影响ＥＬＩＳＡ方法的因素与分析

李志斌１吴箫２吴衍芝３

李志斌１吴箫２吴衍芝３

（１．青岛市胶州中心医院山东青岛２６６３００）

（２．青岛市妇女儿童医院山东青岛２６６３００）

【中图分类号】Ｒ４４６【文献标识码】Ｂ【文章编号】１６７２－３７８３（２０１５）０６－０２０５－０１

【摘要】酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）是２０世纪７０年代发展起来的一种检测技术，其特异性强，灵敏度高，操作简单，在医学检验有广泛的应用，为辅助临床诊断起到了积极的作用［１］。但影响ＥＬＩＳＡ测定的因素较多，操作过程中每个环节都会对实验结果产生影响。现对影响实验结果的常见因素进行探讨分析：

【关键词】酶联免疫作用影响

１标本的保存与采取

ＥＬＩＳＡ检测大部分以血清为主。常规方法采集，避免溶血，溶血标本会增加非特异性显色。标本如有细菌污染，会产生假阳性反应，标本保存时间过长，使间接法的试剂本底加深。不完全抗凝的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性。

２试剂的准备

试剂在ＥＬＩＳＡ过程中决定着实验的成败。洗剂是来分离游离的和结合的酶标记物的，清除残留在板孔没能与固定相抗原或抗体结合物质及非特异性吸附的干扰物质洗剂下来。应严格按要求洗剂，洗板时各种试剂盒的洗液不要混用，洗液结晶应待其溶解后配制。板浸泡时间为４０ｓ左右，孔内液体吸收干净，防止洗液在孔内形成气泡。

３检测过程中各环节应注意事项

加样时，样本应加在板孔的底部，不要加在孔壁上部或溅出。

３．１样品少加或多加，都会引起本底增高。结缔组织病等病症时也会引起本底升高或假阳性［２］。另外，当溶血时，血红蛋白具有过氧化物酶的性质，可催化Ａ，Ｂ液显色而造成假阳性［３］。

３．２酶结合物的不正确加入。加在较高的孔壁上或孔口，也会引起本底升高或假阳性。

３．３保温

ＥＬＩＳＡ方法作反应时，两次抗原抗体反应一般在３７°Ｃ经１－２ｈ，产物的生成可达顶峰。避免蒸发，板上应加盖或用塑料贴封纸盖板孔，板不宜叠放。温育的温度和时间应力求准确。采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应，边上的值会偏高，应注意。

３．４显色和比色

四基联苯胺［ＴＭＢ］，经辣根过氧化酶［ＨＲＰ］作用后，约４０ｍｉｎ显色达高峰，终止后要在３分钟之内读数，否则强阳性会变低，酶标仪不应安置在阳光或强光照射下，操作时室温在１５－３０°Ｃ。仪器先预热１５－３０ｍｉｎ后，测度结果更稳定。

３．５温育

试剂盒升高反应的温度，会加快反应，增加时间会延长反应，也会引起阴性高值或假阳性。

培养箱高于３７0Ｃ，同样会引起高值阴性。

３．６洗板

试剂盒中提供的洗液应该稀释到规定的倍数使用，过多稀释洗液，会影响洗液的效果，而是反应的本底过高。稀释洗液的水应该是新鲜的蒸馏水。水中如果含有过多的钙离子，镁离子，这些离子会占用表面活性剂，影响洗剂效果。

４讨论

虽然ＥＬＩＳＡ操作步骤简单，但格环节都不可忽视。温育时间及温度、显色反应时间长短、试剂标本加入量、操作速度、洗板液的配置等各个方面都要严格操作规程，重视每一步操作细节，这样才能作出可靠的结果。

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