HPLC法测定枳实导滞丸中橙皮苷的含量

丁冬梅陈歆妙

丁冬梅陈歆妙（广东省食品药品职业技术学校510663）

【摘要】目的建立枳实导滞丸中枳实的含量测定方法。方法采用HPLC测定橙皮苷的含量，色谱柱为RP-C18柱，流动相为乙腈-水（21∶79），检测波长为284nm。结果橙皮苷的进样量在0.4016μg-2.0080μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9996）；平均回收率为101.31%，RSD=0.82%(n=6)。结论该方法可用于枳实导滞丸的质量控制。

【关键词】枳实导滞丸枳实橙皮苷HPLC

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2012）15-0290-02

DeterminationofhesperidininZhishiDaozhiWanbyHPLC

DINGDong-mei,CHENXinmiao

(GuangdongFoodandDrugVocationalandtechnicalSchoolGangzhou510663)

Abstract:Objective:ToestablishaHPLCmethodfordeterminationofhesperidininZhishiDaozhiWan.Methods:ASpherisorbODSColumnwasused.ThemobilephasewasCH3CN-water(21:79),anddetectedrespectivelyat284nm.Results:Thelinearrangesofhesperidinwas0.4016μg～2.0080μg,r=0.9996;TheaveragerecoveryandRSDofhesperidinwas101.31%,0.82%(n=6).Conclusion:ThemethodsmaybeusedforthequalitycontrolofZhishiDaozhiWan.

【Keywords】ZhishiDaozhiAurantiiFructusImmaturushesperidinHPLC

枳实导滞丸由枳实（炒）、大黄、黄连（姜汁炒）、黄芩、六神曲（炒）、白术（炒）、茯苓、泽泻组成，可以消积导滞，清利湿热。用于饮食积滞、湿热内阻所致的脘腹胀痛、不思饮食、大便秘结、痢疾里急后重。现收载于《中国药典》2010版一部，其标准含量测定采用薄层扫描法测定枳实中橙皮苷的含量[1]。我们摸索了以HPLC法代替薄层扫描法，方法简便快速，准确度和重现性较好，可以作为枳实导滞丸的质量控制方法。

1仪器与试药

仪器：岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，LC-10AT可变波长检测器（日本岛津公司），N2000色谱工作站（浙江大学）

试药：橙皮苷对照品（110721-200211，中国药品生物制品检定所），枳实导滞丸（吉林龙鑫药业有限公司）；缺枳实阴性样品：照枳实导滞丸工艺自制。

试剂：水为重蒸馏水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：SpherisorbODS（中国科学院大连化学物理研究所，4.6mm×200mm,5μm），WondasilC18（日本，4.6×150mm5μm）流动相：乙腈—水（21∶79）；流速：1mL•min-1；检测波长：284nm。理论板数按橙皮苷峰计不低于3000，分离度符合要求。按2.8项下方法制备枳实导滞丸枳实阴性样品,在此色谱条件下，枳实阴性样品溶液无干扰。（见图1）

图1HPLC图谱

a.橙皮苷对照品b.枳实导滞丸c.枳实导滞丸枳实阴性样品

Fig1.HPLCchromatogram

a.hesperidinb.samplec.negativesample

2.2对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品适量，加50%甲醇制成0.1mg•mL-1的溶液，作为对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

精密称取本品细粉约0.5g，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声提取30min（功率250W，频率40kHz），静置，放冷至室温，再称定重量，加甲醇补足减失重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液5mL至10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.4准确度试验

精密称取已知橙皮苷含量的枳实导滞丸供试品(橙皮苷含量为8.542mg•g-1)约0.25g，精密加入橙皮苷对照品溶液（0.3004mg•mL-1）5mL,照2.8项下方法提取,测定其中橙皮苷的含量,计算平均回收率为101.31%，RSD=0.82%（n=6），表明该方法准确度良好。

2.5精密度试验

2.5.1重复性试验取同批枳实导滞丸6份，照2.1～2.3项下方法操作，测定橙皮苷的含量。RSD=0.626%（n=6）,表明该方法精密度良好。

2.5.2中间精密度取同批枳实导滞丸细粉，3人用同一设备照含量测定项下方法操作，测定橙皮苷的含量,RSD=0.92%，中间精密度良好。

2.6线性关系

取橙皮苷对照品溶液（0.2008mg•mL-1）分别精密吸取2、4、6、8、10μL注入液相色谱仪中记录橙皮苷峰面积，以进样量为X(μg)，峰面积为Y，作线性回归方程Y==645106X-168,r=0.9996。结果，橙皮苷的进样量在0.4016μg～2.0080μg之间时与峰面积有良好的线性关系。

2.7耐用性考察

2.7.1提取方法考察

从枳实导滞丸中提取橙皮苷，考察了用甲醇加热回流（15分钟、30分钟）；超声波提取（15分钟、30分钟）；50%甲醇超声波提取（15分钟、30分钟）。结果表明，超声提取30min即可提取完全。

2.7.2色谱柱考察

分别考察了3种不同规格的色谱柱：SpherisorbODS（中国科学院大连化学物理研究所，4.6mm×200mm,5μm），WondasilC18（日本，4.6×150mm5μm），XDB-C18(美国安捷伦，4.6mm×150mm5μm)，结果橙皮苷均可基线分离，分离度稍有差异，含量测定结果的RSD为0.51%，所以选用RP-C18柱，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于3000即可。

2.7.3稳定性考察

取同一供试品溶液，分别于0、1、4、8、12小时测定峰面积，计算RSD%为1.7%。结果表明供试品溶液在12小时内稳定。

2.8枳实导滞丸样品含量测定

精密称取本品细粉约0.5g，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声提取30min（功率250W，频率40kHz），静置，放冷至室温，再称定重量，加甲醇补足减失重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液5mL至10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品各10μL,进样,测定,以外标法计算含量,结果见表1。

表1样品含量测定(n=3)

批号1234

含量mg/g5.9846.6687.14211.322

RSD(%)0.120.971.711.01

3讨论

3.1现行标准采用薄层扫描法测定橙皮苷的含量[1],方法简单快速,但是重现性和准确度较差。文献中采用HPLC测定橙皮苷的方法较多[2,3]，因此，我们对测定方法进行了改进,采用了HPLC法。枳实在枳实导滞丸中与大黄共为主药，攻下破气，排除积滞，积滞消除。有研究测定其中大黄素含量[4]。本文建立了另一主药枳实的含量测定方法，对本品的质量控制有实际意义。

3.2枳实中含有的辛弗林也是枳实的有效成分，文献也有研究[5][6]，但HPLC图谱拖尾严重，我们暂时没有找到合适的方法。

3.3试验了不同比例的流动相：乙腈-水（20∶80）、（18∶82）、（21∶79）、（22∶78）[2]、（25∶75）等，结果发现，用（21∶79）时，橙皮苷峰对称性和柱效都很好，分离度符合要求，各组分分离较好，通过加样回收和不同比例流动相，比较色谱图，可以认定橙皮苷峰为单一组分。

参考文献

[1]中华人民共和国药典委员会.中国药典（2010版第一部）[S].北京：化学工业出版社，2010：876.

[2]石焱、吴琼.高效液相色谱法测定枳实导滞丸中黄芩苷含量[J].解放军药学学报,2006，22（6）：474.

[3]李炜、张静云，等.消食颗粒中橙皮苷的HPLC法测定[J].陕西中医杂志，2001，22（10）：626.

[4]刘友平、宋英，等.枳实导滞浓缩丸质量标准研究[J].中国中药杂志，2002，27（11）：838.

[5]许妍、付辉政.RP-HPLC法测定枳实中辛弗林的含量[J].药品评价，2005年，（06）：125.

[6]于晓黎、林桂梅，等.正交法优选麸炒枳实最佳炮制工艺[J].中成药，2010，32（07）：1166.