益水生新饮对自发性高血压大鼠早期肾损害影响的研究

郭婧姣1徐宏2(通讯作者)

郭婧姣1徐宏2(通讯作者)

（1广西中医药大学广西南宁530001;2柳州市中医院广西柳州545001）

【摘要】目的观察益水生新饮（YSSXY）对自发性高血压大鼠(SHR)肾损害保护作用。方法：12周龄雄性（spontaneouslyhypertensionrat以下简称SHR）SHR大鼠50只随机分为模型对照组、YSSXY低、中、高剂量组和苯那普利组，每组10只。连续给药8周。检测：给药前及用药后每两周末检测各组大鼠血压一次；尿微量白蛋白（Microalbumin以下简称mALB）、胱抑素C（CystatinC以下简称CysC）水平的变化。3.Masson染色切片法观察各组大鼠肾脏病理改变。结果：结果显示：益水生新饮与苯那普利均能降低血压、尿微量白蛋白和胱抑素C水平，其中中剂量组和苯那普利组疗效相当，高剂量组疗效更显著。益水生新饮与苯那普利均能缓解肾脏纤维化进程，高剂量组效果更明显。结论：结果表明：益水生新饮能够延缓SHR大鼠肾损害的进程，在降压同时能够起到保护肾脏的作用。

【关键词】益水生新饮自发性高血压大鼠高血压肾损害。

【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）14-0128-03

随着社会进步发展，人们生活方式发生了改变，高血压（essentialhypertension，EH）发病率呈逐年增高趋势。2007年我国高血压患者已达2亿[1]。长期高血压可引起心、脑、肾等靶器官的损害。其中肾脏是高血压损害的重要靶器官之一。高血压导致的肾功能衰竭呈逐年上升趋势。本实验观察大鼠给药前后血压及给药后尿微量白蛋白、胱抑素水平的变化，运用HE及Masson染色方法观察YSSXY对SHR肾脏的影响，进一步探讨益水生新饮在治疗原发性高血压肾损害方面的作用。

一、材料和方法：

1.实验动物：12周龄40只雄性SHR大鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司，(合格证号：0265359)，体重200±10g。

2.实验药物：益水生新饮农本方颗粒（别涯楼、地黄、山茱萸、淮山药、龟板、丹参)，由广西中医药大学第三附属医院药剂科提供。苯那普利，每片10mg，北京诺华制药有限公司生产(批号：H20030514)。上述药物均用蒸馏水配置成相应浓度的混悬溶液。

3.实验试剂：尿微量白蛋白放射免疫分析药盒：北京利德曼公司；血清胱抑素C水平测定用免疫分析药盒试：深圳晶美生物技术有限公司提供。

4.实验器材：BL-420生物信号仪（成都泰盟科技有限公司）；BP-6大鼠无创血压测试仪(成都泰盟科技有限公司)；微量加样器、电子秤、实验所用常规手术器械由广西中医药大学提供；台式离心机TGL-16B：上海安亭科学仪器厂；BNP全自动蛋白分析仪：西门子医学诊断产品(上海)有限公司；切片机（LeicaRM2245），湖北贝诺生物组织摊片烤片（BN－803）。

5.动物分组：将50只12周龄雄性SHR大鼠随机分成4组：YSSXY低剂量组、YSSXY中剂量组、YSSXY高剂量组、苯那普利组和模型对照组（以下简称模型组），随机编号。给药前进行血压检测，用药后每2周最后一天进行血压检测。

6.动物给药：YSSXY农本方颗粒以生理盐水调配后灌胃给药YSSXY剂量按5.4g/kg给药。YSSXY低剂量组（生药浓度3.555g?mL-1）、YSSXY中剂量组(生药浓度7.110g?mL-1)、YSSXY高剂量组(生药浓度14.22g?mL-1)、苯那普利组(10mg?kg-1?d-1)，以上均按10mL?kg-1?d-1灌胃。模型对照组（生理盐水灌胃)，灌胃体积均为2mL，每天灌胃一次，连续给药8周。实验期间各组大鼠均给予自由饮水，普通饲料自由喂养。

7.观察指标：

（1）大鼠尾动脉压测量：使用无创血压检测仪BP-6和无创尾动脉压分析系统于用药前及灌药后第2、4、6、8周最后一天检测各组大鼠血压变化一次，采用尾动脉套尾法检测各组大鼠血压。将大鼠置于固定笼中，置42～45℃恒温预热箱预热５～10min，将尾套袖放置于大鼠的尾根部，套袖自动充气加压直至脉搏波消失后套袖自动放气，每只测量取标准曲线3次，平均三次的结果为本次的血压值。

（2）尿mALB、CysC含量测定：实验第8周末将大鼠同时置于代谢笼内，收集24小时尿液，各组大鼠禁食不禁水。将收集的尿样标本，送广西中医药大学附属瑞康医院检验科化验，放射免疫法测定尿mALB含量。在实验室处死大鼠。巴比妥腹腔麻醉大鼠，在无菌条件行下腹主动脉采血5ml左右，送往广西中医药大学附属瑞康医院检验科化验。采用HE及Masson染色切片法，光镜下观察肾脏组织皮质、髓质区肾小管及间质的结构及变化，切片在HPIAS—1000高清晰彩色病理图像分析软件上，每张切片随机选取5个高倍视野，观察益水生新饮对肾脏组织病理变化的影响。

二、统计学处理：

采用SPSS17.0统计软件进行统计分析，所有数据用平均数±标准差(-x±s)表示，进行样本比较方差分析。以P<0.05有统计学意义；P<0.01，为有显著性差异。

三、实验结果：

1.血压改变：SHR各组大鼠血压随周龄的增加而增加。各组大鼠灌胃给药第8周(20周龄)，模型组血压显著高于治疗前(P<0.01)，与模型对照组比较，苯那普利组与YSSXY低、中组SHR大鼠血压明显降低(P<0.05)，其中YSSXY高剂量组SHR大鼠血压明显降低(P<0.01)。与苯那普利组比较，YSSXY高剂量组SHR大鼠血压明显降低(P<0.05)。（见表1）

表1各组大鼠血压变化（尾动脉收缩压）组别（-x±s，n=10）

血压/mmHg

注：与模型组相比，#P<0.05；与苯那普利组相比，*P<0.05。

3.肾脏病理组织形态学变化：模型对照组极少部分肾小管出现变性、坏死，少数肾小管水肿有扩张趋势、炎性细胞进一步浸润，甚至萎缩。上皮细胞部分肿胀、脱落，管腔狭窄。片灶状炎性细胞浸润,片灶状肾小管间质纤维化。肾小球肥大,内皮细胞核、系膜区增大,系膜细胞及基质增生明显,肾小球基底膜非均质增厚并空泡变性，毛细血管腔狭窄、闭塞；低剂量组肾小管上皮细胞部分出现空泡变性及颗粒变性，小灶状肾小管萎缩及炎症细胞浸润、小灶状肾小管间质纤维化。肾小球肥大,系膜区增宽,系膜细胞、基质、内皮细胞增生,肾小球基底膜局灶非均质增厚并空泡变性，毛细血管腔局灶狭窄、闭塞；中剂量组肾小管可见少数空泡变性和颗粒变性。肾小管稍萎缩及少数炎症细胞浸润，肾小管间质纤维化不明显。肾小球稍肥大,系膜区局灶增宽,系膜基质局灶增生，系膜细胞未见明显增生，肾小球基底膜空泡变性，局灶稍增厚，恢复细线状，毛细血管腔稍狭窄；高剂量组肾小管未见明显颗粒变性，肾小管上皮细胞及管腔正常,间质内无增生,可见散在的炎性细胞浸润，肾小管间质纤维化不明显。肾小球系膜区系膜基质局灶、系膜细胞稍增生，肾小球基底膜局灶空泡变性，未见明显增厚，部分恢复细线状，毛细血管腔未见明显狭窄。苯那普利组病理情况同中剂量组。如图所示。

四、讨论

长期高血压状态可使肾小动脉硬化,出现肾小管或肾小球功能损害,严重者可发展为慢性肾功能衰竭。原发性高血压导致的肾损害是慢性肾功能衰竭的第二主要病因[1]。因此，及时诊断和治疗原发性高血压早期肾损害尤为重要,可缓解其向慢性肾衰竭转变。胱抑素C过去也称为C-微量蛋白质或C-白蛋白，胱抑素C在pH环境中是一种带正电荷的低分子量蛋白质，由于分子量较小,可自由通过肾小球滤过膜,并在近曲小管被大量吸收降解，不返回血液。因此，胱抑素C可作为肾小球滤过率的重要检测指标[2]。mALB是已被公认的检测高血压早期肾损害的重要指标，尿mALB在pH环境中带负电荷,其分子量中等,由于肾小球滤过膜电荷选择性屏障作用,大多数的mALB不能顺利通过滤过膜,所以，尿中含量较低，如肾小球完整性遭到破坏，肾脏血流自身调节功能失调，肾小球的高灌注状态使滤过膜电荷下降，尿微量白蛋白漏出增多，超过肾小管重吸收的阈值，尿中白蛋白浓度增加而出现白蛋白尿[3,4]。

本研究结果显示，益水生新饮中、高剂量组血压较模型组明显下降(P<0.01)，尿微量白蛋白较模型组降低(P<0.05)，胱抑素较模型组降低(P<0.05)；肾脏病理结果表明益水生新饮高剂量组与模型组相比肾脏纤维化程度明显减轻，模型组出现肾小球肥大,系膜细胞及基质增生明显,肾小球基底膜非均质增厚并空泡变性，毛细血管腔狭窄、闭塞。有明显纤维化表现，表明20周的大鼠已经出现明显的肾脏损害。表明益水生新饮在降压的同时还能保护肾脏，甚至逆转高血压肾损害、缓解肾脏纤维化的功能。

中医学对高血压早期肾损害无明确病名，历代文献当属“眩晕”、“腰痛”等范畴。高血压病程长。久病阴耗，阴虚则阳亢，肝肾阴虚，不能制阳，浮越于上，因而体内阳气不足，无力温煦推动血液，血液瘀滞脉络，而致血瘀，瘀血可损伤肾络，肾分清泌浊功能失常，关门不固，微物质不固，致尿α1-微球蛋白漏出，高血压病早期肾损害的征象显著[5]。

高血压早期肾损害病机为“阴虚阳亢兼有血瘀”。故治疗上以滋肾潜阳活血为法，可取得较好的临床效果[6].根据这一病机确立的滋阴潜阳活血原则益水生新饮在临床上已取得良好治疗效果。以“滋补肝肾”为治法。拟方益水生新饮，进行了临床实验研究[7]。益水生新饮为草药复方制剂，方中熟地黄、山茱萸，山药共为君药，汲取六味地黄三补之妙，有滋阴凉血，补益肝肾之效。研究表明[8]补肾健脾药，能减少尿微量蛋白排泄，促受损的肾小管修复，延缓肾损害进程；方中臣药别涯楼为广西特有瑶药，寓在阳中求阴，以防“孤阴不生，独阳不长”之弊；佐以丹参，活血生新，通络安神；使药龟板，滋阴潜阳。诸药相合，具有活血通络、滋补肝肾,平肝潜阳。既能降压又可延缓肾损害,达到标本兼治的效果,现代研究表明，诸药能降低血压，改善肾脏功能，延缓肾损害的发展[9]。

实验表明益水生新饮有明显的降压作用，在降压的同时逆转高血压病早期肾损害。中医药治疗高血压早期肾损害能从整体出发，全面调节机体功能。益水生新饮药物组成为中国传统中草药，药源广泛，毒副作用少，市场前景不可估量，深入探讨此方的高血压肾病保护机制对其的合理推广应用有远大意义，为现代中医药治理高血压早期肾损害作了有益的尝试。

参考文献

[1]许顶立,任昊.高血压病肾脏损害的诊断与防治[J].中华心血管病杂志,2004,32(2):190-192.

[2]ShlipakMG,FriedLF,CrumpC,etal.Elevationsofinflammatoryandprocoagulantbiomarkersinelderlypersonswithrenalinsufficiency[J].Circul

[3]JensenJS，Feldt—RasmussenB，StrandgaardS，etaLArterialhypertension，microalbuminuria，andriskofischemicheartdisease[J].Hypertension，2000，35(4)：898—904.

[4]梁旭，罗林杰，王新根，等.伴缺血性脑血管病变的高血压患者血小板活化表达[J].中国实用内科杂志，2003，23(4)：231-232ation,2003,107:87-92.

[5]徐宏，赵先锋.杨晓敏等.治疗高血压早期肾损害的经验总结[J].四川中医.2007.25(8)：8—9.

[6]徐宏;关建国;赵先锋.滋肾潜阳活血法治疗高血压早期肾损害37例临床观察.辽宁中医杂志2006,33(12)1584-1585.

[7]徐宏，赵先锋加用益水生新饮治疗高血压病早期肾损害的临床研究.广西中医药,2012，35，(6)：18-20.

[8]徐成钢，吴志英，钱斌等.益肾泄浊方血清对慢性肾衰大鼠肾小球系膜细胞的影响[J].中国中西医结合杂志，1997，17（7）：423-424.

[9]徐宏，赵先锋.加用益水生新饮治疗高血压早期肾损害的临床研究[J].广西中医药，2012，35（6）：18-20.

广西省科技厅自然科学基金（2011GXNSFA018218）

中医药管理局中医药科技专项（GZYZ1122）