新型卡波姆妇科凝胶的生物安全性评价

黄丽娟王路

天津中鼎生物医学科技有限公司天津市300385

摘要：目的评价一种新型卡波姆妇科凝胶的生物安全性。方法利用自制的卡波姆妇科凝胶，通过动物实验和细胞实验，对卡波姆妇科凝胶的生物安全性进行了评价。结果凝胶浸提液的相对增殖率为88.5%，细胞毒性反应为1级；阴道刺激试验结果显示试验组和对照组3只家兔的平均记分均为5，刺激指数为0；试验样品生理盐水和芝麻油浸提液组动物皮肤反应等级未超过相应的阴性对照组动物反应等级。结论该卡波姆妇科凝胶的体外细胞毒性为1级，符合国家标准，无潜在阴道刺激作用和皮肤致敏性，具有较好的生物安全性。

卡波姆是以季戊四醇等与丙烯酸交联得到的高分子聚合物，根据聚合度的不同，可分为多种规格的，其中以卡波姆940等应用最多。卡波姆可溶于水、甘油、乙醇等，在很低的浓度下即能够形成有生物黏附性的高粘度的凝胶，具有良好的凝胶性、增稠性、粘附性和成膜性等，因此广泛用于凝胶剂、软膏剂、滴眼剂、膜剂等多种剂型的制备，尤以凝胶剂最为适用。凝胶剂具有制备简单、质量稳定、附着力强、增强药物疗效的特点，因此卡波姆作为凝胶剂的基质具有广泛的应用前景。

本公司制备了一种卡波姆妇科凝胶，通过在阴道壁形成一层保护性凝胶膜，将阴道壁与外界细菌物理隔离，从而阻止病原微生物定植。根据国标GB/T16886.5-2003，GB/T16886.10-2005所规定的方法，分别进行体外细胞毒性试验、阴道刺激试验、迟发型超敏反应试验来评价该敷料的动物实验阶段生物安全性。

1材料和方法

1.1主要材料与试剂

卡波姆妇科凝胶（自制）；小鼠成纤维细胞L-929（NCTC）；日本大耳白兔（北京隆安实验动物养殖中心）；白化豚鼠（北京隆安实验动物养殖中心）。

1.2卡波姆妇科凝胶的生物安全性评价

1.2.1体外细胞毒试验

采用四唑盐（MTT）比色法进行试验。试验选用传代48h生长旺盛的NCTCclone929细胞（小鼠成纤维细胞L-929），采用浸提液试验方法。称取试验样品3.42g，加入细胞培养液17.1mL，以0.2g/mL浸提比例，37℃24h制备浸提液。将配置好的1×104/mL细胞悬浮液接种于96孔板内，每孔100微升，试验设空白对照组、阴性对照组、阳性对照组和试验样品组，每组各接种6孔。在含5%二氧化碳条件下，37℃培养24h后，弃去培养液，空白对照组用细胞培养液交换，阴性对照组用浸提比例为6cm2/mL高密度聚乙烯浸提液交换，阳性对照组用含5%二甲基亚砜的细胞培养液交换，试验样品组用浸提液交换。置含5%二氧化碳培养箱内37℃培养72h后，加MTT继续培养4h，在酶标仪570nm和630nm处测定吸光度。计算相对增值率（RGR），根据RGR判断试验样品细胞毒性反应级别。

按国家标准，细胞相对增殖度分为5级：≥100%为0级；80%～99%为1级；50%～79%为2级；30%～49%为3级；0～29%为4级。只有细胞毒性为1级或0级的生物材料才能用于体内实验。

1.2.2阴道刺激试验

试验采用健康成年雌性家兔6只，样品组和对照组各3只动物。试验组注入1mL样品凝胶，对照组注入1mL0.9%生理盐水注射液，用软绵纸轻轻拭去溢出的液体，每次间隔24小时连续重复上述步骤，连续5天。初次接触后24小时和每次试验操作前记录阴道口和会阴溢液、红斑和刺激情况。末次接触后24小时，无痛处死动物，完整切下阴道后纵向切开，检查上皮组织层的刺激、损伤和坏死情况。将阴道组织放入15%福尔马林固定液中固定后进行组织学评价。

试验组动物显微镜评价记分相加后再除以观察总数即得出试验组平均记分。试验组平均记分减去对照组平均记分即得出刺激指数。刺激指数0分为无刺激，刺激指数为1～4分为极轻微刺激，刺激指数为5～8分为轻度刺激，刺激指数为9～11分为中度刺激，刺激指数为12～16分为重度刺激。

1.2.3迟发型超敏反应试验

表1Magnusson和Kligman分级标准

2.2阴道刺激试验结果

本试验结果显示，肉眼观察阴道组织未见刺激、损伤和坏死现象。组织学观察，试验组3只家兔的阴道组织局部刺激平均记分为5，对照组3只家兔的平均记分为5，刺激指数为0，反应程度为无刺激。在本试验条件下，卡波姆妇科凝胶对阴道组织的刺激性为无刺激。

2.3迟发型超敏反应试验结果

本试验结果显示，除去敷贴物后24h，阴性对照生理盐水和芝麻油组豚鼠激发部位皮肤反应均为0级；试验样品生理盐水和芝麻油浸提液组皮肤反应均为0级；阳性对照组皮肤反应为2只1级，2只2级，1只3级。

除去敷贴物后48h，阴性对照生理盐水和芝麻油组皮肤反应均为0级；试验样品生理盐水和芝麻油浸提液组皮肤反应亦均为0级；阳性对照组皮肤反应为1只0级，2只1级，2只2级。

在本试验条件下，试验样品生理盐水和芝麻油浸提液组动物皮肤反应等级未超过相应的阴性对照组动物反应等级，试验样品浸提液未见引起迟发型超敏反应，无潜在的皮肤致敏性。

3讨论

阴道炎为妇科常见病、多发病。正常健康妇女阴道由于解剖组织的特点对病原体的侵入有自然防御功能。如阴道口的闭合，阴道前后壁紧贴，阴道上皮细胞在雌激素的影响下的增生和表层细胞角化，阴道酸碱度保持平衡，使适应碱性的病原体的繁殖受到抑制，而颈管黏液呈碱性，当阴道的自然防御功能受到破坏时，病原体易于侵入，导致阴道炎症。临床上常见有：细菌性阴道病（占有症状女性22%～50%）、念珠菌性阴道炎（17%～39%）、滴虫性阴道炎（4%～35%）、老年性阴道炎、幼女性阴道炎。

研究表明，卡波姆可以显著提高凝胶的强度和生物黏附性，提高药物在阴道的滞留时间[1]，而且水性凝胶剂具有易涂抹、无油腻感，在阴道壁形成保护膜。因此被广泛用于治疗妇科疾病的各种药物。以卡波姆为基质制备己烯雌酚凝胶，用于治疗老年性阴道炎和外阴炎，效果显著[2]。制备含替硝唑的卡波姆凝胶，用于治疗细菌性阴道炎，症状缓解有效率为98%，线索细胞阴转率为71.5%，值得在临床上推广[3]，含有苦参碱的卡波姆凝胶即苦参凝胶比甲硝唑更能有效缓解阴道炎症，不良事件发生率较后者低[4]。

本公司开发出一种阴道阻菌凝胶，该凝胶呈微酸性，对皮肤黏膜无刺激，阻菌性强，从而阻止致病菌定植，并对该材料进行了生物安全性评价，证明该材料体外细胞毒性试验结果符合国家标准，无潜在阴道刺激作用和皮肤致敏性，证实了该材料的安全性，可望应用于临床。

参考文献：

[1]ChoiHG，JungJH，RyuJM，etal.Developmentofinsitu-gellingandmucoadhesiveacetaminophenliquidsuppository[J]，InternationalJournalofPharmaceutics，1998，165（1）：33-44.

[2]谢胜祥，张韬.己烯雌酚凝胶剂的制备与质量控制.中国医院药学杂志，2005，25（9）：878.

[3]卢登华，卢惠莉，章媛媛，等.妇炎膏的研制及临床应用.中国药业，2003，12（10）：56.

[4]兰琳.苦参凝胶治疗细菌性及滴虫性阴道炎有效性与安全性系统评价.中草药，2015，46（24）：3779-3782.