11205例羊水产前诊断的细胞遗传学分析

何萍1,2梁昕1,2韦小妮1,2

何萍1,2梁昕1,2韦小妮1,2

（1柳州市妇幼保健院医学遗传科广西柳州545001）

（2柳州市出生缺陷预防与控制重点实验室广西柳州545001

【摘要】目的：探讨羊水细胞核型异常的细胞遗传学原因与预防。方法：采用培养瓶法培养羊水细胞8～12天、外周血淋巴细胞72小时培养及染色体常规制备方法，G显带技术进行染色体核型分析。结果：11205例羊水产前诊断病例中检出异常染色体核型445例（不包括羊水细胞核型为镶嵌体而复查脐血无异常的病例），检出率3.97%。其中，染色体结构异常为265例，占异常核型的59.55%，244例遗传自父方或母方，占92.08%，21例为新发突变，占7.92%；数目异常为180例。结论：父方或母方为异常核型携带者是造成胎儿羊水细胞染色体核型异常的主要原因，孕前夫妻双方行外周血染色体检查及产前诊断是预防和减少染色体异常儿出生的最有效手段。

【关键词】产前诊断；羊水细胞染色体；外周血淋巴细胞染色体；核型分析

【中图分类号】R714【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2015）15-0063-02

Cytogeneticanalysisof11205casesofamnioticfluidprenataldiagnosisHePing1,2LiangXin1,2WeiXiaoni1,2

1.Departmentofmedicalgenetics,LiuzhouMaternalandChildCareHospital,2.LiuzhouKeyLaboratoryofBirthDiseasePreventionandControl,Liuzhou,Guangxi,China,545001

【Abstract】ObjectiveToIinvestigatecausesofamnioticfluidcellsabnormalkaryotypegeneticsandprevention.MethodsByusingcultureflaskcultivationofamnioticfluidcells8to12daysofperipheralbloodlymphocytesof72hoursoftrainingandchromosomeconventionalpreparationmethods,Gbandingtechniqueforchromosomekaryotypeanalysis.ResultsDetectedin11205casesoftheamnioticfluidprenataldiagnosisabnormalkaryotypein445case(notincludingtheamnioticfluidcellskaryotypeformosaicsreviewcasesofumbilicalcordbloodwithoutexception),thedetectionrateof3.97%,abnormalchromosomestructurefor265case,59.55%ofabnormalkaryotype,244casewasinheritedfromthepaternalormaternal,accountedfor92.08%,21caseofnewmutations,accountedfor7.92%;Numberofabnormalfor180case.ConclusionPaternalormaternalforabnormalkaryotypecarriersisthemaincauseoffetalamnioticfluidcellsabnormalchromosomekaryotypeandpregnancylinebothsidesofhusbandandwifeperipheralbloodchromosomeexaminationandprenataldiagnosisistopreventandreducethemosteffectivemeansofchromosomeabnormalitysonwasborn.

【Keywords】Prenataldiagnosis;Chromosomesfromamnioticfluidcells;Peripherallymphocytechromosome;Karyotypeanalysis

1.引言

染色体是主要遗传物质——DNA的载体。人类正常的染色体核型为46,XX或46,XY。若染色体数目或结构发生改变就称为染色体异常（chromosomeabnormality），也叫染色体发育不全(chromosomedysgenesis)。染色体异常包括常染色体异常和性染色体异常。自1971年巴黎国际命名会议至今，发现的染色体异常近上万种，而除了携带者及性染色体异常者外，绝大多数的染色体异常临床上均有不同程度的智力低下和生长发育迟缓。羊水细胞染色体异常，尤其染色体结构异常病因复杂，诊断困难，临床表现多样，是导致胎儿异常的主要原因之一，给家庭和社会都造成极大的负担。为此，我们对11205例羊水产前诊断病例进行细胞遗传学分析，现将结果报告如下。

2.资料与方法

2.1资料

对2012年1月～2015年7月来我院产检门诊进行的11205例羊水产前诊断的患者进行羊水细胞染色体检查，发现染色体异常445例，其中结构异常265例。对265例羊水细胞染色体结构异常者行夫妇双方外周血淋巴细胞染色体检查。

2.2方法

2.2.1羊水细胞培养、染色体制备及核型分析B超定位，在无菌条件下行羊膜腔穿刺取羊水10ml/管,共两管，分别离心（1600r*10min）去上清，细胞悬液分别接种于独立的两个培养瓶中（即1线和2线），置于两个独立的37℃6.5%CO2培养箱中培养7～8天后换液，密切观察羊水细胞贴壁生长情况，当羊水细胞贴壁生长旺盛，导致显微镜下见多个克隆及大量圆皮细胞，即可进行收获。常规制备染色体，G显带（要求带纹达到320～400条带阶段）。将制备好的标本按次序置入蔡司染色体全自动分析系统进行扫片，并在工作站内对标本进行染色体分析，每个标本计数不少于20个分裂相，每线计数10个中期及分析至少3个核型，染色体异常则加大计数和分析量。根据人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN）对检测染色体核型进行命名。

2.2.2外周血淋巴细胞培养、染色体制备及核型分析对265例羊水细胞染色体结构异常者行夫妇双方外周血淋巴细胞染色体检查，分别取受检夫妇2-3ml肘静脉血置于肝素钠真空抗凝管，每管血分别取0.5ml在接种于两个独立尖底培养管（内含5mlF12完全培养基）并置两个独立37℃恒温培养箱进行72小时密闭式培养，常规制备染色体，G显带（要求带纹达到320-400条带阶段）。将制备好的标本按次序置入蔡司染色体全自动分析系统进行扫片，并在工作站内对标本进行染色体分析，每个标本计数不少于20个分裂相并分析5个核型，染色体异常则加大计数和分析量。根据人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN）对检测染色体核型进行命名。

2.3结果

1205例羊水产前诊断病例中检出异常染色体核型445例（不包括羊水细胞核型为镶嵌体而复查脐血无异常的病例），检出率3.97%。其中，染色体结构异常为265例，占异常核型的59.55%，244例遗传自父方或母方，占92.08%，21例为新发突变，占7.92%；数目异常为180例。

3.讨论

染色体异常是染色体数目或结构发生了改变而引起，也称染色体发育不全。自1971年巴黎国际命名会议至今，已发现的染色体异常就有上万种之多。染色体数目异常，尤其是常染色体数目异常，现在在临床上一般建议终止妊娠。而染色体结构异常病因十分复杂，临床表现多样，诊断困难。

染色体结构异常，可分为非平衡性结构异常、平衡性遗传性结构异常及平衡性非遗传性结构异常等。本研究中，染色体结构异常为265例，244例遗传自父方或母方，占92.08%，21例为新发突变，占7.92%，发现52例非平衡性结构异常，均遗传自父母，17例来自父方，35例来自母方，遗传自父方或母方有显著差异，不能排除时间及地域因素；190例平衡性遗传性结构异常，胎儿核型均遗传自孕妇夫妇之一，67例来自父方，123例来自母方，有较显著差异，不能排除时间及地域因素；18例平衡性非遗传性结构异常。染色体结构异常为265例，244例遗传自父方或母方，占92.08%，21例为新发突变，占7.92%。

非平衡性结构异常，多伴有严重多发畸形，一般可能会流产、死胎、或因严重疾患而夭折等。对于非平衡性结构异常，在临床上医生多建议夫妻双方考虑优生优育而及时终止妊娠。但并不是所有的非平衡性结构异常都会引起临床效应，如9qh+或9ph+、16qh+、D/G组短臂多态（ps+,pss,pstk+等）、染色体倒位、及Yqs等。一般来说，9qh+或9ph+、16qh+、D/G组短臂多态（ps+,pss,pstk+等）及Yqs是染色体多态变异，改变区域为结构异染色质，许多研究报道认为这些区域没有重要的结构基因，多无明显临床效应。

平衡性遗传性结构异常，胎儿核型均遗传自孕妇夫妇一方，一般表现为无明显临床表型的携带者。携带者指带有染色体结构异常但临床表型正常者。一般分为易位和倒位两大类，至今有记载的就有近两万种，几乎涉及每条染色体的每个区带。据广泛的群体调查，在欧美的发生率为0.25%,即每200对夫妇就有一对的一方为携带者；据夏家辉等在长沙的调查，在我国的发生率为0.47%，即每106对夫妇中有一对的一方为携带者。[1]通常夫妇一方为携带者时，再次妊娠时流产和生育畸形儿的风险很高，临床上医生多建议孕妇继续妊娠并随访观察。

平衡性非遗传性结构异常，为胎儿新发的染色体结构异常，大多数情况下都表现为表型正常的携带者。但是也有研究报道中提出这种结构异常在少数情况下也有合并先天畸形的可能，Warburton[3]在1991年提出，如果胎儿核型为新发的平衡易位，则有6.1%合并先天畸形；如果胎儿核型为新发的罗氏易位，则有3.7%合并先天畸形;如果胎儿核型为新发的倒位，则有9.4%合并先天畸形。通常临床医生向孕妇解释结果时，应该注意告知其胎儿染色体为新发结构异常时再大多数情况下为无明显表型的携带者，但在少数情况下其也可能会合并先天畸形的后果及所要承担的风险，并结合孕妇夫妇的实际情况让孕妇夫妇知情选择。

总之，孕前夫妻双方普行外周血淋巴细胞染色体检查可以使备孕夫妇及早制定最合适的生育计划，有效预防和减少染色体异常儿的出生。若夫妇一方为携带者，妊娠时流产和生育畸形儿的风险很高，应在孕中期行产前诊断，在有条件的情况下，也可以行孕早期产前诊断，甚至可以行植入前产前诊断，在最大程度上预防和减少染色体异常儿的出生。同时，加强优生优育宣传活动，积极开展遗传优生咨询，对已婚夫妇进行孕前及孕期指导等，才能更有效地减少染色体异常而的出生。

【参考文献】

[1]夏家辉等.医学遗传学[M].第一版.北京:人民卫生出版社,2004.

[2]高雪峰.胎儿染色体结构和数目异常的遗传咨询和处理决策[J].中国实用妇科与产科杂志.2013.29(8):614-618.

[3]Warburton.Denovobalancedchromosomerearrangementsandextramarkerchromosomesidentifiedatprenataldiagnosis:clinicalsignificanceanddistributionofbreakpoints［J］.AmJHumGenet，1991，49:995-1013.

[4]何萍.102例智力低下患者外周血淋巴细胞染色体核型分析[J].中国优生与遗传杂志.2010.18(9):38-43.