滇丹参中丹酚酸B提取及纯化工艺研究

周玉会

哈药集团三精制药150000

摘要：目的：通过提取工艺研究实验，对滇丹参中丹酚酸B的提取与纯化方法进行研究，选出最合适的工艺方法。方法：本次工艺提取与纯化情况研究选用的工艺指标主要是滇丹参之中的丹酚酸B的基本含量，通过正交试验的方法将滇丹参药材中的可提取的丹酚酸B进行提取，并进一步纯化。结果：完成提取工艺研究试验后，确定最为合适的提取条件如下：在8倍水量的条件之下，煎煮2次，每次持续一个小时，精选絮凝沉降剂，ZTC1+1是最佳选择，药液的基本浓度需要被控制在1g/5mL，絮凝剂的使用量要控制在A：B=2：4，搅拌速度需要达到每分钟100r，在这种条件下，获取的丹酚酸B成分的含量是最高的。结论：在提取与纯化滇丹参中的丹酚酸B成分的时候，可以应用絮凝澄清的提取方法来制作水提液，这种方法需要使用的提纯液用量相对比较节省，不会造成污染。

关键词：滇丹参；丹酚酸B；提取；纯化；工艺研究

滇丹参是一种中药，主要是云南鼠尾草这种植物的根，在我国的贵州、四川以及云南等地生长，作为重要具有多种药效，不仅仅可以对红肿部位进行消肿与解毒，同时还可以达到止血以及祛瘀的效果，一些中医也会应用这种药材来使患者安神养心。基于这种药材的这几种功效，中医经常会将其应用于对几种妇科疾病进行治疗，包括月经不调、经闭以及异常痛经的问题，对于健忘失眠以及关节痛等其他种类的疾病也有相对比较好的治疗效果。医疗人员还会对其具有的抗凝血功能进行应用，使患者的冠脉流量增加。而丹酚酸B是滇丹参的重要成分之一，其具有的丹酚酸B不仅有含量高的优势，同时还具有极强的活性，可以起到抗氧化的应用效果，还能对自由基进行清除。但是提纯这种丹酚酸B的时候，常常会出现，纯度不够、污染提纯环境等问题。本文合理的对提纯方法和纯化工艺进行研究和分析。

1材料与方法

1.1材料

Waterse2695型高效液相色谱仪；FB124型电子分析天平；SK250HP型超声提取器。丹酚酸B对照品；滇丹参；ZTC1+1天然澄清剂；乙腈、甲醇为色谱纯；水为去离子水；其它试剂均为分析纯。

1.2方法

1.2.1测定提取物的含量

对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加75％0甲醇制成每1mL含0．192mg的溶液，即得。色谱条件：Agilent—C18色谱柱（O4．6lTlm×2501TlIn，5m）；甲醇一乙腈一甲酸一水体积比（26：9：l：64）为流动相；柱温：35℃；检测波长：286nnl；流速：0．8mL／min；理论塔板数按丹酚酸B计不低于2000。

1.2.2考察相关线性关系

分别精密量取丹酚酸B对照品溶液4、6、8、10、12、14μL，在上述色谱条件下依次进样测定。以峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样量为横坐标进行线性回归，得到回归方程为Y=895054x-68669，相关系数r=0．9999。结果表明丹酚酸B进样量在0．768～2．688μg范围内与峰面积呈现良好线性关系。

1.2.3选择提取溶剂

将药材分别称取4份，每份均为40g，将不同浓度的乙醇提取溶剂当做溶剂，将8倍量的基础溶剂加入其中，经过1.5小时之后，将溶液过滤，对其滤渣继续提取，提取时间缩短30分钟。

合并滤液，浓缩并定容到500mI，用微孔滤膜（0．45um）过滤，精密吸取10mL溶液，注入液相色谱仪，测定丹酚酸B的含量，结果分别为2．18%、2．45%、2．37%、2．09%。表明30%乙醇提取含量最高，但以水为溶剂时，与30%乙醇提取率相差不大，因考虑实际生产的需要，故以水为提取溶剂。

称取药材9份，每份20g，按照正交实验表进行试验，滤液浓缩并定容到500mL，用微孔滤膜（0．45μm）过滤，精密吸取溶液10μL，注入液相色谱仪，测定。

1.2.4纯化工艺分析

经过预实验，发现丹酚酸B在60℃时絮凝效果较好，故以60℃为絮凝温度，采用正交试验对絮凝澄清工艺的主要工艺参数进行优化。选择药液浓度、ZTC1+1絮凝剂加入量、搅拌速度3个主要影响因素进行考察，以丹酚酸B含量作为评价指标，用L934正交表安排试验方案。

按上述最佳提取工艺提取药材，按正交试验设计浓缩至不同浓度，分别量取9份浓缩药液，每份50mL，在60℃时，加入4HlL的1B组分溶液用相应的旋转速度搅拌15min，保温1h，搅拌3min，然后每隔30min左右搅拌3min；1h后，于6O℃温度恒温搅拌下，分别加入1%A组分黏胶液搅拌3min，保温15min，离心过滤，精密量取1rnL定容至100mL，用0．45μm的微孔滤膜滤过，测定丹酚酸B含量。

2结果

根据直观分析结果表明，滇丹参的最佳水提工艺为8倍量水，提取3次，每次1h，即A2B1C3。由于提取3次和2次的结果相差不大，为了节约成本，将工艺定为8倍量水，提取2次，每次1h，即A2B1C2。

提纯结果见表1～表2。由直观分析可知，影响絮凝澄清的因素顺序为：药液浓缩比>絮凝剂组分比>搅拌速度，最佳工艺组合为A1B1C2。方差分析显示，药液浓度对精制工艺具有显著性影响。

3讨论

根据以往提取丹酚酸B之这一成分的经验来看，难以达到提取工艺要求的主要原因在于丹酚酸B在特殊的水提液之中，会展现出不稳定的存在状态，一些客观性的因素也会影响到提取效果，包括提取工作耗费的时间过程，同时温度偏高也会影响到药品含量。提取人员要着重考虑该成分存在的降解问题。

而根据本次提取工艺研究实验的研究成果可以发现，当药液的浓缩比达到1：5的时候，可以使丹酚酸B成分的基本保留率达到最高的程度，当药液的浓度变稀，提取成分的含量也会逐渐降低。本次实验选用的絮凝澄清试剂是ZTCI+1，这种试剂可以与溶液之中的蛋白质、胶质出现共沉的现象，其并不具有毒性，可以确保提取工艺的安全性能，同时也不会对提取溶液之中的有效成分产生影响。与传统的水提纯工艺相比，借助乙醇进行提纯可以将提取目标的含量提升，比较适合当前的药材生产工作，还能缩减生产周期，将原有的生产成本降低。

参考文献：

[1]牛志刚.（2016）.滇丹参中丹酚酸b提取及纯化工艺研究.东方食疗与保健（6）.

[2]彭宗根，&蒋建东.（2011）.滇丹参的抗hiv-1多酚类成分.中药制剂新工艺、新技术与产品质量控制研究高级研讨会.

[3]熊加伟，葛松兰，&马磊.（2017）.丹参中丹参酮iia和丹酚酸b的提取与纯化工艺研究.天然产物研究与开发（8），1396-1402.

[4]方艳，王丽，王家金，陈美兰，石亚娜，&季鹏章等.（2014）.丹参在云南昆明引种栽培研究.中国现代中药，16（10），829-833