细胞块制备方法的比较

邓晓玉唐艳

成都市第三人民医院病理科610000

摘要：目的：比较各种细胞块制备方法，以寻求简便、快捷、效果佳，利于诊断的细胞块制备方法，以此提高体液内肿瘤细胞病理诊断的检出率及准确性，以及利用免疫组织化学法对体液中细胞进行类型鉴别，和进行耐药基因表达产物的检测，并且提高恶性胸腹水的治疗效果。方法：琼脂、蛋清、戊二醛以及直接细胞块的制备。结果：50例胸腹水同时采用琼脂、蛋清、戊二醛以及直接体液离心制作细胞块，经固定、脱水、浸蜡、包埋、制片、HE染色，其中直接离心沉淀制作细胞块石蜡切片有7例查见癌细胞，余为琼脂制备4例、蛋清制备2例、戊二醛制备3例。结论：直接细胞块制备方法简单，操作步骤少，不易出差错，结果稳定，不需要特殊的材料和设备，可与平常的日常工作一起进行，HE及免疫组织化学染色背景清晰，效果满意。

关键词：细胞块；琼脂；蛋清；戊二醛

【Abstract】Objective：Tocompareavarietyofcellblockpreparationmethodstofindsimplefastandgoodeffect，whichwillhelpdiagnosethecellblockpreparationmethods.Tumorcellsinbodyfluidsinordertoimprovethedetectionrateofpathologicaldiagnosisandaccuracy，andtheuseofimmunohistochemistrytoidentifythetypeofcellsinbodyfluids，andforthedetectionofdrugresistancegeneexpressionproducts，andimprovethetreatmentofmalignantpleuraleffusion.Methods：agar，eggwhite，glutaraldehydeanddirectcellblockpreparation.Results：50casesofpleuraleffusionwhileusingagar，eggwhite，glutaraldehyde，anddirectproductionofbodyfluidcentrifugalcellblock，thefixation，dehydration，dippingwax，embedded，producer，HEstaining，cellswhichproducedirectcentrifugationparaffinblockshavesevencasesinvestigated，seecancer，morethanforagarpreparationin4cases，eggwhitepreparationin2cases，glutaraldehydepreparedin3cases.Conclusions：Directcellblockpreparationmethodissimple，smallsteps，noteasytogowrong，theresultsarestable，doesnotrequirespecialmaterialsandequipment，withtheusualdailyworktogether，HEandimmunohistochemicalstainingbackgroundofclear，satisfactoryresults.

【KeyWords】Cellblock；Agar；Egg；Glutaraldehyde。

引言病理细胞学因其简单易行，安全可靠，费用低，病人痛苦少或无痛苦，几乎无损伤，诊断迅速，可反复检查，多部位取材，在临床病理学得到广泛应用。但其不同于组织学，获取的有效成分有限，且没有组织学形态的支撑，对于良恶性肿瘤、恶性肿瘤分型等有一定局限性。因此，快速、多量的采集细胞有限成分，加以固定对病理细胞学的诊断有莫大的帮助。在此，采用了琼脂、蛋清、戊二醛以及直接离心细胞块的制作，并将其制作过程以及结果加以比较，推荐适合于临床病理的方法。

一．材料与方法

（一）材料选用成都市第三人民医院病理科2011年4-6月所收到的胸腹水50例。800型离心沉淀器，ShandonExcelsion高级全自动组织脱水机。

（二）方法将所收到的体液都分别进行琼脂、蛋清、戊二醛、以及直接离心制作细胞块石蜡切片。

1.琼脂细胞块制备法（图表1）：（1）将收到的胸腹水静置10min后，倾去上清液，，摇匀后取底部混浊液体14ml至离心管，3000转/分，离心5-10分钟，反复3-5次。（2）离心完成后弃去上清液，沉渣中倒入10%的中性福尔马林固定1h。（3）吸干液体。（4）滴加少许融化的琼脂，摇动试管使其充分混合，3000转/分，离心，5-10分钟。此时，琼脂已凝固。（5）将琼脂块取出，切成大小合适的块状放入包埋盒。

2.蛋清细胞块制备法（图表2）：（1）将收到的胸腹水静置10min后，倾去上清液，，摇匀后取底部混浊液体14ml至离心管，3000转/分，离心5-10分钟，反复3-5次。（2）固定：离心完成后弃去上清液，沉渣加鸡蛋清3ml，用扁平的竹签轻轻刮取试管底部的细胞，尽量使细胞成团悬浮于蛋清中，离心5分钟（2000转/分）。（3）去除多余蛋清，沿管壁轻轻加入10%中性福尔马林固定液2ml。蛋清遇到福尔马林立即凝固使细胞成团状，轻轻摇动，让细胞团块悬浮于固定液中，过夜。（4）轻轻取出细胞团块，用包埋纸包好，放入包埋盒。

3.戊二醛细胞块制备法（图表3）：（1）将收到的胸腹水静置10min后，倾去上清液，，摇匀后取底部混浊液体14ml至离心管，3000转/分，离心5-10分钟，反复3-5次。（2）固定：离心完成后弃去上清液，加入3%戊二醛10ml，充分混合，3000转/分，离心5-10分钟。（3）用竹签轻轻将沉淀物取出，放入脱水盒。

4.直接细胞块制备法（图表4）：（1）将送检的体液标本静置10min后，倾去上清液，摇匀后取底部混浊液体置于14ml的一次性塑料试管中离心5-10min，3000转/分，反复3-5次，离心后倾去上清液。（2）可见凝集块沉积于试管底部或一侧附壁，沿凝集块周边剪下试管壁，连同凝集块一起用包埋纸包裹，置于包埋盒。

5.脱水、透明、浸蜡：取出沉淀物用双层纱布包裹放入包埋盒，进入ShandonExcelsion高级全自动组织脱水机进行脱水，脱水时酒精温度为室温，85%酒精脱水90min，95%酒精脱水90min，无水乙醇Ⅰ脱水90min，无水乙醇Ⅱ脱水90min，二甲苯透明时温度为室温，二甲苯Ⅰ透明30min，二甲苯Ⅱ透明30min，浸蜡时温度为摄氏65度，石蜡为生物组织切片石蜡，浸蜡Ⅰ90min，浸蜡Ⅱ90min，浸蜡Ⅲ120min（其方法与普通组织一样）。

6.包埋：在包埋时将凝集块表面朝下，从多个角度切碎后再进行包埋。切片时易于切到有价值的细胞将细胞块，因为细胞在不同的层面分布密度不同。如果不切碎沉淀物包埋，所切的切面有可能细胞数量少或者没有肿瘤细胞分布在该层面。

7.切片：Leica切片机，切片厚度为4μm。

8.HE染色步骤：（1）切片在恒温干燥箱内脱蜡60min，温度为摄氏65度；（2）二甲苯Ⅰ脱蜡20min；（3）二甲苯Ⅱ脱蜡15min；（4）无水乙醇洗去二甲苯1min×2；（5）95%酒精1min；（6）90%酒精1min；（7）85%酒精1min；（8）自来水洗2min；（9）苏木精染色3min～5min；（10）自来水洗1min；（11）1%盐酸酒精分化20s；（12）自来水1min；（13）稀氨水（1%）反蓝30s，自来水洗1min；（14）伊红染色1min；（15）自来水1min；（16）85%酒精脱水20s；（17）90%酒精脱水30s；（18）95%酒精Ⅰ2min；（19）95%酒精Ⅱ1min；（20）无水乙醇Ⅰ2min；（21）无水乙醇Ⅱ1min；（22）切片在恒温干燥箱内干燥15～30min，温度为摄氏60度；（23）二甲苯Ⅰ2min；（24）二甲苯Ⅱ2min；（25）二甲苯Ⅲ1min；（26）中性树胶封片，完成制片过程。

二．结果

50例胸腹水中，直接细胞块石蜡切片中7例内查见癌细胞（其中送取活检三例，结果与细胞学结果一致），琼脂细胞块石蜡切片查见4例，蛋清细胞块查见2例，戊二醛细胞块石蜡切片查见4例。其中直接细胞块石蜡切片中细胞密度高，HE染色细胞膜、细胞质、细胞核显示清晰，着色好易于显微镜观察。

三．讨论

直接细胞块制备法与琼脂、蛋清、戊二醛细胞块制备法比较：

（一）操作便捷，细胞成分丢失少

琼脂包裹细胞成分并取出包埋时，其琼脂温度不易控制，易有空洞，切片中细胞成分较分散，后期细胞块保存易干裂；蛋清包裹细胞成分并取出包埋时，包裹效果欠佳，细胞成分丢失较多，固定时间较长，亦保存效果欠佳。

（二）细胞成分的保存

只使用戊二醛固定的样本无法阻止脱水、渗透和包埋过程对样本中脂类的抽提，因而对细胞膜的固定效果欠佳。戊二醛在稀释溶液中会自行发生一系列反应，因而应尽可能新鲜配制。相较而言，直接细胞块制备对于免疫组化和特殊染色的干扰更少。

（三）石蜡切片效果

直接细胞块石蜡切片HE染色细胞膜、细胞质、细胞核显示清晰，背景清晰，着色好易于显微镜观察，效果满意，避免了琼脂、蛋清包埋的那种模糊背景，以及着色模糊。戊二醛固定易使组织变脆变硬，不利于切片。

（四）生物危害

戊二醛带有刺激性气味，对眼睛、皮肤、粘膜有强烈的刺激作用，对环境有危害，对水体可造成污染。

四.结论

综上，我们认为直接细胞块制备方法简单，操作步骤少，不易出差错，结果稳定，不需要特殊的材料和设备，可与平常的日常工作一起进行，HE染色背景清晰，效果满意，保存效果良好，有利于免疫组织化学法对体液中细胞进行类型鉴别，提高体液内肿瘤细胞病理诊断的准确性，以及为分子病理诊断技术提供组织之外的稳定可靠的标本来源，更好的为临床治疗提供依据。

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作者简介：邓晓玉（1985-），女，汉，成都人，医师，成都市第三人民医院，学士，主要从事细胞病理学研究。