HPLC法测定米力农及注射用米力农的有关物质

王爱华1吴雨川1杜霞2白政忠1

王爱华1吴雨川1杜霞2白政忠1（1.黑龙江省食品药品检验检测所黑龙江哈尔滨150088；2.哈尔滨理工大学黑龙江哈尔滨150080）

【摘要】目的建立HPLC法测定米力农及注射用米力农中的有关物质。方法采用DiamonsilC8（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，以磷酸氢二钾溶液（取磷酸氢二钾2.7g，加水800ml溶解后，加三乙胺2.4ml，用磷酸调pH值至7.5）—乙腈（80：20）为流动相；检测波长为220nm。结果在选定的色谱条件下，主峰与其他各杂质峰均能良好的分离。结论：本方法专属性强，灵敏度高，可用于测定米力农及注射用米力农中的有关物质，为质量标准的修订提供了依据。

【关键词】米力农；有关物质；高效液相色谱法【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-9753（2016）4-0277-01

米力农为磷酸二酯酶抑制剂，为氨力农的同类药物，作用机理与氨力农相同。口服和静注均有效，兼有正性肌力作用和血管扩张作用。但其作用较氨力农强10～30倍，耐受性较好[1]。

文采用高效液相色谱法测定了有关物质，可有效检测产品中的杂质量，为产品的质量控制和标准的提升提供了参考和依据。

1仪器与试药1.1仪器Aglient1100高效液相色谱仪（Aglient公司）；酸度计（梅特勒公司）；电子天平（梅特勒公司）。

1.2试药米力农（批号120103，110501）和注射用米力农（批号072111001，规格为5mg）分别由国内某二个药业有限公司提供。

米力农对照品（中国药品生物制品检定所，批号101065-201001；含量99.0%）；米力农杂质A对照品（中国药品生物制品检定所，批号101066-201001）磷酸二氢钾（分析纯，国药集团化学制剂有限公司）；乙腈（色谱纯，美国TEDIA公司）；三乙胺（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司）；磷酸（色谱纯，FLUKA公司）2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DiamonsilC8色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），柱温30℃；以磷酸氢二钾溶液（取磷酸氢二钾2.7g，加水800ml溶解后，加三乙胺2.4ml，用磷酸调pH值至7.5）—乙腈（80：20）为流动相。

流速为1.0mL·min-1，检测波长220nm。进样量20μL。

2.2样品溶液的配制2.2.1供试品溶液的配制分别精密取原料和注射剂适量，加流动相溶解并稀释制成2mg·mL-1的米力农溶液（必要时，在80℃水浴中加热使溶解），作为供试品溶液。

2.2.2自身对照溶液的配制精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液1ml，置10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为自身对照溶液。

2.2.3米力农杂质A对照溶液的配制精密取米力农杂质A[1,6-二氢-2-甲基-6-氧代-（3，4'-二吡啶）-5-酰胺]对照品适量，精密称定，用流动相溶解并制成2?g·mL-1的溶液，作为米力农杂质A对照溶液。

2.2.4系统适用性溶液米力农对照品与米力农杂质A对照品适量，用流动相溶解并稀释制成各含20?g·mL-1的溶液，作为系统适用性试验溶液。

2.3系统适用性溶液考察在这个液相色谱条件下，米力农杂质A与米力农的相对保留时间约为0.6，要求米力农杂质A峰与米力农峰的分离度应大于4.0，连续进样5次，米力农峰面积的RSD应不小于5.0%；取有关物质项下的系统适用性溶液，连续进样5次，分离度为11.66（见图1），连续进样5次，米力农峰面积的RSD为0.5%。

2.4专属性考察取米力农原料约50mg，平行5份，分置25mL量瓶中，分别加入6mol·L-1盐酸溶液3mL、6mol·L-1氢氧化钠溶液3mL、30%过氧化氢溶液5mL，于140℃烘箱中放置6小时；光照破坏为在4500Lx条件下放置48小时，在上述酸、碱破坏的样品溶液分别加入等量碱、酸溶液中和，用流动相稀释至刻度，照“2.1”项下色谱条件，各进样20μL，记录色谱图。

结果表明：试验结果表明，酸破环、碱破坏、氧化破坏、高温破坏及光照破坏，均能破坏出米力农杂质A，空白溶剂无干扰，米力农主峰与各分解产物峰分离良好，说明本法适用于米利农及其有关物质的分离测定。

2.5米力农杂质A线性关系精密称取米力农杂质A10.06mg，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取贮备液适量，用流动相稀释制成浓度分别为2.012、5.080、10.06、20.12、80.48、100.6?g/ml的溶液，按“2.1”项下条件测定，记录色谱图，以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，回归方程为：A=78.07C+1.16，r=0.9999，表明米力农杂质A浓度在2.012~100.6μg?mL-1范围内与峰面积线性关系良好。

2.6米力农杂质A检测限和定量限取“2.6”项下线性最低浓度溶液，逐步稀释，测得米力农的最低检测限为0.0995μg·mL-1（S/N≈3），定量限为0.2985μg·mL-1（S/N≈10）。

2.7米力农杂质A精密度试验照“2.1”项下色谱条件，取“2.5”项下浓度为20.12μg·mL-1的溶液连续进样6次，其RSD为0.4%（n=6）。

2.8溶液的稳定性取“2.2”项下的方法制备供试品溶液和米力农杂质A对照品溶液，分别于室温放置0、1、2、4小时后进样，计算米力农主峰面积、米力农杂质A主峰面积和其他杂质总量的RSD，结果米力农主峰面积、米力农杂质A主峰面积和其他杂质总量的RSD分别为0.4%、0.5%和1.4%，表明供试品溶液在4小时内基本稳定。

2.9样品测定结果经检测，原料与注射剂中杂质A的量分别为0.04%与0.08%，其他杂质总量分别为0.08%和0.3%。

3讨论米力农原料及注射用米力农有关物质原来采用不同的色谱方法，并且注射用米力农未对米力农杂质A进行单独控制，本文参考《美国药典》[2]米力农原料标准，制定了米力农及其注射剂有关物质标准，对米力农特有杂质A和其他杂质分别进行了控制，更能保证米力农及其注射剂的质量。

参考文献[1]李艳，冉照芹.米力农治疗扩张型心肌病重度心力衰竭的临床观察［J.中国实用医药，2009,4(8):181-182[2]美国药典[S].32版：2983-2984