亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与原因不明复发性流产的相关性研究

郭碧辉

郭碧辉

(惠州市第二妇幼保健院广东惠州516001)

【摘要】目的：探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因多态性与原因不明复发性流产（URSA）的相关性。方法：运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）检测62例URSA（复发性流产组）及59例正常对照组MTHFRC677T基因多态性，并进行对照分析。结果：复发性流产组病人总的突变T等位基因显著高于对照组（P＜0.05）。复发性流产组MTHFRC677T基因型C/C、T/C、T/T基因型频率分布与对照组比较，差异显著（P＜0.05）。复发性流产组T等位基因型频率为53.23%，高于对照组（P＜0.05）。结论：MTHFR基因多态性与URSA发病具有明显的相关性。

【关键词】自然流产；基因；MTHFR

【中图分类号】R714【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）23-0153-02

复发性流产(RSA)临床又称为原因不明复发性流产(URSA)[1]，文献报道[2]，URSA的发生与人体血液呈高凝状态有关。而MTHFR的突变会引起机体酶活性下降，导致叶酸水平降低，DNA低甲基化，从而导致血浆Hcy浓度的升高，发生凝血。所以，探讨分析MTHFR基因多态性与URSA相关性研究意义重大。本研究初步探讨了MTHFR基因多态性与URSA的相关性，现报道如上。

1资料与方法

1.1资料

选取2014年1月至12月收治的62例URSA。纳入标准：非孕期；年龄18～40岁；符合下列条件：①自然流产≥2次；②患者及其丈夫外周血染色体核型均无异常；③无生殖器畸形；④无静脉血栓疾病史；对本研究知情同意。排除标准：伴恶性肿瘤者或肝、肾急慢性疾病；内分泌功能正常；不能进行正常沟通交流者。对照组选取同期年龄、文化程度、分娩史等信息与复发性流产组相匹配的健康人59名为对象，且对照组受试者要符合：有≥1次正常生育史；无流产、胎死腹中、胎盘栓塞及宫内窘迫等病史。2组受试者基本资料具有可比性。

1.2仪器

采用美国珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司生产的DNA扩增仪，DNA提取试剂盒由中国科学院北京基因组研究所提供。TaqDNA聚合酶、dNTP、HinfⅠ核酸限制性内切酶、MboⅡ核酸限制性内切酶，均购于上海索莱宝生物科技有限公司。MTHFRC677TPCR引物依据参考文献[3]提出的序列，由美国ABI公司产品供给。

1.3方法

1.3.1标本采集及处理

二组受试者均于入组次日清晨空腹抽取静脉血2ml与ED-TA抗凝血2ml，充分混合后备用。

1.3.2DNA的提取

严格按试剂盒操作说明书中规定的操作步骤进行。

1.3.3MTHFRC677T基因片段扩增

采用PCR-RFLP，参考文献[4]进行MTHFRC677T基因片段扩增。

1.3.4MTHFRC677T突变的检测

限制性内切酶HinfⅠ酶切扩增产物，应用6%的聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳检测。

1.4统计学处理

数据采用SPSS14.0统计学软件进行处理，检验水准=0.05。

2.结果

复发性流产组总的突变T等位基因显著高于对照组（P＜0.05），且MTHFRC677T基因型C/C、T/C、T/T基因型频率分布与对照组比较，差异显著（P＜0.05）。复发性流产组T等位基因型频率为53.23%，高于对照组30.51%（P＜0.05）。

注：*P＜0.05

3.讨论

MTHFR基因位于染色体1q36.3位点，目前国内外和试验研究表明，在已发现的MTHFR基因突变类型中，其有15种点突变类型，其中最重要的是MTHFR677位点上的突变，即C677T突变。该位点C等位基因突变为T等位基因，使原编码丙氨酸突变为缬氨酸，从而可对酶的热敏感性发挥作用，降低酶的敏感性，进而导致5-甲基四氢叶酸含量下降，血浆中同型半胱氨酸含量提升，生成较多的过氧化物和氧自由基，进而抑制血管内皮细胞合成和释放NO，导致内皮细胞受损，血管功能障碍。高同型半胱氨酸水平还可激活凝血因子XII和V，使抗凝血因子III、IV失活，导致凝血的发生；同时还可抑制和干扰内皮细胞对硫酸肝素的合成，明显减弱其抗凝作用，使凝血与纤溶系统失衡，致命机体处于血栓前状态，易导致动脉粥样硬化、动脉血栓等并发症。

URSA的发病原因极其复杂，目前尚不能完全解释其发生因素。近年来，有大量的文献报道，流产发生与蜕膜绒毛缺血性坏死具有一定的相关性。MTHFR缺陷导致同型半胱氨酸向甲硫氨酸转化受阻，引发同型胱氨酸血症。本研究发现，复发性流产组总的突变T等位基因显著高于对照组（P＜0.05）。复发性流产组MTHFRC677T基因型C/C、T/C、T/T基因型频率分布与对照组比较，差异显著（P＜0.05）。复发性流产组T等位基因型频率为53.23%，高于对照组（P＜0.05），表明MTHFR基因的多态性可能是诱发URSA的风险因素，值得我们进行更深入的研究。

【参考文献】

[1]尹璐,吕永刚.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与自然流产的相关性分析[J].吉林医学,2012,33(21):4520-4521.

[2]李俊华.5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究[J].中国医药导报,2014,11(29):11-14.

[3]韩红敬,沈淀,王艳核等.亚甲基四氢叶酸还原酶基因677位多态性、高同型半胱氨酸血症与复发性流产[J].生殖与避孕,2012,32(7):477-478.

[4]张艳丽,鲁衍强,李华锋等.临沂市汉族女性MTHFR和MZRR基因多态性分布及其与同型半胱氨酸水平的相关性[J].中华医学遗传学杂志,2012,29(6):705-706.