网状纤维染色的影响因素分析

罗华丽

（浙江大学医学院附属第四医院病理科浙江义乌322000）

【摘要】网状纤维是网状结缔组织的一种纤维，为分支交织成网的纤细纤维，由含有糖蛋白的胶原蛋白组成。在一定病理条件下，可能转变为胶原纤维。网状纤维染色在病理诊断中意义显著，染色方式诸多，极易受到多种因素影响，结合实际情况，本文首先阐述了网状纤维染色在病理诊断中的意义，后对影响网状纤维染色的相关因素以及解决方式进行全面分析，旨意为相关人员的研究工作提供参考资料。

【关键词】网状纤维染色；影响因素；解决方式；质量提升

【中图分类号】R73【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）25-0134-02

在对患者开展临床病理检查过程中，切片内网状纤维（下称纤维）以及糖类物质显示对于癌瘤组织来源以及多种疾病鉴别诊断有着相当重要的现实意义。在通常情况下，除了要进行嗜银染色以显示网状纤维以外，也要开展PAS染色，以显示出糖类物质。流程相对繁琐、费时费力，这在很大程度上影响了诊断时间[1]。结合实际情况，本文全面分析了影响网状纤维染色的因素，以寻求合适染色方式，提升工作效率。现将具体结果汇报如下。

1.网状纤维染色在病理诊断中的意义

网状纤维染色应用广泛，在病理诊断中意义显著，组织内的网状纤维多寡以及分布特征，预示着不同的病理诊断结果。网状纤维染色基本原理[2]为组织内的蛋白质和银化合物结合，再经过还原成为金属银沉淀于组织内及其表面，因此得以着色，该染色能够全面显示病理组织网状支架受损详情。纤维多寡、疏密、是否存在断裂等，对于判别疾病性质以及病情发展、预后来讲，均存在相当重要的现实意义[3]。这一点重点体现在肿瘤疾病诊断中，如用此染色方法鉴别上皮性还是非上皮性来源恶性肿瘤、血管内皮细胞瘤或外皮细胞瘤、恶性淋巴瘤或组织细胞肉瘤、粘液纤维瘤与粘液肉瘤、脑膜瘤与星形细胞瘤等，还可用于判断肝组织的网状支架塌陷破坏或增生情况。

2.影响网状纤维染色的相关因素以及解决方式

2.1切片厚度

我们科室切片厚度为3～5微米。肝脏组织通常制作为薄切片，也能明确显示出黑色粗网状结构和细的分支结构。骨髓活检组织钙含量丰富，质地较硬，前期需做脱钙处理，如切片过薄，网状纤维颜色不均，若切片过厚，则会令网状纤维呈现重叠感。肺部组织切片以4微米为适合，此厚度开展染色，能够明确显示出肺组织结构情况。

2.2高猛酸钾前处理

切片在浸银处理之前，使用酸性高猛酸钾前处理相当重要，经氧化后，能够使纤维选择性染色作用更强。该步骤氧化时间通常为2～3min，倘若气温较低，可增加至5min。倘若仅使用高猛酸钾，也可氧化，但速度慢[4]，经草酸漂白后，会留下生成物残留在切片中，对染色结果造成影响。使用加酸的高猛酸钾可取得良好效果，因硫酸以及高猛酸钾均为强氧化剂，前者能够提升后者氧化作用，可确保切片清洁，银浸润均匀，提升纤维贪色能力，另外也能对背景色调加以改善，削弱银氨液对细胞核着染度。但酸不得过量，否则会对细胞复染效果造成影响。氧化时间不宜太长，通常应以切片为棕褐色为度。

2.3草酸漂白

切片经高锰酸钾处理后为棕褐色，倘若未漂白，不利于银着色。当切片规格在3～5μm时，使用2%草酸处理1min即可。当厚度在6μm以上时，时间控制在1～2min。草酸有很强还原性，且属于有机酸，倘若使用得当，可起到良好的分化和漂白效果。漂白不宜过度，否则会引起切片脱落[5]。

2.4硫酸铁铵媒染处理

银盐为当前网状纤维染色主要用料。虽说溶液成分存在差异，但均含碱性银液，容易沉淀为金属银。纤维对于银的自然亲和性较低，但经适当处理后，可提升纤维对其选择性。硫酸铁铵为常用媒染剂，其为复盐，水溶液内能够电离出三价铁离子，正电荷，可以和纤维表面的蛋白结合，在纤维和金属银作用过程中，起到媒介作用，以浓度为2%硫酸铁铵为媒染剂，时间控制在10min理想。可根据温度适当调节时间，未经媒染切片纤维显示不全，倘若媒染时间在5min以下，核着色相对较淡；若作用时间过长，则胶原纤维的黄色程度重，网状纤维染色会相对减弱。

2.5浸银和银氨液配制

染色过程中常用的银染液为银氨液，因银氨液中的银化合物较易被组织吸附，亲和力强。与蛋白质结合后，经甲醛还原为金属银，沉淀在纤维内部和表面，进而着色。

配制银氨液对器皿清洁度有很高的要求，在配制过程中，所有器皿应先进行清洁处理，避免在使用过程中液体析出沉淀使切片受到污染，使用前再使用蒸馏水清洗一次。

银浸润为化学反应，在整个纤维染色过程内，均禁止使用自来水对切片冲洗。这是因为自来水内含有漂白剂和氯离子、杂质，当发生作用时，会生成氯化银，并在空气中行成氧化银沉淀，进而影响染色质量。

配制所需试剂纯度要高，应为分析纯，防止带入过多杂质，要精确称量体积和重量。使用的硝酸银应避光保存，不可存放过久，可避免在配制过程中为了使银氨液无色透明而加入过多氨水，导致着色能力下降和作用时间延长。

银染液为碱性，有可能引起脱片。可使用粘附剂解决此问题，但添加量不宜过多，以避免产生沉淀。做好纤维染色切片防脱，有着重要意义。对于组织极易脱落的切片，具体解决方式为：使用免疫组化防脱片，每一步处理后的蒸馏水洗，均应将切片缓缓浸入蒸馏水中，不可直接用蒸馏水冲洗或在水中用力晃动切片，避免掉片。

染色完毕后应在显微镜下检查，倘若染色不佳，可重复染色，银氨液可多次使用。将其盛放在染色缸内降低了切片金属银沉淀的发生率，节省染液，但多次使用染液极易受污染析出银沉淀，污染切片组织，因此要特别注意。

2.6甲醛还原

甲醛液为还原剂，其能够将与纤维结合的氨银络合物还原为金属银，利用此法析出的银会分布在纤维表面，也可以将这种现象称之为“银镜反应”。相关工作人员在操作过程中，必须严格控制还原时长，时间过短则络合物没有被全部还原为金属银，会导致染色结果中纤维着色不清晰。

2.7氯化金调色

组织经过银氨液染色以及还原后，在氯化金作用下可与银反应，生成金以及氯化银，使用此法可减少污染，加强金属和纤维亲和力。其原理为：金、银为同族元素，银的原子半径以及序数均小于金，活动属性高，结合金属活性特征，银能置换出氯化金中的金原子。在此作用下，氯化金起到调色作用。在调色过程中，需要在镜下完成控制，倘若时间过久，纤维颜色会变浅，若时间短，颜色加深[6]。

2.8硫代硫酸钠固定

硫代硫酸钠可以清除没有被还原和被氯化金作用的金属银，令切片更为干净清晰，保存更持久。此时切片上仅有金属银在纤维表面，进而更清晰的显示了成分，和纤维结合的银盐也更为牢固。

切片经还原后，倘若没有被硫代硫酸钠以及氯化金处理，虽说也能够显示出纤维，但此时网状纤维和胶原纤维均为深棕色，对比度不高。由此可见，上述两种处理方式为必需。

2.9冰冻切片

其能够进行网状纤维染色，但值得说明的是，绝大部分网状纤维染色使用石蜡切片，适用于各类固定液。但金属锇盐以及金属汞盐固定液可能会产生非特异性银背景，进而影响结果判定。由此可见，选择合适金属盐类，有着相当重要意义。

3.小结

在病理诊断及鉴别诊断过程中，HE染色有时很难辨别疾病的病因、组织来源及发病机制等方面的问题，故常需借助特殊染色、免疫组化等辅助手段来补充，从而使病理诊断的准确性不断得到提高。网状纤维染色是病理工作中最常用的特殊染色方法之一，由于网状纤维分布非常广泛，多种疾病的病变均会影响其数量分布等，对预测患者疾病发展、疾病转归等方面有显著意义，在临床病理诊断中占据了相当重要的地位。网状纤维染色方式诸多，极易受到多种因素影响。对于此，改良染色方式，消除不良影响，对于提升病理诊断结果来讲具有相当重要的现实意义。

【参考文献】

[1]许美权，黄新翼，吴俊辉，等.网状纤维染色的一种倒扣染色法[J].诊断病理学杂志，2015，22(8).

[2]王柏沄，李玉松，黄高昇，等.病理学技术[M].北京：人民卫生出版社.2000:145-146.

[3]王荔，李泳.网状纤维染色关键染液的配制方法[J].临床与实验病理学杂志，2015(1):101-102.

[4]王晓燕，高俊岩，王艳霞.网状纤维染色在临床病理诊断中的应用及技术[J].中国医药导报，2016，13(9):72-75.

[5]聂艳红，王红霞，刘慧，等.网状纤维染色及P504S在胰腺实性假乳头状瘤鉴别诊断中的价值[J].临床与实验病理学杂志，2016，32(7):799-801.

[6]杨伟平，吴文乔，邹宗楷，等.快速网状纤维染色在术中快速冷冻切片病理诊断中的应用[J].临床与实验病理学杂志，2016，32(10):1181-1182.