纤维蛋白溶解系统检测

高玉凤刘艳芝薄晶群

高玉凤刘艳芝薄晶群（黑龙江省农垦总局牡丹江分局中心医院157000）

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)01-0191-03

【摘要】纤维蛋白溶解系统（简称纤溶系统）一方面与血液凝固系统共同协调，使体内血凝块或血栓溶解，维持血循环的畅通；另一方面可使局部炎症灶得到清除，促进伤口愈合.使腺体、导管内的纤维蛋白块及时溶解.以保证各管道的畅通。

【关键词】纤溶系统检测方法评价影响因素

(一)纤溶酶原测定

纤溶酶原(plasminogen，PLG)测定有活性和定量测定，活性测定多采用发色底物法；定量测定可采用ELISA法或其他免疫学方法。此处介绍发色底物法原理。

1.原理首先将链激酶(纤溶酶原激活剂)加入待检血浆，使纤溶酶原活化成纤溶酶。然后再加入显色底物。纤溶酶可以水解底物释放出显色剂PNA，PNA的量与血浆中纤溶酶原的量成正比。

2.试剂与方法与上述发色底物法AT-Ⅲ类似，此处不再做介绍，或可参照有关的操作说明书。

(二)血浆鱼精蛋白副凝固试验

1.原理在凝血酶的作用下，纤维蛋白原释放出FPA、FPB后转变为纤维蛋白单体(FM)，进一步生成纤维蛋白。纤维蛋白在纤溶酶的作用下产生纤维蛋白降解产物(FDP)，FM与FDP的碎片可形成可溶性复合物，鱼精蛋白可使该复合物中的FM游离，FM再自行聚合呈肉眼可见的纤维状、胶状或胶冻状，本试验阳性可反映FDP尤其是碎片X的存在。

2.材料

(1)10g／L鱼精蛋白溶液(pH6.5)，分装后置-20℃冰箱保存。

(2)阳性对照血浆。

(3)37℃水浴箱，离心机，试管等。

3.标本要求109mmol／L枸橼酸钠1：9抗凝血浆。

4.操作

(1)取经枸橼酸钠抗凝(1：9)的乏血小板血浆0.5ml于试管中，置37℃水浴分钟。

(2)加10g／L鱼精蛋白溶液0.05ml混匀，置37℃15分钟，、立即观察结果。

5.注意事项

(1)抽血不顺利、抗凝不均匀、导管内抽血、标本放入冰箱或标本反复冻溶、未能立即观察结果、贫血、抗凝剂不足等均会导致假阳性结果。

(2)严格控制水浴箱的温度和放置时间，不然会造成假阳性或假阴性，如水浴温度未达37℃，重新加热至37℃时会造成假阴性。

6.结果判断健康人为阴性。

(1)阴性：血浆透明、清晰、无不溶解产物产生。

(2)弱阳性：细颗粒沉淀。

(3)阳性：粗颗粒沉淀。

(4)强阳性：纤维蛋白丝、纤维蛋白网或胶冻形成。

(三)纤维蛋白降解产物(FDP)测定

FDP各个碎片仍具有与纤维蛋白原及纤维蛋白相同的抗原决定簇，故有相同的抗原性，一般以人纤维蛋白原免疫家兔制备抗血清，利用抗血清通过各种免疫学方法检测FDP水平，常用的有胶乳颗粒凝集试验、ELISA试验及其他免疫学方法，此处介绍胶乳凝集法。

1.原理胶乳凝集法。血清纤维蛋白(原)降解产物(6brindegradationproducts，FDP)检测是向被检血浆中加入FDP抗体包被的胶乳颗粒悬液，当血清中FDP的浓度等于或超过5mg／L时，便与胶乳颗粒上的抗体结合，则胶乳颗粒发生凝集。根据被检血清的稀释度可计算出血清FDP的含量。

2.试剂组成胶乳试剂、缓冲液、阳性对照、阴性对照、胶乳反应板。

3.操作

(1)取被检者静脉血，以1570g离心5分钟，分离血清。

(2)用微量加样器吸取20μl胶乳试剂，置于胶乳反应板的圆圈内，再加入20μl被检血清，用玻棒搅匀，轻轻摇动3～5分钟。

(3)在较强的光线下观察结果，出现明显均匀的凝集颗粒者为阳性(FDP含量≥5mg／L)，无凝集颗粒者为阴性(FDP含量<5mg/L)。

(4)如果阳性，进一步将被血清用缓冲液作l：2、1：4、1：8、l：16等倍比稀释，分别按上法进行测定，以发生凝集反应最高稀释度作为反应终点。

(5)结果计算：本法最大敏感度为5mg/L，如被检血清最高稀释倍数为1：16，则被检血清中FDP的含量为5×16=80mg/L。

4.注意事项

(1)实验所用试剂盒应置2～8℃保存，切勿冻结，测定前从冰箱中取出，与室温平衡，用前轻轻摇匀。

(2)胶乳反应板应保持清洁干燥。

(3)测定温度应高于20％，低温环境应延长1～2分钟观察结果。

5.参考值血清FDP含量≤5mg／L。

(四)D-二聚体测定

目前，可用于D-二聚体测定的方法很多，如胶乳凝集法、免疫渗滤法、自身红细胞凝集试验、EuSA试验、免疫比浊法(胶乳增强型免疫比浊法)等，目前已有许多品牌的全自动血凝仪均可以进行D-二聚体测定。下面介绍临床最常用的两个实验方法的工作原理。

1.原理

(1)胶乳凝集法：D-二聚体(D-dimer，D-D)是交联纤维蛋白降解产物之一，为继发性纤溶的特有代谢产物。被检血浆中加入标记D-二聚体单抗的胶乳颗粒悬液，如果血浆中D-二聚体含量>0.5mg/L时，便与胶乳颗粒上的抗体结合，胶乳颗粒则发生凝集。根据被检血浆的稀释度可计算出血浆D-二聚体的含量。

(2)胶乳增强免疫比浊法：向待检血浆中加入包被了D-二聚体单克隆抗体的乳胶试剂共同孵育。血浆中的D-二聚体与其抗体结合成大分子聚合物，经波长405nm的透射比浊检测，光亮度与血浆中D-二聚体的量呈反比。现代的全自动血凝仪多数采用此法(其试剂和方法见相关的说明书)。

2.试剂

胶乳试剂、缓冲液、阳性对照、阴性对照、胶乳反应板。

3.操作

(1)制备被检者枸橼酸钠抗凝的新鲜血浆，抗凝剂与血液之比为1：9。

(2)取胶乳试剂20μl，置于胶乳反应板的圆圈内，加入被检者新鲜血浆20μl，用玻棒迅速搅匀，轻轻摇动3～5分钟。

(3)在明亮的光线下观察结果，出现明显均匀的凝集颗粒为阳性(D-二聚体含量≥0.5mg/L)，，无凝集颗粒者为阴性(D-二聚体含量<0.5mg/L)。

(4)如果阳性时进一步将被检血浆用缓冲液作1：2、1：4、l：8、1：16等倍比稀释，分别按上法进行测定，以发生凝集反应最高稀释度作为反应终点。

(5)结果计算：本法最大敏感度为0.5mg／L，如果被检血清最高稀释倍数为1：8，则被检血浆中D-二聚体的含量为0.5×8=4mg／L。

4.临床意义

(1)在DIC时，D-二聚体检测阳性或增高，是诊断DIC的重要依据。

(2)深静脉血栓形成(deepveinthrombosis，DVT)、肺栓塞(pulmonarythromboembolism，PTE)等血栓性疾病时D-二聚体含量增高，而D-二聚体阴性时临床可排除DVT和FIE的诊断，所以已成为这类疾病非常有价值的阴性预测的指标。

(3)心肌梗死、重症肝炎等疾病时D-二聚体含量也增高。

(4)D-二聚体在继发性纤溶时阳性或增高，而原发性纤溶症时阴性或不升高，是临床上两者鉴别的重要指标。

(5)也可作为溶栓治疗有效的观察指标。

参考文献

[1]李家增，贺石林，王鸿利主编.血栓病学北京:科学出版社，1998;284.

[2]张慧娟，费冲，邵慧珍，等，正常及妊高征孕妇血小板a颗粒膜蛋白和纤溶状态的研究.中华妇产科杂志，1994;29:423.

[3]邵慧珍，王鸿利，支立民，等.抗凝和纤溶系统的变化妊娠高血压综合征发病机制的作用.中华血液学杂志，1992;13:455.

[4]王学文.DIC及DIC前状态的诊断.国外医学输血及血液分册，1992;15(4):208.