57	39(68.4)	14(24.6)	3(5.3)	1(1.8)
TNM classification
I or II	58	34(58.6)	18(31.0)	4(6.9)	2(3.4)	0.156
III or IV	51	36(70.9)	13(25.5)	1(2.0)	1(2.0)

3 讨论

CD55又称衰变加速因子（Decay-accelerating factor，DAF），主要功能为补体调节作用，其可以抑制C3和C5转化酶的生成并加快C3和C5转化酶的降解，从而抑制补体系统激活。人体多种细胞丰富表达CD55，结果使这些细胞对补体裂解作用的耐受性大大提高，同时CD55还可减弱NK细胞介导的ADCC作用并阻碍抗原提呈细胞的吞噬作用^[5]。据文献报道，CD55在多种肿瘤中存在过表达现象，包括胃癌^{[6, 7]}、结直肠癌^[8]、食管癌^{[9, 10]}、卵巢癌^[11]和乳腺癌^[12]等等，这说明CD55参与了这些肿瘤细胞逃避机体的免疫监视。CD55被用于靶向免疫治疗也得到了较多关注，用单克隆抗体封闭CD55可增加肿瘤细胞的补体杀伤效应和免疫细胞的吞噬作用^[13]。

在本研究中，我们对109对胃癌和癌旁组织进行了CD55的免疫组织化学染色，结果显示CD55在胃癌组织中的阳性率为35.78%，在癌旁组织中的阳性率为98.17%，CD55在癌旁组织中的表达显著高于胃癌组织（P<0.05）；经过统计学分析，结果提示CD55在胃癌组织的表达与患者的性别、年龄、胃癌的分化程度和TNM分期均无显著相关（P>0.05）。

我们课题组前期对CD46、CD55、CD59等三个经典的mCRPs在结直肠癌中的表达和临床病理参数之间的关系进行了研究^[8]。结果证实三者在结直肠癌组织中的表达均高于癌旁组织，这与文献报道一致^{[6, 7]}，也符合我们之前的推测。但是在本研究中却得到了相反的结果，三者均在肿瘤组织中低表达（CD46和CD59的结果尚未发表）。原因可能有：一是胃癌与结直肠癌发病机制不同，可能会得到不一致的结果；二是胃癌具有独特的免疫学发病机制，其逃避机体免疫监视的方式可能与其他肿瘤不同。

前期也有学者对CD55做了许多研究^{[6, 14]}，结果大多提示CD55在胃癌细胞中过表达，这一结果与本研究结果恰恰相反。我们之前也推测CD55在胃癌细胞中表达升高，但是结果却是低表达。原因之一可能是先前的研究大都停留在RNA和蛋白水平，偶有涉及组织水平的，但是例数较少。我们在研究中收集了较大量的病例，结果更具有说服力。原因之二可能是我们收集的病例是第四军医大学西京医院的患者，主要来自陕西省，病例相对较集中，该地区胃癌细胞某些分子可能会有特殊表达，因为同一种肿瘤在不同种族、不同地域会有不同表现。后续我们会针对这些问题进一步研究，同时也将关注胃癌逃避免疫监视的具体机制，以及CD55等mCRPs的临床应用。

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作者简介：曾浩（1997-），男，临床医学本科生，主要研究方向：胃癌发生的免疫学机制

△通讯作者：柴娜（1982-），女，博士，主治医师，主要研究方向：胃癌发生的免疫学机制

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