HPLC法测定一清颗粒中小檗碱的含量

吕会会张丽程楚

(山东罗欣药业集团股份有限公司山东临沂276017)

【摘要】目的：采用高效液相色谱法测定一清颗粒中盐酸小檗碱含量。方法:采用HPLC法，色谱柱：大连依利特HypersilODSC18柱（4.6mm×250mm；5μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺（42:58:0.1）；检测波长为345nm；流速:1.0mL/min柱温为室温。结果：小檗碱对照品进样量在3.9～62.4μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，小檗碱线性方程为y=38260x+13989，r=0.9996,平均回收率为97.23%～101.94%，RSD=0.79～1.99%；结论:HPLC法测定一清颗粒中盐酸小檗碱含量,操作简单，结果准确,方法重现性好。

【关键词】一清颗粒；HPLC；小檗碱；含量测定

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）01-0324-01

一清颗粒是中药复方制剂，由黄连、大黄、黄芩3味重要组成，具有清热泻火、化瘀凉血作用。临床上主要用于火毒血热所致的身热烦躁、目赤口疮、咽喉牙龈肿痛、大便秘结；咽炎、扁桃体炎等[1]。为了严格控制制剂质量，采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量，为该制剂的生产提供质量控制依据。

1.提取方法的选择

超声波提取效率高，超声波独具的极端物理特性，能促使植物组织破壁或变形，使中药有效成份提取更充分[2]。超声波提取温度低，超声波提取中药材的最佳温度在40～60摄氏度，因此不需要配备锅炉来提供蒸气加热，有利于节约能源和改善环境污染。更重要的是对遇热不稳定、易水解或氧化的药材中的有效成份具有保护作用。超声波提取的药液杂质少，有效成份易于分离、纯化。超声波提取简单易行，设备的维护和保养方便。所以参照《中国药典》2005年版一部黄柏项下盐酸小檗碱的含量测定方法，以流动相做为溶剂，采用超声提取的方法提取一清颗粒样品中的盐酸小檗碱。

2.色谱条件的参考

江汉美[3]等建立高效液相色谱法测定不同工艺的一清颗粒中盐酸小檗碱含量的方法。具体方法为：采用HPLC法，固定相为InertsilC18柱，流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(含0.2%三乙胺)(40∶60)，测定波长为352nm，通过实验可知，在此色谱条件下小檗碱的分离效果显著。谢秉湘[4]等应用高效液相色谱法同时测定一清颗粒中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量，色谱条件为安捷伦Eclipse-XDB-C18柱(4.6×250mm)；流动相：甲醇：0.2%磷酸：三乙胺(42∶58∶0.1)，检测波长：265nm，流速：1.0mL.min-1，柱温：35℃。在上述色谱条件下，按盐酸小檗碱计算理论塔板数大于5000，可取得良好的分离效果。通过参考文献本实验选择：色谱柱：大连依利特HypersilODSC18柱（4.6mm×250mm；5μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺（42:58:0.1）；检测波长为345nm；流速：1.0mL/min柱温为室温为实验条件。

3.色谱条件的选择

流动相的选择：文献报道HPLC法测定一清颗粒中盐酸小檗碱的流动相，分别用甲醇---乙腈---0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液为流动相并调流速进行分析，结果发现色谱峰较宽且阴性有干扰；当流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺（42:58:0.1）时流动相色谱峰的峰形及结果的重现性均很好，与其它成分达到有效分离且阴性对照无干扰，故确定流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺（42:58:0.1）。流动相比例的选择：因甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺比例不同分离度同。故分别按甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺分别为（80:20:0.1），（75:25:0.1），（42:58:0.1）比例进样，得色谱图。当甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺（80:20:0.1）时，各信号峰的保留时间较长，分离效果差；当甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺（75:25:0.1）时，各信号峰的保留时间稍短但分离效果差；当甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺（42:58:0.1）时发现在本文条件下分离效果好，出峰时间短。所以本次实验所用流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液-三乙胺（42:58:0.1）。

4.检测波长的选择

取盐酸小檗碱到照品溶液，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录OA)，在200～400nm波长范围内进行扫描，结果盐酸小紧碱在345nm处有最大吸收，故取345nm作为HPLC法测定一清颗粒中盐酸小檗碱含量的检测波长，方法可行，分离度较高。

5.结论

综上所述，本实验中采用超声波提取制备供试品溶液，通过实验表明文中的供试品溶液制备方法能把供试品中的盐酸小檗碱完全提出，且具有分离效果好、杂质峰少的优点。本方法简便、快捷、结果准确可靠，可作为该制剂中盐酸小檗碱的含量测定方法。

【参考文献】

[1]胡佳，钱立立.HPLC法测定一清颗粒总黄芩苷的含量[J].黑龙江医药，2010，23(1):10-11.

[2]郭志雄.超声波连续逆流提取在中药生产中的运用[J].医药工程设计，2012，33(4):38-42.

[3]江汉美，卢金清，冯小路等.HPLC法测定不同工艺的一清颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].湖北中医杂志，2010，32(11):62-64.

[4]谢秉湘，李志梅.高效液相色谱法同时测定一清颗粒中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J].海峡药学，2010，22(6):52-53.