寿胎丸对反复自然流产患者T淋巴细胞亚群Th17/Treg失衡及妊娠结局的影响

何冬梅1李江滨2郭晓燕1杨丽梅2蔡梦珊2

何冬梅1李江滨2郭晓燕1杨丽梅2蔡梦珊2

（1惠州市中医医院广东惠州516001)

(2广东医学院广东东莞523808）

【摘要】目的观察寿胎丸对反复自然流产（RSA）患者T淋巴细胞亚群Th17/Treg失衡及妊娠结局的影响，探讨其在治疗反复自然流产中的机制。方法采集RSA患者和正常妊娠妇女外周血各30例，RSA患者采用寿胎丸进行治疗，治疗前后用流式细胞术检测Th17和Treg细胞比例，并评价其疗效。结果RSA妊娠组经寿胎丸治疗后，治愈率40%，好转率50%，未愈率10%，最终足月分娩率83.3%；正常早孕组足月分娩率96.7%。RSA妊娠组经寿胎丸治疗后与治疗前比较，外周血中占Th17细胞占CD4+T细胞的比例显著降低（P<0.01），而Treg细胞占CD4+T细胞的比例显著升高（P<0.01），且与正常妊娠组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论纠正TH17/Treg细胞平衡失调可能是寿胎丸治疗RSA的机制之一。

【关键词】寿胎丸反复自然流产IL-17Treg

【中图分类号】R285.6【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）12-0104-02

寿胎丸源自清代名医张锡纯的《医学衷中参西录》，临床研究表明寿胎丸是治疗反复自然流产（RSA）的有效中药复方，目前在临床上常用的速孕保胎灵、速效保胎灵等药，即是以寿胎丸为基本方加味制成。目前国内外对寿胎丸的中药药理机制研究主要集中在对T淋巴细胞亚群Th1/Th2平衡偏移的纠正作用。本课题组之前的研究表明，寿胎丸可纠正Th1/Th2平衡偏移，从而降低母胎免疫排斥，起到防治流产的作用[1-3]。而寿胎丸是否对T淋巴细胞亚群Th17/Treg平衡也有纠正作用，国内外尚未见报道。本研究拟通过临床试验探讨寿胎丸对反复自然流产患者外周血Th17及Treg细胞比例的影响，探讨纠正Th17/Treg失衡是否是寿胎丸治疗反复自然流产的机制之一。

1材料与方法

1.1寿胎丸汤剂：将菟丝子20g、桑寄生10g、续断10g三味中药混和，冷水600mL浸泡30min，文火煮取200mL，纱布滤过，得药液；将残渣加入冷水600mL，文火再次煮取200mL，纱布滤过，得药液；合并两次药液，阿胶10g烊化其中，分两等分（早晚分服）。

1.2临床疗效观察

将病人分为2组，每组30人，分别为RSA妊娠组（妊娠12周内，有RSA病史）和正常早孕组（妊娠12周内，无自然流产史。）。其中RSA妊娠组给予寿胎丸治疗,每日一剂，水煎服。治疗时间4周以上，有自然流产史患者治疗超过以往流产时间。抽取各组人群肝素抗凝的外周血备用。其中RSA妊娠组在寿胎丸治疗前和治疗后各抽一次血，并观察疗效。

RSA妊娠组纳入标准：①符合中西医关于反复自然流产诊断标准。②育龄期女性。③孕周小于12周。排除标准：①不符合诊断标准和纳入标准者；②有明显兼夹证或合并症者；③内分泌失调、感染、生殖道异常；④合并有心肝肾和造血系统严重疾病、精神病患者；⑤未按规定服药，无法判断疗效或资料不全等影响疗效判断者。

疗效标准：参照《中医病症诊断疗效标准?胎漏、胎动不安》评定疗效。治愈：血止胎安，兼症消失，观察2周后，各项检查证实正常妊娠；好转：漏红减少，兼症改善，各项检查为正常妊娠；未愈：出血不止，甚至堕胎流产，或胎死腹中。

1.3T淋巴细胞亚群Th17/Treg检测

按文献[4]方法，上述外周血采用Ficoll法（聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法）提取外周血单个核淋巴细胞（PBMC），采用流式细胞术分析各样本T淋巴细胞中Th17和Treg细胞比例。

2结果

2.1疗效观察

参照《中医病症诊断疗效标准?胎漏、胎动不安》评定疗效，RSA妊娠组经治疗后，治愈12人，治愈率40%，好转15人，好转率50%，未愈3人，未愈率10%，最终足月分娩25人，占83.3%；正常早孕组足月分娩29人，占96.7%。

2.2T淋巴细胞亚群Th17/Treg检测

RSA妊娠组经寿胎丸治疗后，与RSA妊娠组治疗前比较，外周血中占Th17细胞占CD4+T细胞的比例显著降低（P<0.01），而Treg细胞占CD4+T细胞的比例显著升高（P<0.01），且与正常妊娠组比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1寿胎丸对RSA组外周血中Th17、Treg细胞的影响（x-±s，n=30）

3讨论

反复自然流产（recurrentspontaneousabortion，RSA），又称习惯性流产，是指连续发生2次及2次以上的自然流产，在中医上属于滑胎的范畴，是妊娠期最常见的并发症之一，发病率为2％。反复自然流产80%以上原因不明，而在不明原因反复自然流产患者中，免疫因素占80%以上。胚胎可看作是具有父方50%遗传物质的同种自然移植物，具有同种异体移植及自体移植的双重特性。胎儿不被母体排斥并可在子宫内发育成熟，母体必须形成免疫耐受。若母体免疫平衡失调，排斥作用增强，则可能引起流产[5]。初始CD4+T淋巴细胞接受抗原刺激信号后在不同的条件下可分化成不同亚型的T淋巴细胞，包括Th1、Th2、Th17，以及Treg细胞，执行不同的生物学功能[6]。CD4+T细胞的两个新亚型Th17和Treg是近年来的研究热点。最新研究报道正常早孕患者外周Treg细胞数目增多，而Th17细胞处于较低水平，维持着一定平衡状态。同时在反复自然流产病人外周血和蜕膜中均观察到Th17/Treg平衡发生偏移，Th17细胞增多而Treg细胞减少。说明Th17/Treg平衡向Treg方向偏倚，则有利于妊娠的维持，一旦平衡打破，Treg降低，而Th17升高，将会可能导致流产的发生[7-9]。

寿胎丸的药物组成为：炒菟丝子120克，桑寄生、川断、阿胶各60克，主要功能是补肾安胎，方剂配伍重用菟丝子补肾益精，壮胎元以安胎，以为君药[3]。桑寄生强筋骨，能养血，使胎气强壮。川断也是补肾之药，与桑寄生共为臣药。上述三味同用能使肾气旺盛，精血充沛，自能固胎。再兼阿胶补血，使血脉安伏以养胎安胎。综合全方，四药共奏补肾养血、固摄安胎之效。药味虽简，然配伍严谨，不腻不燥，乃平补之剂。本研究进一步表明了寿胎丸降低母胎免疫排斥，防治自然流产的机制除纠正Th1/Th2平衡偏移外，也对Th17/Treg平衡有纠正作用。

参考文献

[1]尤昭玲,刘慧萍,雷磊等.寿胎丸对自然流产模型小鼠母胎界面TNF-α和IL-4表达的影响[J].中国中医药科技,2009,16(2):136-137

[2]何冬梅,尤昭玲,赖毛华等.寿胎丸对反复自然流产小鼠母胎界面CD4+T细胞STAT信号转导途径的影响[J].中国中医药信息杂志,2010,17(1):23-25

[3]何冬梅,尤昭玲,雷磊.寿胎丸治疗习惯性流产研究进展[J].中医药导报,2008,14(12):81-83

[4]吴莉.URSA患者外周血中Th17/Treg细胞的平衡及Th17细胞在母胎界面中的表达研究[D].合肥：安徽医科大学，2009

[5]PandeyMK,RaniR,AgrawalS,etal.Anupdateinrecurrentspontaneousabortion[J].ArchGynecolObstet,2005,272(2):95-108

[6]SallustoFetal.HeterogeneityofCD4+memoryTcells:functionalmodulesfortailoredimmunity.EurJImmunol,2009,39:2076-2082

[7]KornT,BettelliE,OukkaMetal.IL-17andTh17cells[J].AnnuRevImmunol,2009;27:485-517.

[8]AfzaliB,LombardiG,LechlerRIetal.TheroleofThelper17(Th17)andregulatoryTcells(Treg)inhumanorgantransplantationandautoimmunedisease[J].ClinExpImmunol,2007;148(1):32-46

[9]蒋艳萍,曹来英,洛若愚.Th17细胞和Treg细胞与不明原因复发性流产的关系.武汉大学学报（医学版）,2011,32（6）:773-777