正交试验法优选百苑止咳颗粒的提取工艺

高军1王隶书1（通讯作者）程东岩1刘晓杰1吕

高军1王隶书1（通讯作者）程东岩1刘晓杰1吕炎唏2陈昕2

1.吉林省中医药科学院长春130012；2.长春中医药大学长春130117

摘要：目的：优选百苑止咳颗粒的提取工艺。方法：以橙皮苷含量测定为考察指标，采用正交试验法优选出了百苑止咳颗粒的较优提取工艺。结果：优选的提取工艺为加水煎煮3次，每次加7倍量水，提取1小时。结论：优选的工艺稳定可行，为百苑止咳颗粒的最优提取工艺。

关键词百苑止咳颗粒；提取工艺；正交试验

呼吸道感染本身急性期症状消失后，咳嗽仍然迁延不愈，临床上称之为感染后咳嗽（postinfectiouscough），患者多表现为刺激性干咳或咳少量白色黏液痰，可以持续3～8周，甚至更长时间，X线胸片检查无异常。据统计，感染后咳嗽约占上呼吸道感染病史患者的11～25%，目前尚无特效药物治疗，而传统中医药能通过辩证施治有效改善上述症状。

百苑止咳颗粒为吉林省中医药科学院王玉教授的临床经验方，由紫菀、百部、陈皮等十味中药组成，具有宣利肺气，疏风止咳之功效。该方以汤剂形式在临床上应用数年，治疗感染后咳嗽以风邪犯肺证为主要临床表现者效果较好。本课题组拟将其开发成院内制剂。本实验以橙皮苷含量测定为考察指标，采用正交实验法优选出了百苑止咳颗粒的较优提取工艺，从而为后续该制剂的研究开发奠定了基础。

1仪器与材料

1.1仪器

岛津LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津）；AUW-120D电子分析天平（日本岛津）；CP214电子天平（奥豪斯仪器常州有限公司）；KQ5200DE台式超声波清洗器（昆山美美超声仪器有限公司）。

1.2试药

1.2.1药材：组方中所有药材均购于吉林省宏检药材公司，且符合中国药典2015年版一部相应药材项下检测标准。

1.2.2对照品：橙皮苷对照品（批号：110721-200613）购于中国药品生物制品检定所，系供含量测定用。

1.2.3试剂：甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

由于本品基础方在临床上以汤剂形式应用多年，效果显著，故为保证疗效，考虑仍采用水煎法对组方中药材进行提取。

2.1因素水平的选择

根据文献和经验，可知影响百苑止咳颗粒水煎工艺的主要因素有：提取次数（A）、煎煮时间（B）和加水量（C），每个因素各取3个水平，采用正交表L9（34）进行试验，因素水平表见表1。

2.2.1提取：称取处方规定量的药材共9份，分别按表2条件加水进行煎煮，合并煎液，滤过，滤液浓缩至稠膏，减压干燥，称重。

2.2.2橙皮苷含量测定方法[1]

2.2.2.1供试品溶液的制备取干膏粉（相当于1/1000总干膏粉量），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2.2对照品溶液的制备取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含45μg的溶液，即得。

2.2.2.3色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35：4：61）为流动相；检测波长为283nm；柱温40℃；流速1ml/min。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000。

2.2.2.4测定法分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

2.2.3方法学考察

通过对正交试验所得干膏中橙皮苷含量测定方法进行方法学考察，结果表明橙皮苷进样浓度在5.856～234.24μg·ml-1之间与峰面积呈良好的线性关系；精密度、重复性结果良好，RSD=0.78%及RSD=1.48%（n=6）；平均回收率为100.3%，RSD=1.95%（n=6）。

故用此方法测定干膏中橙皮苷含量完全可行。

2.2.4结果分析：直观分析结果见表2，方差分析结果见表3。

由方差分析结果可知，A、B因素对提取有明显影响，而C因素对结果影响不大，而由直观分析结果可知，最佳提取工艺为A3B2C3。为了节省成本，选择水煎较优提取工艺为A3B2C1，即将药材加水煎煮3次，每次1小时，每次加水量为药材量的7倍。

2.3工艺验证

称取处方规定量的药材3份，以上述较优工艺进行提取、浓缩、干燥，测定橙皮苷含量，结果含量为1.96、1.95、1.98mg·g-1。根据上述测定结果，从提取成本和有效成分含量两方面综合分析，确定所选的提取工艺为最佳选择。

3讨论

3.1中药院内制剂是中医院临床特色的体现，是老中医经验的结晶，每个好的中医院或专科都离不开院内制剂，将名老中医验方通过研发，采用现代科技制成院内制剂，是对市场需求和临床需要的有效补充。

3.2百苑止咳颗粒组方中川贝母价格昂贵，为此课题组曾设计了两种不同提取方法（部分水煎和全水煎），以氨水引咳的小鼠为模型进行止咳效果观察[2，3]，结果表明两种工艺对小鼠咳嗽次数及咳嗽的潜伏期均有一定的作用，且以全水煎法效果更强。上述试验结果为该院内制剂的后续研发提供了一定的理论依据。

参考文献：

[1]中国药典[S].2015年版.一部.191

[2]张雷，刘竞天.基于指标成分和药效学优选定痛宁颗粒的醇沉工艺[J].中国药师，2017，20（11）：1979-1982

[3]陈佳敏，许志威，鄢文佳，等.大蒜油对实验小鼠的镇咳祛痰作用[J].中国现代应用药学，2015，32（3）：261-264

基金项目：吉林省科技厅重点科技攻关项目（课题编号：20160204012YY）