酵母样真菌体外抗菌活性检测报告

陶萍

陶萍（湖北省荆州市第二人民医院湖北荆州434020）

【中图分类号】R978.5【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)04-0006-01

【摘要】本文旨在了解临床常见真菌对常用抗真菌药物的敏感性，为临床使用抗真菌药提供依据；对试剂盒的质量与适用性进行评价。

【关键词】酵母样真菌药物敏感性试验

随着抗生素和细胞毒药物的广泛使用，导致真菌尤其是酵母菌的感染日益增多，在免疫功能缺损者和AIDS患者中，真菌感染是最常见的并发症之一。本文以法国生物梅里埃公司生产的ATBFungus体外抗酵母菌药物敏感性试剂盒对临床分离的深部真菌予以试验研究，结果如下：

1材料和方法

1.1实验菌株为近年来从临床送检的痰咽拭子（45株）、生殖道分泌物（31株）、血（2株）等样本中分离的菌株，其中白色念珠菌55株，热带念珠菌15株，光滑球拟酵母10株，克柔氏念珠菌2株，近平滑念珠菌1株，高里氏念珠菌5株，未定型3株。

1.2ATBFungus试剂盒成分该试剂盒具有32个孔的塑料条，含6种抗真菌剂，即5—氟胞嘧啶（5—FC）、两性霉素B（AmB）、制霉菌素（NYS）、咪康唑（MIZ）、益康唑（ECO）和酮康唑（KET）。药物共占22孔，塑料条的前、中、后共有10孔为不含药的生长对照孔。

1.3标准参照株白色念珠菌ATCC90028为中科院皮肤病研究所馈赠。

1.4培养基ATBFungus试剂盒带有ATBF半液体培养基，实际上就是酵母氮源基础加天冬酰胺和葡萄糖培养基。

1.5缓冲液称取含3个结晶水的磷酸氢二钾157.5g，加水至100ml溶解pH9.8～10.0的缓冲液。

1.6方法按ATBFungus操作指南进行菌液制备及接种。

将纯菌落混悬于无菌蒸馏水中使其浓度为麦氏比浊管第２管，取100ul加入ATB培养基中混匀,再以微量加样器，取此菌液于5—FC的10孔及其前后各4个生长对照孔中,每孔135ul。取无菌缓冲液50ul加入剩余的含菌培养基中混匀。然后接种于余下各孔中，每孔亦为135ul。盖上塑料盖，置30℃孵育24～48小时后，以生长对照各孔生长良好而含药最高稀释孔不生长者为最小抑菌浓度的终点。

2结果

2.16种抗真菌药对91株酵母样真菌抑菌性测定结果

参照株的试验结果均在应测试浓度范围内，即5—FC2.0ug/ml，AmB＜lug/ml，NYS＜4ug/ml，MIZ＜1ug/ml，ECO＜1ug/ml，KET＜1ug/ml。

2.2耐药菌分布

交叉耐药情况：MIZ耐药11株，其中2株对ECO与KET亦耐药。另9株MIZ耐药者，对ECO为中介，8株对KET为中介。

耐药株的菌种差别：5—FC耐药者4株，其中热带念珠菌2株，近平滑念珠菌1株，光滑球拟酵母菌1株。MIZ耐药者11株，其中热带念珠菌8株，光滑球拟酵母菌3株，ECO与KET耐药2株中均为热带念珠菌。

3讨论

作者用法国生物梅里埃公司生产的ATBFungus试剂盒进行体外抗真菌药物敏感试验，取得了较好效果。

3.1ATBFungus试剂盒，每盒装25套，每套包括32孔含药塑料条、盛条的塑料底和盖、培养基和记录单等，普通试验室都能操作使用。得到纯菌后20分钟内即可将实验做完，放30℃孵育一般次日即可得出对6种药定量（AmB，5—FC）与定性（NYS、MIZ、ECO、KET）抑菌结果，使用方便，适于基层实验室。

3.2用该药盒对91株酵母菌药敏测定结果5-FC敏感率95.6%，AmB100%，NYS93.4%，MIZ80.2%，ECO81.3%，KET84.6%。咪唑类药物有交叉耐药，15株热带念珠菌有10株耐药，上述结果与临床观察雷同。

3.3抗真菌药敏试验目前有待解决问题仍然是缺乏适用于所有药物(至少是大多数药物)的统一判断标准,以及如何消除操作者之间在观察时的主观误差。为此pfaller等在实验中添加氧化还原指示剂Alamarblue，在观察结果时兰色不变指示真菌未生长，显红色则指示真菌生长，从而使终点观察和判断更为明显。

3.4以0.165mol/Lmops缓冲剂缓冲的RPMI1640培养基代替试剂盒酵母氮源培养基，其结果也甚理想。

3.5ATBFungus试剂盒不适于双相型真菌,如霉菌、皮炎芽生菌和荚膜组织浆菌的药敏测定。

参考文献

[1]钱小毛．体外抗真菌药物敏感试验研究进展．国外医学临床生物化学与检验学分册，1997，18（1）：14.