组织脱水透明中叔丁醇取代二甲苯的环保方法

王立坤

王立坤(黑龙江省哈尔滨第四医院病理科黑龙江哈尔滨150026)

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2011）2-0064-02

二甲苯是病理制片中常用的透明剂，其折射指数为1.50。它对组织的收缩性强，易使组织变硬变脆，因此，组织块（3～4mm）在二甲苯中一般30分钟即可使组织透明，时间一旦超过1～2小时，常规组织易成碎屑，切片时蜡块很难连接成片，而一些小、细、碎的组织就更难包埋，切片。

其次，苯类为人们所公认的致癌物质，因其有毒且极易挥发（室温即可挥发），所以对人体危害极大。二甲苯主要通过呼吸道吸入和皮肤粘膜吸收进入人体，损害神经系统和血液系统，引起神经衰弱症候群和植物神经紊乱，以及皮肤粘膜刺激症状，如头痛、头晕、乏力、睡眠障碍、食欲减退；血压降低、轻度贫血、白细胞降低、湿疹和皮肤干燥等；尿中可出现蛋白管型，敏感者造成再障。病理科工作者，尤其是技术人员，每天都与二甲苯接触，长期使用对健康是个隐患。我科就曾有两名技术员因长期接触二甲苯而患上职业病。

叔丁醇是一种醇类，学名2-甲基-2-丙醇，有樟脑气味，常温下为无色液体或固体，在25℃以下，叔丁醇为固体。它的毒性很小，介于乙醇和丙醇之间，仅对中枢神经具有麻醉作用。叔丁醇可与水、乙醇、二甲苯混合，不易被氧化，可单独使用，也可与乙醇混合使用，是目前常用的一种脱水剂。它不易使组织收缩或变硬，而且最为关键的是叔丁醇脱水后可不经透明直接浸蜡，浸蜡前先经过叔丁醇和石蜡1：1混合液。现将我科三年来用叔丁醇代替二甲苯的方法和体会介绍如下：

1材料与方法

1.1材料选取手术切除及门诊活检标本1000例，包括乳腺、胃、结肠、直肠、肝、脾、肾、肺、胆囊、阑尾、子宫、卵巢、甲状腺等组织发生的炎症、增生、囊肿、良恶性肿瘤，还有经脱钙处理的骨组织。上述组织按常规取组织块。

1.2仪器设备生物组织自动脱水机一台，型号TS-12D（湖北孝感宏业医用仪器有限公司），共分12个缸。

1.3药液菜单第一缸为混合固定液，第2、3、4、5缸为95%的乙醇，第6、7、8缸为无水乙醇，第9缸为叔丁醇，第10缸为叔丁醇-石蜡混合液，第11、12缸为石蜡。其中混合固定液为AF液，为95%乙醇和10%甲醛按质量比9:1配成。叔丁醇-石蜡混合液为叔丁醇和石蜡按质量比1：1配成。

1.4程序混合固液2小时，95%乙醇各1小时，100%乙醇各1小时，叔丁醇30分钟，叔丁醇-石蜡混合液30分钟，石蜡液各1.5小时。其中叔丁醇-石蜡混合液合液缸、石蜡缸80℃水浴加热。

1.5药液更换(1)AF液：视标本量多少7天更换一次。（2）乙醇脱水液：倒弃与AF液缸相邻的95%乙醇，以后乙醇缸依次前移，根据标本量多少至少7天将最后一道无水乙醇更换成新液。（3）叔丁醇因挥发较快，建议3～5天更换或及时添加新液。（4）叔丁醇-石蜡混合液7天更换。（5）石蜡用量随时补足。

2结果

2.1蜡块内组织样本平整无缩小，无凹陷无脆、裂、硬。在室内阳光照射，6个月以上无变化。

2.2组织切片切面完整，呈连续蜡带，厚4-5μm，厚薄均匀，无皲裂，无收缩、过硬或膨胀。

2.3染色效果优良，透明效果清晰，切片无褪色。肉眼观看：颜色艳丽清晰。镜下观看：全片组织背景清晰，胞质、胞核清晰。组织结构清晰，无过度收缩、皲裂、折叠、膨胀。

2.4因我科的脱水机安装在通风厨内，所有材料从脱水机中取出后，已无刺激性气味。

2.5新方法环保，它摒弃了有毒有害的二甲苯试剂，避免了病理工作人员在室内接触大量挥发的“二甲苯”，也避免了对环境的污染。

3讨论

叔丁醇可与水、乙醇、石蜡混合使用，它不易使组织收缩或变硬，使固定、脱水、浸蜡后的组织易于包埋和切片。叔丁醇使组织样本固定的同时又有脱水、透明作用，脱水的同时又加强了固定兼透明，透明的同时又可以软化组织，使其不易收缩。这种方法保存了组织细胞的各种成份，也很好地保存了组织的抗原性。

在操作中还须注意以下问题：（1）固定液、脱水液、透明液、浸蜡液应根据标本量和制片量，随时更换或添加，尤其是叔丁醇，其挥发程度快于乙醇，更应随时添加或更换。（2）叔丁醇-石蜡混合液、石蜡液应80℃水浴加热，以免浸蜡不彻底。（3）从脱水机中取出标本盒后再放置到通风柜内晾置1小时，做到包埋时无气味。

在脱水透明的过程中，用叔丁醇代替二甲苯，再配合全自动脱水机的使用，使病理制片的过程中有效减少了毒害和污染，显著改善了病理制片者的工作环境，建议病理界推广使用这种绿色无毒害的环保方法。