sflt-1、VEGF、NF-Bp65与EMs发生发展的相关性研究

王亚男

湖南省妇幼保健院湖南长沙410008

摘要：目的探讨可溶性血管内皮生长因子受体1（sflt-1）、血管内皮生长因子（VEGF）、核转录因子B（NF-B）p65与子宫内膜异位症（EMs）的关系。方法选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例（病例组），同时选取正常生育期妇女共60例作为对照组，测定两组血清sflt-1和VEGF水平，同时采用免疫组化法检测EMs患者内膜组织NF-Bp65表达。结果病例组血清sflt-1和VEGF分别为（301.40±84.26）pg/ml和（430.11±98.46）pg/ml，明显高于对照组（p＜0.05）；r-AFS分期为Ⅲ～Ⅳ期患者血清sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-Bp65表达分别为（345.35±90.13）pg/ml、（486.70±99.13）pg/ml和（0.814±0.110），明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者（p＜0.05）；sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-Bp65表达与r-AFS分期呈正相关（rs=0.633、0.801和0.563，p＜0.05）；内膜组织NF-Bp65表达与患者血清sflt-1和VEGF无相关性（p＞0.05）。结论血清sflt-1、VEGF水平以及内膜组织NF-Bp65表达与EMs发生发展有一定的关系，值得进一步研究。

关键词：可溶性血管内皮生长因子受体1；血管内皮生长因子；核转录因子B；子宫内膜异位症

Therelationshipbetweensflt-1，VEGF，NF-Bp65andthedevelopmentofEMs

[Abstract]Objective：Toinvestigaterelationshipbetweensolublevascularendothelialgrowthfactorreceptor1（sflt-1），vascularendothelialgrowthfactor（VEGF），nucleartranscriptionfactorB（NF-B）p65andendometriosis（EMs）.Methods：Selected60casesofEMspatientsinourhospitalfromFebruary2015toOctober2016，and60womenwithnormalgrowthperiodascontrolgroup，ELISAwasusedtodetectserumsFlt-1andVEGFlevels，immunohistochemistrywasusedtodetecttheendometrialtissueNF-Bp65expressionofpatientswithEMs.Results：TheserumlevelsofsFlt-1andVEGFinthecasegroupwere（301.40±84.26）pg/mland（430.11±98.46）pg/ml，significantlyhigherthanthoseinthecontrolgroup（P<0.05）；r-AFSstageIII~IVpatientsserumsFlt-1，VEGFandendometrialtissuesNF-Bp65were（345.35±90.13）pg/ml，（486.70±99.13）pg/mland（0.814±0.110），weresignificantlyhigherthanthatinstageI-IIpatients（P<0.05）；sFlt-1，VEGFandendometrialtissueNF-Bp65expressionwaspositivelycorrelatedwithr-AFS（rs=0.633，0.801and0.563，P<0.05）；EndometrialtissueNF-Bp65expressionhadnocorrelationwithserumsFlt-1andVEGF（P>0.05）.Conclusion：ThereisacertainrelationshipbetweentheserumsFlt-1，VEGFandendometrialtissueNF-Bp65expressionandthedevelopmentofEMs，worthfurtherstudy.

[Keywords]Solublevascularendothelialgrowthfactorreceptor1；vascularendothelialgrowthfactor；nucleartranscriptionfactorB；endometriosis

子宫内膜异位症（endometriosis，EMs）的发生发展，会导致患者卵巢、输卵管等的破坏，促进患者盆腔慢性疾病的发生。流行病学研究表明，EMS的发病率可达0.7%以上[1]。其中中度或者重度EMs的发生可导致更为严重的临床预后。基础领域的相关研究显示，趋化因子或者生长因子家族相关成员的异常表达，可以通过加剧氧化应激损伤，促进EMs患者异位病灶的侵袭或者临近正常组织的破坏等，促进EMs的发生发展[2-4]。为了进一步揭示EMs的发病机制，为临床上EMs的预后评估提供理论参考，本研究选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例，探讨了血清中内皮生长因子受体1（solublevascularendothelialgrowthfactorreceptor1，sflt-1）、血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）、核转录因子B（nucleartranscriptionfactorB，NF-B）的表达，及其与患者临床分期的关系。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例（病例组），纳入标准：（1）均经病理学确诊；（2）入院前3个月为接受过激素类药物治疗；（3）患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准：有子宫息肉、子宫内膜非典型性增生等妇科器质性疾病。同时选取正常生育期妇女共60例作为对照组，两组受试者年龄、月经周期、产次等一般资料比较差异无统计学意义（p＞0.05），见表1。

1.2检测方法

血清sflt-1和VEGF等的检测：入院后24小时内常规采集患者肘部静脉血3ml，加入抗凝剂2ml，1000rmin离心（离心半径10cm）5min，采用生物酶联免疫吸附实验检测相关指标，sflt-1和VEGF检测试剂盒购自罗氏生物检测应用公司，配套试剂及仪器购自南京伯斯金生物科技有限公司。

内膜组织中NF-Bp65等的表达的检测：采用石蜡切片脱蜡至水，切片厚度3mm，3%H2O2室温孵育5min，采用去离子水冲洗3次，每次3min，采用浓度为10%牛奶蛋白（1g蛋白加入100ml纯水）封闭，室温孵育5min，加入抗体（鼠来源，南京碧云天生物科技有限公司），37℃孵育2h，PBS缓冲液冲洗3次，每次5min，滴加HRP标记的二抗（兔来源，购自罗氏检测公司），37℃孵育30min，PBS冲洗3次，每次5min，加入NBT/BCIP色剂显色5min，复染，脱水，透明，封片，镜下观察。OLIPICS电子显微镜购自上海精密仪器有限公司，配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。

1.3r-AFS分期

对EMs患者进行r-AFS分期，内容包括对患者异位病灶和粘连范围进行评分，其中Ⅰ期为1～5分，Ⅱ期为6～15分，Ⅲ期为16～40分，Ⅳ期为＞40分，分数越高表面患者症状越重。

1.4统计学处理

采用SPSS19.0进行统计分析，计量资料采用（±s）表示，两组间比较采用t检验；相关性采用Spearman相关或Pearson相关分析。以p＜0.05表示差异具有统计学意义。

2结果

2.1两组血清sflt-1及VEGF比较

病例组血清sflt-1和VEGF明显高于对照组，差异比较有统计学意义（p＜0.05），见表2。

2.3相关分析

EMs患者血清sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-Bp65表达与r-AFS分期进行Spearman相关分析，结果显示sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-Bp65表达与r-AFS分期呈正相关（rs=0.633、0.801和0.563，p＜0.05）；内膜组织NF-Bp65表达与患者血清sflt-1和VEGF无相关性（p＞0.05）。

3.讨论

自身性激素敏感性的改变，或由于多次的人工机械性操作损伤病史等，均可促进EMs的发生，特别是在具有慢性盆腔炎症性疾病或者卵巢囊肿的人群中，EMs的发病率更高，可较正常对照人群上升25%-55%[5]。EMs的发生可以在下列方面影响到患者的生存预后[6，7]：（1）EMs破坏了卵巢上皮生发层，其对于卵母细胞或者生发细胞的破坏，可以加剧卵巢功能的衰退；（2）中度或者重度的EMs患者，其盆腔特别是后腹膜、直肠及膀胱的粘连较为严重，长期的慢性盆腔疼痛严重影响到了患者的生活质量。一项汇集了324例中度EMs患者的临床治疗随访研究显示，EMs治疗后的总体有效率不高，病情复发率可达25%以上，且患者的自主性疼痛感受等并无明显改善。而通过对EMs发病过程中相关生物学机制的研究，一方面可以为EMs的综合性生物治疗提供靶点，同时可以为如何降低EMs治疗后的复发率提供参考。

VEGF是血管内皮生长因子家族成员，其对于血管内皮细胞受体sflt-1的高特异度的结合作用，可以促进子宫内膜异位症病灶组织中细胞的高血流灌注，提高了病灶细胞的侵袭能力，促进了子宫内膜腺体等间质成分对于卵巢或者输卵管的浸润[8，9]；NF-B介导的信号通路，能够在影响炎症因子的表达、诱导局部氧化应激反应等方面发挥作用，NF-B的表达上调在影响异位症病灶细胞微环境的基础上，促进了EMs的盆腔组织的破坏[10，11]。

本次研究发现，EMs患者血清中的sflt-1和VEGF等指标均明显高于正常对照人群，上升幅度较为明显，提示sflt-1和VEGF可能参与到了EMs的发生发展过程中，sflt-1和VEGF等的上升能够影响到异位症病灶中子宫内膜腺体细胞的侵袭活力，增加内异症病灶组织中的炎症性因子的表达，促进患者病灶对于腹膜上皮或者其他盆腔正常组织的浸润。孙莹等[12，13]研究者在探讨EMs患者血清中相关趋化因子或者生长因子表达的过程中发现，重度EMs患者的血清中VEGF可平均上升25%-65%，且患者的病程越长、临床分期越晚，VEGF的表达越高，患者的临床预后越差。在探讨不同的r-AFS分期患者血清中相关因子表达的过程中，可以明显地发现r-AFS分期越高，VEGF或者sflt-1的表达越高，趋势较为明显，提示sflt-1和VEGF与子宫内膜异位症患者的病情具有较为密切的关系，从机制上考虑sflt-1和VEGF促进患者r-AFS分期进展的原因，考虑可能与下列因素有关：（1）sflt-1可以通过诱导子宫内膜异位症腺体细胞的异常分化，导致其对于盆腔组织的破坏出血、子宫直肠陷凹的粘连等病理过程持续性进展；（2）VEGF的上升，能够影响到新生血管的形成，促进异位症病灶组织细胞的血流供应，加剧病灶的增殖活性。但需要注意的是，陆丹等[14]研究者的研究中并未发现VEGF在不同临床分期或者r-AFS分期中的表达差异，这与本研究的结论存在一定的差别，考虑到子宫内膜异位症患者的病情差异、入组患者的血清学检测方法的不统一等，均可能导致了相关结论的差异。最后，本研究发现sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-Bp65表达与r-AFS分期呈正相关，相关性较为明显，进一步提示了sflt-1和VEGF与患者病情的关系。

综上所述，血清sflt-1、VEGF水平以及内膜组织NF-Bp65表达与EMs发生发展有一定的关系，相关生物学因子的表达与患者病情的关系研究，可以为后续临床治疗提供新的思路。

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